新月彎孢菌毒素的作用及玉米花藥培養(yǎng)的研究.pdf

1、玉米是世界上主要的谷類作物，是重要的飼料、糧食和化工原料作物。近幾年，由新月彎孢菌(Curvularia lunata(Walk.) Boed）引起的玉米彎孢菌葉斑病在華北和東北地區(qū)發(fā)生相當(dāng)嚴(yán)重，給玉米產(chǎn)量帶來了極大損失?？共∮N是防治玉米彎孢菌葉斑病經(jīng)濟(jì)有效的措施之一，深入了解玉米彎孢菌葉斑病致病機(jī)理，利用其致病因子在實(shí)驗(yàn)室初步篩選抗病品種，可以為抗病育種提供理論依據(jù)。單倍體育種可以大大縮短育種年限，快速得到純合體，但是單倍體育種存在

2、著花藥誘導(dǎo)率低的問題。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)新月彎孢菌毒素的制備及玉米花藥培養(yǎng)的初步研究，可以為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)利用毒素脅迫玉米愈傷組織來快速得到抗病玉米品種奠定基礎(chǔ)。
　　 本文包括四大部分:一.新月彎孢菌毒素的制備、二.新月彎孢菌毒素理化性質(zhì)的測(cè)定及致病力的研究、三.玉米抗彎孢菌葉斑病機(jī)制的初探、四.玉米花藥培養(yǎng)的研究
　　 本實(shí)驗(yàn)中毒素最佳培養(yǎng)體系為:新月彎孢菌在PDA培養(yǎng)基活化7d后，在pH5.5的改良Fries液體培養(yǎng)基中連續(xù)振

3、蕩培養(yǎng)15d（轉(zhuǎn)速為120r/min，溫度為25℃）。在不要求毒素具體成分的時(shí)候，可以采用紗布過濾法提取毒素，這種方法簡(jiǎn)單且效果好。菌種保存時(shí)間長(zhǎng)會(huì)降低其致病力，新采集的菌種的活性及致病力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于保存半年的菌種。
　　 稀釋范圍在0倍到200倍的毒素均可以明顯抑制各自交系種子萌發(fā)，但是稀釋倍數(shù)過低，毒素選擇壓力過大，不容易篩選出抗病品種，本實(shí)驗(yàn)中最經(jīng)濟(jì)高效的稀釋倍數(shù)為200倍。用毒素處理不同自交系的種子，發(fā)現(xiàn)種子萌發(fā)率與其抗病性

4、呈正相關(guān)，毒素脅迫下，品種抗病性越強(qiáng)，其種子萌發(fā)率越高，胚根及胚芽長(zhǎng)度也相對(duì)較長(zhǎng)。通過本實(shí)驗(yàn)，毒素脅迫下的種子萌發(fā)情況可以作為一種簡(jiǎn)單的室內(nèi)初步鑒定玉米品種對(duì)玉米彎孢菌葉斑病抗性的指標(biāo)。
　　 玉米自交系抗病性與PAL和POD的酶比活性呈正相關(guān)，表現(xiàn)為玉米自交系抗病性越強(qiáng)，其酶峰出現(xiàn)越早，在同一毒素濃度下的峰值越高。但玉米自交系抗病性與SOD酶活呈負(fù)相關(guān)，抗病自交系的SOD酶活性低于感病自交系，且峰值出現(xiàn)的毒素濃度較低，這可能與

5、過氧化物引起寄主抗性表達(dá)有關(guān)。
　　 玉米基因型對(duì)花藥反應(yīng)率影響很大，不同基因型的玉米花藥在誘導(dǎo)后，反應(yīng)率明顯不同，大體趨勢(shì)為雜交種優(yōu)于自交系。取材最佳時(shí)期為小孢子處于單核中期時(shí)，接種前要嚴(yán)格對(duì)接種部位做鏡檢?；ㄋ幷T導(dǎo)培養(yǎng)最佳條件為取小孢子處于單核中期的花藥，于8℃處理5d后，接于N6附加2，4-D(2mg/L)、KT(1mg/L)、0.5％活性炭、15％蔗糖的培養(yǎng)基。接種后放入33℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，1d后轉(zhuǎn)入28℃培養(yǎng)箱中暗培