葉籽銀杏trnS-trnG序列分析及系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、銀杏(Ginkgo biloba L.)是第四紀冰川之后唯一在我國保存下來的一孑遺物種，素有“活化石”之稱。在其漫長的演化歷程中，銀杏的種子和葉片發(fā)生了明顯的變異。1891年，Shirai在日本發(fā)現(xiàn)世界上第一株葉籽銀杏(Ginkgo biloba L.var.epiphylla Mak.)，1982年，董春耀發(fā)現(xiàn)在山東省沂源縣的一株葉籽銀杏，1984年，郭善基對其進行了報道，這是在我國發(fā)現(xiàn)的第一株葉籽銀杏。作為銀杏家族中的特異種質(zhì)資源，

2、葉籽銀杏具有重要的觀賞價值和科研價值。目前對于葉籽銀杏研究主要集中形態(tài)學觀察，而對于葉籽銀杏的分類地位及系統(tǒng)進化尚無定論，因此，需要從分子技術(shù)方面探討葉籽銀杏的變異機制。 本研究以2株銀杏和來自中國的26株葉籽銀杏、日本的1株葉籽銀杏為試材，使用Hamilton等(1999)設(shè)計的trnS-trnG序列通用引物：上游引物(5'-GCCGCTTTAGTCCACTCAGC-3')和下游引物(5'-GAACGA-ATCACACTTTT

3、ACCAC-3')，用PCR方法從銀杏和葉籽銀杏總DNA中擴增trnS-trnG基因片段，并用DH5a大腸桿菌感受態(tài)細胞對PCR產(chǎn)物進行克隆，在含氨芐青霉素和涂布IPTG/X-gal的LB平板上進行藍白斑篩選后從菌液中提取質(zhì)粒經(jīng)PCR檢測，陽性克隆重組用于測序。用ClustalX1.83程序進行對位排序，對齊后的序列加以人工檢驗，用得到的序列構(gòu)建基因樹。 克隆測得的27株葉籽銀杏和2株銀杏樣品的trnS-trnG基因序列的長度大

4、部分是1005bp，最短的為來自沂源的YZ4。序列分析結(jié)果表明，trnS-trnG基因序列T堿基含量多。T、C、A、G四種堿基的平均含量分別為31.28％、19.43％、31.04％和18.24％，各樣品間的堿基含量差異極小。葉籽銀杏trnS-trnG序列富含A/T。27株葉籽銀杏和2株銀杏樣品的trnS-trnG基因序列排序后長度為1008bp，包括34個堿基變異位點，變異類型均為堿基的替換，其中包括三個信息位點，分別位于34bp、3

5、7bp和359bp處。 基于trnS-trnG基因序列各樣品間的K2p遺傳距離為0～0.0081，平均遺傳距離為0.0027，遺傳距離極小，在種內(nèi)變異的范圍之內(nèi)。trnS-trnG基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹，樹長為684步，一致性指數(shù)(CI)為0.9853，保持性指數(shù)(RI)為0.8361。其嚴格一致樹的一致性指數(shù)較高，說明trnS-trnG序列在銀杏和葉籽銀杏之間發(fā)生變異的頻率非常低，銀杏和葉籽銀杏樣品之間沒有得到很好的分支，來