葉籽銀杏葉生雌性生殖器官發(fā)育相關基因的克隆與序列分析.pdf

1、銀杏（Ginkgo biloba L.）系第四紀冰川之后惟一在中國保存下來的一孑遺種子植物。在其漫長的演化歷程中，銀杏的種子和葉片發(fā)生了明顯的形態(tài)變異。1891年，Shirai在日本發(fā)現(xiàn)了世界上第一株葉籽銀杏（Ginkgobiloba L.var.epiphylla Mak.）。作為銀杏家族中的特異種質(zhì)，葉籽銀杏具有重要的觀賞價值和科研價值。本實驗室已對葉籽銀杏的分類地位和系統(tǒng)發(fā)育進行了研究，然而對于葉籽銀杏的發(fā)生機制還沒有確切的定論。

2、
　　 本研究以葉籽銀杏和銀杏為研究試材，對其LEAFY同源基因和GbMADS5基因進行了克隆、分析。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.利用改良的CTAB法提取葉籽銀杏和銀杏的基因組DNA。經(jīng)電泳檢測，片段大小在23kb左右，DNA帶整齊清晰，沒有明顯拖尾，提取的DNA純度較高。用CTAB大量法提取葉籽銀杏的RNA，電泳檢測顯示，28SRNA和18SRNA電泳條帶清晰，不拖尾，并且28SRNA的亮度高于18SRNA的亮度，表

3、明RNA完整性較好，沒有降解。能用于分子克隆等后繼分子生物學實驗。
　　 2.用RT-PCR擴增的葉籽銀杏GinLFYcDNA序列編碼區(qū)全長為1209bp，用DNmman軟件分析該序列顯示其編碼402個氨基酸，將該序列在GeneBank上注冊，注冊序列號為：GU563897。經(jīng)BLAST分析表明，葉籽銀杏GinLFY的cDNA序列與輻射松的PRFLL基因同源性是85％，羅漢松LEAFY基因的同源性為82％。與已注冊銀杏雌株的Gi

4、nLFY基因核苷酸序列及氨基酸序列的同源性都高達99％。葉籽銀杏的GinLFY基因組序列全長為3455bp，與cDNA序列多重比對后，該基因組序列含有2個內(nèi)含子，3個外顯子，大小分別為479bp、404bp和326bp。
　　 葉籽銀杏GinNdly cDNA序列編碼區(qū)全長為1209bp，用DNAman軟件分析該序列，編碼402個氨基酸。將該序列在GeneBank上注冊，注冊序列號為：GU563898。經(jīng)BLAST分析表明，葉籽

5、銀杏GinNdly cDNA序列與紅豆杉的NEEDLY-like基因，日本柳杉CjNdly基因，羅漢松的NEEDLY-like基因的同源性分別為：86％、83％、84％。與已注冊銀杏GinNdly基因核苷酸及氨基酸序列的同源性也都高達99％。葉籽銀杏的GinNdly基因組序列全長為1504bp，與cDNA序列多重比對后，該基因組序列也含有2個內(nèi)含子，3個外顯子，大小分別為：449bp、428bp和332bp。
　　 3.測得的葉

6、籽銀杏GbMADS5基因序列含有666bp，將該序列在GeneBank上注冊，注冊序列號為：GU563899。序列分析表明該基因含有一個完整的開放閱讀框，編碼221個氨基酸，含有MADS區(qū)、I區(qū)、K區(qū)和C-末端，具有典型的MIKC型植物MADS-box基因結(jié)構(gòu)。同源性比較顯示，GbMADS5與蘇鐵AG、云杉DAL2、擬南芥AGL11的同源性分別為91.07％、83.33％、60.87％。構(gòu)建的系統(tǒng)樹顯示，葉籽銀杏的GbMADS5基因歸于