內(nèi)生菌球毛殼ND35在寄主植物中的侵染過程及其定殖后對(duì)植物的影響與分子檢測(cè).pdf

1、內(nèi)生真菌球毛殼(Chaetomium globosum)ND35是從健康毛白楊中分離得到的優(yōu)勢(shì)內(nèi)生菌株。本論文以ND35與毛白楊組培苗為試材，研究了ND35侵入寄主植物的過程及方式和促生機(jī)理；在大田條件下，針對(duì)107楊樹苗等植物的抗病性和促生效果進(jìn)行了初步研究，為今后生產(chǎn)中開發(fā)利用該生防菌株提供理論依據(jù)。 分別用光學(xué)顯微鏡、掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡等觀察到，ND35接種楊樹組培苗根部，10h后菌絲緊密的附著在寄主表面并開始

2、從細(xì)胞間隙侵入，主要是通過形成侵染釘穿透植物細(xì)胞壁并迅速侵染到寄主細(xì)胞內(nèi)；在接種24h后，ND35菌絲已侵入到根皮層細(xì)胞，接種48h后，菌絲已侵入少數(shù)外皮層細(xì)胞。接種72h后，毛殼ND35的菌絲侵入到多數(shù)外皮層細(xì)胞內(nèi)部。并用球毛殼ND35的特異抗體結(jié)合TRITC熒光素標(biāo)記檢測(cè)球毛殼ND35菌絲在楊樹組培苗根部的侵染和定殖。同時(shí)驗(yàn)證了制備球毛殼ND35抗體的特異性。 ND35侵入到楊樹組培苗內(nèi)部組織后，對(duì)寄主植物產(chǎn)生顯著影響。ND

3、35接種楊樹組培苗誘導(dǎo)的酶活性明顯高于對(duì)照，接種第8天后過氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性達(dá)到最高，分別為75.23U·μg-1·min-1和3.098U·μg-1·min-1，比對(duì)照提高127.01％和194.44％。苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性在接種后第4天達(dá)到最高，為2.339U·μg-1·h-1，比對(duì)照提高241.46％；且經(jīng)檢測(cè)根系硝酸還原酶活力也顯著提高，將組培苗移栽到溫室1個(gè)月后，接種ND35的楊樹苗的根系活力

4、、葉綠素含量、根系長(zhǎng)度及株高等方面都產(chǎn)生顯著的影響。ND35菌株的發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取，濃縮得黃褐色物質(zhì)，用高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)到含有吲哚乙酸(IAA)和麥角甾醇等次生代謝物質(zhì)，且試驗(yàn)表明麥角甾醇類物質(zhì)能夠促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，從而為該菌株的促生機(jī)理的探討提供依據(jù)。 ND35定殖到大田楊樹扦插苗內(nèi)部組織后，能夠促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，使寄主植物的高和胸徑生長(zhǎng)、根系毛細(xì)根和須根的數(shù)量等指標(biāo)都多于對(duì)照組。通過大田和室內(nèi)試驗(yàn)還表明：毛殼ND

5、35定殖到寄主內(nèi)部后，提高了寄主植物對(duì)楊樹腐爛病的抗性，拮抗效果分別達(dá)到70％、90.37％。并且對(duì)楊樹的葉銹病也表現(xiàn)出拮抗效果，起到一定的防治作用。在毛殼ND35定殖到大田楊樹扦插苗后的再分離試驗(yàn)中，當(dāng)ND35定殖2個(gè)月后，ND35就能夠在寄主植物的根、莖、葉等器官上分離出來，表明此時(shí)該菌株已侵染到寄主植物的葉部組織中；到10月份ND35的在根、莖、葉等器官上的再分利率達(dá)到90％左右。 ND35接種到大田板栗(Castanea

6、mollissima)實(shí)生苗后，也表現(xiàn)出促進(jìn)植物生長(zhǎng)的作用，在根系須根和毛細(xì)根的數(shù)量等方面與ND35接種到大田楊樹扦插苗上的作用效果及再分離的結(jié)果上也基本相同。并且板栗實(shí)生苗接種ND35后，能夠促進(jìn)植物提前開花并且花序的數(shù)量也顯著高于對(duì)照。從而為ND35促進(jìn)寄主植物的生長(zhǎng)提供理論依據(jù)。 在本文中以楊樹組培苗、大田楊樹扦插苗為材料，采用CTAB法提取總DNA。以ITS通用引物和毛殼ND35的特異引物檢測(cè)了ND35在寄主內(nèi)部的定殖情