球毛殼ND35產(chǎn)次生代謝物的優(yōu)化培養(yǎng)、理化性質(zhì)及生物安全性.pdf

1、內(nèi)生真菌是存在于植物體內(nèi)和宿主之間具有共生關(guān)系的真菌，已在許多植物中發(fā)現(xiàn)。內(nèi)生真菌存在于植物體內(nèi)，能夠產(chǎn)生次生代謝類物質(zhì)、誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性、促進(jìn)植物生長、與病原菌競爭生態(tài)位點(diǎn)等多種拮抗機(jī)制抑制植物病害的發(fā)生，成為生物防治中重要的生防因子。
　　 為了在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用無公害技術(shù)防治植物病害，本研究以楊樹內(nèi)生真菌球毛殼（Chaetomium globosum）ND35為供試菌株，采用L16（45）正交試驗(yàn)法對(duì)液體培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化；

2、利用，pH紙色譜和捷克八溶劑系統(tǒng)紙色譜方法及紫外-可見光譜掃描法對(duì)次生代謝物進(jìn)行了理化性質(zhì)的初步分析；用薄層層析和高效液相色譜及平板抑菌法檢測分析了粗提液中的活性成分和對(duì)楊樹腐爛病菌的抑菌效果；還對(duì)球毛殼ND35產(chǎn)生次生代謝物液體培養(yǎng)的主要?jiǎng)恿W(xué)指標(biāo)進(jìn)行了分析。結(jié)果表明：優(yōu)化后培養(yǎng)基配方為：1％葡萄糖，1％蔗糖，0.5％牛肉膏，0.02％硫酸亞鐵，0.01％維生素B1，pH值為7。球毛殼ND35的抑菌作用分為活菌體的抑菌作用和代謝活性物

3、質(zhì)的抑菌作用，液體培養(yǎng)后在胞內(nèi)和胞外均產(chǎn)生了抗生物質(zhì)，有較好的熱穩(wěn)定性。該物質(zhì)pH值為中性，極性較弱，易溶于有機(jī)溶劑，難溶于水。紫外-可見光譜掃描可以確定：在221 nm處有最大的吸收峰，221 nm處的吸收值可以作為活性物質(zhì)含量的指標(biāo)。次生代謝物的薄層層析和高效液相色譜分析發(fā)現(xiàn)有4個(gè)組分對(duì)楊樹腐爛病菌有抑菌活性。球毛殼ND35液體培養(yǎng)生長動(dòng)力學(xué)表明，發(fā)酵過程中各指標(biāo)是連續(xù)變化的。
　　 通過高效液相色譜檢測，球毛殼ND35的粗

4、提液中含有吲哚乙酸、赤霉素和麥角甾醇。經(jīng)過多個(gè)生長指標(biāo)測定發(fā)現(xiàn)，球毛殼ND35粗提液對(duì)菜豆有促生作用。濃度為1000μg/ml的球毛殼ND35粗提物對(duì)菜豆灰霉病的防治效果達(dá)到82.38％，濃度為1000μg/ml的ND35粗提液對(duì)菜豆立枯病的防治效果達(dá)到33.4％。球毛殼ND35粗提液誘導(dǎo)了菜豆體內(nèi)防御酶活性和酚類物質(zhì)的增加，ND35粗提液與菜豆灰霉病菌處理組的苯丙氨酸解氨酶（PAL）在第2 d達(dá)到最大比活，比活是1.1267 U·μg

5、-1h-1；過氧化物酶（POD）在第8 d達(dá)到最大比活，其比活是9.4956 U·μg-1 min-1。多酚氧化酶（PPO）在第8 d達(dá)到最大比活，其比活是4.8506 U·μg-1 min-1。總酚含量第8 d達(dá)到最大值，最大值是308.93 OD280 g-1FW-1。
　　 球毛殼（C.globosum）ND35次生代謝物粗提物對(duì)植物生長性狀的影響和子囊孢子在水中的存活、對(duì)植物根際土壤微生物的影響，以及對(duì)小白鼠和大白兔的毒