杜仲細胞懸浮培養(yǎng)及主要次生代謝物積累的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、以杜仲無菌苗為材料,進行了愈傷組織的誘導、繼代培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)研究,建立了搖瓶懸浮培養(yǎng)體系,測定了培養(yǎng)過程中次生代謝產(chǎn)物總黃酮和綠原酸的含量。 培養(yǎng)基的種類、外植體來源以及植物激素的配比對杜仲愈傷組織的誘導率及愈傷組織生長狀況均有很大影響。經(jīng)過篩選確定杜仲無菌苗子葉為適合的誘導材料,在此基礎(chǔ)上進一步優(yōu)化了愈傷組織培養(yǎng)條件,得到了愈傷組織生長的適應(yīng)培養(yǎng)基B5+0.5mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+3%蔗糖,初始pH5.8

2、。同時進行了愈傷組織的培養(yǎng),愈傷組織培養(yǎng)18d生物量達到最大,增長了3.67倍,黃酮與綠原酸最高含量分別為12.25mg/g和1.564mg/g。 杜仲細胞懸浮培養(yǎng)過程中,在固體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上重新優(yōu)化了基本培養(yǎng)基及激素配比,并研究了接種量、碳源種類、蔗糖濃度、pH值對懸浮細胞生長的影響,得到了懸浮培養(yǎng)的適宜生長條件:B5+0.5mg/L NAA+0.6mg/L6-BA+3%蔗糖,初始pH5.52,初始接種量為1.6g·DCW/L

3、。同時,測定了在篩選出的培養(yǎng)條件下杜仲懸浮細胞活力變化、生長動力學、底物消耗動力學、黃酮與綠原酸的生產(chǎn)動力學。發(fā)現(xiàn)在該條件下生長的杜仲細胞最大生物量積累可達6.8g·DCW/L,最大比生長速率μ<,max>=0.665d<'-1>。杜仲懸浮細胞生長曲線近似于“S”型,對數(shù)生長期為2~8d。細胞生長動力學方程為: 懸浮培養(yǎng)條件下次生代謝產(chǎn)物黃酮與綠原酸最高含量分別達到16.63mg/g和3.93mg/g,產(chǎn)量分別達到113.08m

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