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文檔簡介
1、本文針對北方玉米秸稈還田地區(qū)秸稈降解速度緩慢,從而影響下茬作物生長的狀況,以山東德州、泰安等地玉米秸稈連續(xù)多年還田的土壤樣品為菌源,篩選具有降解纖維素能力的菌株,通過菌株間拮抗試驗構建復合菌系YM-1,通過液體、固體發(fā)酵試驗中菌系的CMC酶活、濾紙酶活、木聚糖酶活和PCR-DGGE監(jiān)測菌群的動態(tài)變化,評價YM-1的功能及其組成穩(wěn)定性;最后通過模擬田間試驗評價復合菌系YM-1的應用效果。論文的主要結果如下:
1)采用CMC-
2、剛果紅染色法從土壤中分離篩選了15株產(chǎn)纖維素酶菌株,在對其進行低溫誘導試驗中發(fā)現(xiàn)菌株M11在13℃低溫環(huán)境下仍能高效分解纖維素,鑒定M11為草酸青霉(Penicillium oxalicum)。發(fā)酵試驗表明:以玉米秸稈粉為唯一碳氮源,13℃、200 r/min搖床發(fā)酵培養(yǎng)9d時,纖維素酶活力最高為33.08 U/mL。對其酶學性質初步研究表明該酶最適pH為5.0,最適反應溫度為20℃,在5℃~20℃間酶活力仍能保持在90%以上。
3、 2)根據(jù)液體發(fā)酵中各菌株纖維素酶活力大小,從上述15株菌中篩選出4株產(chǎn)酶能力較高的菌株X11、M11、M14、F7,將它們與對照菌株里氏木霉DSM768(南京農業(yè)大學資源與環(huán)境學院贈送)及實驗室保存的具有降解玉米秸稈的復合菌系CSS-1組配得到新的復合菌系YM-1。
3)采用液體發(fā)酵試驗研究復合菌系YM-1的產(chǎn)酶能力、結果表明:復合系YM-1在28℃、200 r/min條件下液體發(fā)酵培養(yǎng)7d時CMC酶活力達到最大值
4、29.87 U/mL,濾紙酶活力為17.14 U/mL,第9d時木聚糖酶活力最大為23.6 U/mL,發(fā)酵液的pH值隨時間的延長呈先下降后升高的趨勢。
4)菌系YM-1的功能穩(wěn)定性:針對F10、F15、F20代固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物測得的纖維素酶活力及木聚糖酶活力,結果表明在復合菌系YM-1腐解過程中,不同代的復合系酶活變化幅度較小,各代酶活曲線的變化基本相同,都呈現(xiàn)出由低到高再降低的趨勢,說明復合菌系的產(chǎn)酶能力非常穩(wěn)定。
5、 5)菌系YM-1的組成穩(wěn)定性及多樣性分析:采用PCR-DGGE分析YM-1的F2、F5、F10、F15、F20、F25代菌種組成,結果表明不同繼代復合菌系中細菌與真菌的組成穩(wěn)定;DGGE條帶回收分析后發(fā)現(xiàn):F15代不同發(fā)酵時間內DGGE條帶亮度與呈現(xiàn)的位置是不同的,菌系中的微生物組成具有多樣性。
6)在模擬田間試驗中,采用失重率法測定不同處理下玉米秸稈的失重率,結果表明:對照、復合菌系YM-1、CSS-1及菌劑A處理
6、的秸稈干重都有所降低,對照秸稈失重率為13.1%,菌劑A為19.5%,CSS-1為30.6%,而YM-1的失重率最高達到36.9%,說明復合菌系YM-1對玉米秸稈具有較強的降解能力。
7)在模擬田間試驗中,采用BIOLOG生態(tài)板測定不同處理的AWCD(微平板孔內平均顏色變化率)來分析腐解微生物的代謝活性,YM-1處理的AWCD曲線在12h~96h范圍內斜率最大,后期168 h的AWCD值最高達3.69;菌劑A、CSS-1和
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