南湖水體中微生物生理群生態(tài)的初步研究[畢業(yè)設(shè)計(jì)]

1、<p>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)(論文)</p><p><b>　?。ǘ?屆）</b></p><p>　　南湖水體中微生物生理群生態(tài)的初步研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級 生物工程 &

2、lt;/p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　摘要: 測定南湖水體中微生物的數(shù)量分布、湖底污泥中微生物的數(shù)量與分布，對

3、其中異養(yǎng)型細(xì)菌進(jìn)行鑒定，通過對南湖水體中微生物生理群進(jìn)行調(diào)查，以便了解南湖水體中微生物生理群的 生態(tài)分布情況，有助于了解南湖水體受污染的情況，以便為南湖的整體治理方案提供依據(jù)。</p><p>　　關(guān)鍵詞: 南湖；大腸桿菌；BOD；COD；菌群；</p><p>　　South lake water in microbiological physiology group of ecolo

4、gical preliminary studies</p><p>　　Abstract:Determine the number of microorganisms in south lake water distribution of microbes in the bottom sludge quantity and distribution，On one of them to heterotrophic

5、bacteria appraisal，Through the south lake water in microbiological physiology group to carry out investigation，In order to understand south lake water in the ecological distribution of microbiological physiology，Helpful

6、for understanding the polluted situation south lake water， so as to provide the overall treatment plan to na</p><p>　　Keywords: South lake；E. Coli；BOD；COD；Flora</p><p><b>　　目 錄</b>

7、;</p><p><b>　　摘要I</b></p><p>　　Abstract.II</p><p>　　1 緒論錯誤!未定義書簽。</p><p>　　2 材料與方法3</p><p>　　2.1實(shí)驗(yàn)材料錯誤!未定義書簽。</p><p>　　2.1.

8、1 培養(yǎng)基3</p><p>　　2.1.2 溶液的配制錯誤!未定義書簽。</p><p>　　2.1.3 試劑..................................................................................................................................4<

9、/p><p>　　2.2 微生物的分離純化方法...............................................................................................................4</p><p>　　2.2.1 平板涂布法........................................

10、..............................................................................4</p><p>　　2.2.2 傾注法............................................................................................................

11、..................4</p><p>　　2.2.3 菌種鑒定..........................................................................................................................4</p><p>　　2.3 細(xì)菌生理化得測定.........

12、..............................................................................................................5</p><p>　　2.3.1 COD的測定.........................................................................

13、............................................5</p><p>　　2.4 BOD5 測定.................................................................................................................................6</p>

14、<p>　　2.5 含氮量測定...................................................................................................................................6</p><p>　　2.6 微生物的測定.................................

15、..............................................................................................6</p><p>　　3 結(jié)果與分析7</p><p>　　3.1 細(xì)菌分析……………..7</p><p>　　3.1.1 水體中異養(yǎng)菌數(shù)量..............

16、................................................................................................7</p><p>　　3.1.2 水體中大腸桿菌數(shù)量.....................................................................................

17、.....................7</p><p>　　3.1.3 南湖水水質(zhì)測定.................................................................................................................8</p><p>　　3.2 南湖水體中微生物種屬鑒定及分布...

18、...................................................................................9 </p><p>　　4 結(jié)論..........................................................................................................

19、..........................................11</p><p>　　參考文獻(xiàn)錯誤!未定義書簽。</p><p>　　致 謝錯誤!未定義書簽。</p><p><b>　　1 緒論</b></p><p>　　在我國城市化進(jìn)程中 ，城市河流污染是一個迫切需要解決的問題。由于

20、城市的大規(guī)模建設(shè) ，典型城市河流天然匯水區(qū)域大幅減少，各種生活污水和工業(yè)廢水進(jìn)入城市河流 ，城市面源污染也隨著降水徑流進(jìn)入河流.我國多數(shù)城市河流受到比較嚴(yán)重的污染 ，一些城市河流常年發(fā)黑發(fā)臭，嚴(yán)重影響生態(tài)、景觀和居民的健康生活. 此外 ，伴隨著河流水質(zhì)的惡化 ，河流水體的微生物安全性降低 ，給城市居民的健康帶來潛在風(fēng)險.。目前 ，雖然對很多河流污染進(jìn)行過調(diào)查分析，然而對于河流嗅味物質(zhì)的定量分析、變化規(guī)律及影響因子還有待深入研究。 以兩種

21、嗅味物質(zhì)(二甲基異莰醇和土臭素)作為研究對象，對南方某城市河流進(jìn)行全程水質(zhì)調(diào)查 ，重點(diǎn)探討嗅味物質(zhì)變化規(guī)律及其與河流溶解氧、有機(jī)物和微生物群落結(jié)構(gòu)的關(guān)系以及病原性微生物種類，以期為改善河流水質(zhì)和恢復(fù)河流生態(tài)提供科學(xué)依據(jù).</p><p>　　近年來，隨著對環(huán)境資源開發(fā)利用力度的日益增加，大量含有氮、磷元素營養(yǎng)物質(zhì)的污染物不斷排入湖泊、水庫和河流，使水體的營養(yǎng)物質(zhì)負(fù)荷量不斷增加。另一方面，為提高農(nóng)作物產(chǎn)量，農(nóng)田施用

22、的化肥和牲畜糞便逐年增加，經(jīng)雨水沖刷和滲透，進(jìn)入水體的營養(yǎng)物質(zhì)不斷增多。由于這些人為因素的影響使水體的污染和富營養(yǎng)化問題日益嚴(yán)重。富營養(yǎng)化水體的有效治理已成為迫待解決的重要環(huán)境問題。 </p><p>　　水體富營養(yǎng)化分為天然富營養(yǎng)化和人為富營養(yǎng)化。天然富營養(yǎng)化要經(jīng)過幾千年甚至幾萬年才能完成，而人類經(jīng)濟(jì)活動可導(dǎo)致湖泊在幾年內(nèi)就出現(xiàn)富營養(yǎng)化。可見人為富營養(yǎng)化是目前水體富營養(yǎng)化的主要原因。水體中藻類生長離不開碳、氮、

23、磷 3 種關(guān)鍵元素的存在，而這 3 種元素也是引起水體富營養(yǎng)化的決定因素。在受氮、磷元素影響的水體中，尤其是封閉水體，藻類會不斷大量繁殖，消耗水體中大量溶解氧(DO)，而藻類的死亡和解體又會將從水體中所吸收的氮、磷元素釋放回水體，從而造成水體中藻類的惡性循環(huán)繁殖。另外水體中可供藻類利用的碳、氮遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于可利用的磷元素，磷元素通常被認(rèn)為是水體富營養(yǎng)化的限制因子。對于水體富營養(yǎng)化狀況，英國國家環(huán)境署規(guī)定，在靜止水體中，總磷濃度 0.086 m

24、g·L?1為富營養(yǎng)化的臨界值。國際上一般認(rèn)為湖水中總磷濃度 0.02 mg(P)·L?1際上一般認(rèn)為湖水中總磷濃度 0.02 mg(P)·L?1、總氮濃度 0.2 mg(N)·L?1是水體富營養(yǎng)化的發(fā)生濃度。我國考慮到湖泊總氮、總磷等營養(yǎng)鹽濃度普遍較高的實(shí)際情況，對總氮、總磷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整后通過界定葉綠素含量、總氮、總磷、COD、透明度等水質(zhì)指標(biāo)</p><p>　　我國

25、城市湖泊污染類型主要以富營養(yǎng)化為主 ，而受污染緩流水體底泥中污染物質(zhì)的長期緩慢釋放是水體生態(tài)修復(fù)的難點(diǎn)。湖泊治理、 修復(fù)的方法可分為物理法、 化學(xué)法和生物法三大類型。物理法主要以工程疏浚為主 ,具有見效快的優(yōu)點(diǎn) ,但投資大 ,并且由于富有養(yǎng)分的底泥被挖走后不利于其后的生態(tài)系統(tǒng)恢復(fù)?；瘜W(xué)法主要以投放試劑為主 ,能有針對性地控制某些污染指標(biāo) ,但不能從根本上控制水體污染 ，且給水體帶入了新的化學(xué)物質(zhì)。固定化微生物法是國際上較先進(jìn)的水體治理方

26、法。本研究采用固定化微生物技術(shù)對受污染緩流水體湖泊底泥進(jìn)行了生態(tài)修復(fù)試驗(yàn) ，研究了采用固定化微生物技術(shù)對底泥中營養(yǎng)物質(zhì)降解與釋放。這對以后開展類似湖泊的治理工作將有非常重要的意義。2 材料與方法</p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料 </p><p>　　2.1.1 培養(yǎng)基</p><p>　?。?）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉胨3 g/L、蛋白胨10 g/L、N

27、aCl 5 g/L、瓊脂20 g/L (pH7.2—7.4)。</p><p>　?。?）硝化細(xì)菌培養(yǎng)基：(NH4)2SO4 2 g/L、CaCO3 5 g/L、K2HPO4 0.75 g/L、MnSO4 0.01 g/L NaH2PO4 0.25 g/L、MgSO4·7H2O 0.3 g/L、瓊脂20 g/L。 </p><p>　?。?）纖維素分解細(xì)菌培養(yǎng)基：K2H

28、PO4 1 g/L、(NH4)2SO4 1 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、NaCl 0.5 g/L、瓊脂20 g/L。 </p><p>　?。?）馬鈴薯培養(yǎng)基：馬鈴薯：200 g/L、蔗糖20 g/L、瓊脂 15—20 g/L。</p><p>　?。?）氨化細(xì)菌培養(yǎng)基:牛肉膏：3 g/L、雞蛋白10 g/L、NaCl 15 g/L、瓊脂20 g/L。

29、 </p><p>　?。?）放線菌培養(yǎng)基：可溶性淀粉20 g/L、KNO3 1g/L、NaCl 0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.01 g/L、 K2HPO4 0.5 g/L、MgSO4·7H2O 0.03 g/L、瓊脂20 g/L。 </p><p>　　2.1.2 溶液的配制</p><p>　　（1）草酸銨結(jié)晶紫染液<

30、/p><p>　　A液：1%結(jié)晶紫、95%酒精溶液；B液：1%草酸銨溶液，取A液20ml，B液80ml，靜置48小時后使用。</p><p>　?。?）路哥氏碘液：碘片1.0g，KI 2.0g，蒸餾水300ml。</p><p>　?。?）蕃紅復(fù)染液：2.5%蕃紅，95%酒精溶液，取此液10ml于90ml蒸餾水混勻即可.</p><p>　?。?

31、）重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（1/6K2Cr2O7=0.02500mol/L）：稱取預(yù)先在120℃烘干兩小時的基準(zhǔn)或伏級重鉻酸鉀1.22克溶于水中，移入100ml容量瓶中，稀釋至標(biāo)線，搖勻。</p><p>　　（6）亞鐵靈指示液：稱取1.485g鄰菲啰啉（C12H8N2·H2O）0.695克硫酸亞鐵溶于水中，稀釋至100ml棕色瓶中。</p><p>　　（7）硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取3

32、.95克硫酸亞鐵銨溶于水中，邊攪拌邊緩慢加入2ml濃酸，冷卻后移入100ml容量瓶中，加入蒸餾水稀釋至標(biāo)線，搖勻，臨用前重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定。標(biāo)定硫酸亞鐵銨溶液：準(zhǔn)確吸取10.00ml重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液于500ml錐形瓶中加不黧至110ml左右，緩慢加入30ml濃硫酸，混勻冷卻后，加入2滴試亞鐵靈指示液（約0.1ml）用硫酸亞鐵溶液滴定，溶液的顏色經(jīng)藍(lán)綠色至紅褐色即為終點(diǎn)。 </p><p>　　C =（0.025

33、00×10.00）/ V</p><p>　　c —— 硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（mol/L）</p><p>　　V—— 硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量（ml）</p><p>　　0.02500mol/L———重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液</p><p>　　由公式所得C=0.01016 mol/L</p><p><

34、;b>　　2.1.3 試劑</b></p><p>　　濃硫酸、硫酸鉀3份與硫酸銅1份混合（W/W）、30%NaOH溶液：30gNaOH溶于蒸餾水，稀釋至100ml、2%硼酸溶液：2g硼酸溶于蒸餾水，稀釋至100ml混合指示劑：0.1%甲基紅酒精溶液和0.1%甲烯藍(lán)酒精溶液按4：1比例（V/V）混合0.01mol/L標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液：用恒沸鹽酸準(zhǔn)確稀釋。</p><p>　

35、　2.2 微生物的分離純化方法</p><p>　　細(xì)菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，大腸桿菌用遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基，酵母菌，霉菌用馬鈴薯培養(yǎng)基（倒平板時注入少量青霉素鈉），氨化細(xì)菌，硝化細(xì)菌，亞硝化細(xì)菌，真菌，放線菌，均采用相應(yīng)培養(yǎng)基。</p><p>　　分離微生物最常用的方法是平板劃線法，涂布平板法和傾注平板法，此次實(shí)驗(yàn)主要采用涂布平板法。</p><p>　　2.2.1 平

36、板涂布法</p><p>　　移取部分水樣于裝有玻璃珠和無菌水的三角瓶中，震蕩約20分鐘，使水樣與無菌水樣充分混合，將菌分散。用1ml無菌吸管從中吸取1ml注入裝有9ml無菌水的試管中，吸取三次，并振搖使這充分混合。然后再用另一只吸管從此試管中吸取0.5ml注入另一盛有4.5ml無菌水的試管中，以此類推，就此制成10-1、10-2、10-3、 10-4、10-5等各種稀釋度。</p><p&g

37、t;　　將所制培養(yǎng)基熔化，待冷卻至45℃左右時倒平板，其方法右手持三角瓶，左手拿培養(yǎng)皿并松動棉塞用小指和無名指夾住拔出，瓶口在火焰上滅菌，然后左手將培養(yǎng)皿蓋在火焰附近打開少許，迅速注入培養(yǎng)基約15ml左右，加蓋后輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基平均分布，平置于桌面上，待凝后即成平板。</p><p>　　2.2.2 傾注法</p><p>　　將融化后冷卻至45℃左右的瓊脂培養(yǎng)基，向加有南湖水樣

38、稀釋液的各培養(yǎng)皿分別倒入10—15ml，迅速旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基和稀釋液充分混合，水平放置待冷凝后，恒溫培養(yǎng)。</p><p>　　2.2.3 菌種鑒定</p><p>　　形態(tài)觀察：采用革蘭氏染色法，判斷其是革蘭氏陽性菌還是革蘭氏陰性菌，細(xì)菌先經(jīng)堿性染料著色，然后用媒染劑處理后，以脫色劑脫色，最后復(fù)染。若菌仍保持原來的染料顏色，稱為革蘭氏陽性菌，如被脫色劑脫色染上了復(fù)染染料的顏色的稱為

39、革蘭氏陰性菌。</p><p>　　芽孢的染色觀察：用枯草芽孢桿菌制作涂片標(biāo)本，固定。取一小片小于載玻片的濾紙，將其覆蓋在涂片標(biāo)本上。在濾紙片上滴加孔雀綠液，用蒸汽加熱5—10分鐘，注意及時補(bǔ)加染液，以防染液蒸干。輕輕取下紙片，玻片冷卻后，水洗。沙黃水溶液復(fù)染30秒，水洗，干燥，鏡檢。莢膜的染色觀察：滴一滴黑色素于干凈的載玻片一端，取一接種環(huán)菌懸液與黑色至少混合。若從斜面取菌，應(yīng)先加一滴無菌水。另取一塊干凈的載玻

40、片將此混合物自載玻片的一端刮至另一端，使之成一薄層。讓涂片自然干燥，輕熱固定。加蕃紅液染色30秒，水洗，自然干燥，鏡檢。</p><p>　　鞭毛的染色觀察：實(shí)驗(yàn)宜用新培養(yǎng)的菌體。保存斜面菌種，應(yīng)用新鮮斜面連續(xù)接3—5次后再使用。取經(jīng)過特殊處理的載玻片一塊，于其一端滴加一滴蒸餾水，用接種環(huán)挑取少量的菌體（勿帶出培養(yǎng)基），在載玻片上的水滴中輕沾幾下（勿涂布），將載玻片傾斜，使菌液流至另一端，然后放平，自然干燥（切勿

41、回執(zhí)固定）。滴加鞭毛染色A液染色2—3分鐘，水洗，將殘水瀝干，或用鞭毛染色B液沖去殘水。一定要將A液充分洗凈再用B液。滴加B液，將載玻片稍加熱，染色30—60秒，冷卻后水洗。油鏡觀察，菌體的顏色比鞭毛深些。</p><p>　　玻片選擇無滑痕紋玻片，先用國產(chǎn)SDS液煮沸，為了充分接觸，將玻片置特制玻片架，煮沸30分鐘，然后冷卻，再放入洗液，浸泡過夜，用水沖去殘酸，最后用蒸餾水沖洗，瀝干水，再放入95%乙醇脫水，取

42、出玻片，以火焰去乙醇，立即使用。</p><p>　　2.3 細(xì)菌生理生化的測定</p><p>　　2.3.1 COD的測定</p><p>　　原理：在強(qiáng)酸性溶液中，一定量的重鉻酸鉀氧化水樣中還原性物質(zhì)，過量的重鉻酸鉀以試亞鐵靈作指示劑，用硫酸亞鐵銨溶液回滴，根據(jù)用量算出水磁中還原性物質(zhì)水泵的量。</p><p>　　干擾及其消除：酸

43、性重鉻酸鉀氧化性很強(qiáng)，可氧化大部分有機(jī)物，加入硫酸銀作催化劑時，直鏈脂肪化合物可完全被氧化，而芳香族有機(jī)物卻不易被氧化，吡啶不被氧化，揮發(fā)性直鏈脂肪族化合物，苯等有機(jī)物存在于蒸汽相，不能與氧化劑液體接觸，氧化不明顯，氯離子能被重鉻酸鹽氧化并且能與硫酸銀作用產(chǎn)生沉淀，影響測定結(jié)果，故在回流前向水樣中加入硫酸汞，合成為絡(luò)合物以消除干擾。</p><p>　　適用范圍：用0.2500mol/L濃度的重鉻酸鉀溶液測定大于

44、50mg/L的COD值，本實(shí)驗(yàn)采用0.02500mol/重鉻酸鉀溶液。</p><p>　　操作步驟：取20.00ml混合均勻的水樣置250ml磨口的回流錐形瓶中，準(zhǔn)備加入10.00ml重鉻 酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液及數(shù)粒玻璃珠或沸石，邊接磨口回流冷凝管，從冷凝管上口慢慢加入30ml硫酸-硫酸銀溶液，輕輕搖動錐形瓶使溶液混勻，加熱回流兩個小時。（自開始沸騰時計(jì)時）</p><p>　　A、冷卻后用9

45、0ml水沖洗冷凝管壁，取下錐形瓶，溶液體積不得少于140ml否則會因酸度太大，滴定終點(diǎn)不明顯。</p><p>　　B、溶液再度冷卻后，加2滴試亞鐵靈指示液，用硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液，滴定溶液的顏色由黃色經(jīng)藍(lán)綠色至紅褐色即為終點(diǎn)，記錄硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量。</p><p>　　C、測定水樣的同時，以20.00 ml重蒸水，按同樣操作步驟，做空白實(shí)驗(yàn)記錄滴定空白時硫酸亞鐵按標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量。&

46、lt;/p><p><b>　　COD計(jì)算式：</b></p><p>　　COD (O2,mg/L)= [(V0－V1)×c×8×1000] / V</p><p>　　V0——滴定空白進(jìn)硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液用量（ml）</p><p>　　V1——滴定樣品時硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液用量（ml）<

47、;/p><p>　　c ——硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（ml）</p><p>　　V ——水樣的體積（ml）</p><p>　　8 ——氧（0.50）摩爾的質(zhì)量（g/mol）</p><p>　　2.4 BOD5 測定</p><p>　　原理：生物需氧量（BOD5）定義為水平中需氧微生物消耗溶解氧的量，當(dāng)樣品放在培養(yǎng)

48、中，培養(yǎng)溫度為20℃培養(yǎng)五天時，測定所消耗溶解氧的含量來確定水樣的BOD5值。生物需氧量，是指在特殊條件下，通過水中需氧微生物的系列和呼吸作用，分解水中有機(jī)物時所消耗或所需要溶解氧的量。水中BOD值，通常以樣品在20℃放置五天所消耗溶解氧的量（mg/L）表示，記為“BOD5”。</p><p>　　操作過程：取水樣倒入培養(yǎng)瓶，再將攪拌子放入培養(yǎng)瓶內(nèi)，密封杯中放入CO2吸收劑氫氧化鈉或氫氧化鉀，將培養(yǎng)瓶裝置在壓力傳

49、感器上，調(diào)節(jié)對應(yīng)的調(diào)零電位器使數(shù)碼顯示為00.0，這樣BOD5測定正式開始，從此時開始進(jìn)行五日BOD培養(yǎng)測定，直到120小時后結(jié)束，培養(yǎng)箱內(nèi)溫度控制在19—21℃，記錄120小時后的各樣品通道的顯示值。</p><p>　　2.5 含氮量的測定</p><p>　　原理：樣品與濃硫酸共熱，含氮有機(jī)物既分解產(chǎn)生氨（消化）但又與硫酸作用，變成硫酸銨，然后經(jīng)強(qiáng)堿堿化使硫酸銨分解放出氨，借蒸汽將

50、氨蒸至酸液中，根據(jù)酸液被中和的程度，即可計(jì)算得樣品這含氮量。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)步驟</b></p><p>　　消化：分別取1ml水樣于相應(yīng)的克氏燒瓶中，加入0.5ml 80mg/ml K2SO4·CuSO4和2ml濃H2SO4，然后加熱2小時。另取一克氏燒瓶，用蒸餾水代替樣品作空白試驗(yàn)。</p><p>　　蒸餾：定

51、氮儀各連接處應(yīng)使玻璃對外套橡皮管絕對不能漏氣。所用橡皮管塞需經(jīng)過處理，方法為：浸在10%NaOH溶液中煮約10分鐘，水洗再煮10分鐘，再次水洗數(shù)次。蒸餾過程中切忌火力不穩(wěn)，否則將發(fā)生倒吸現(xiàn)象。</p><p><b>　　計(jì)算結(jié)果</b></p><p>　　計(jì)算公式：樣品含氮量mg%=[（A-B）×c×14.008×100 ] / C&

52、lt;/p><p>　　A—— 滴定樣品用去的HCl溶液的體積</p><p>　　B—— 滴定空白用去的HCl 溶液的體積</p><p>　　C—— 相當(dāng)于未稀釋樣品的體積數(shù)</p><p>　　c—— 鹽酸的濃度（mol/L）</p><p>　　14.008——氮原子量</p><p>　　

53、2.6 微生物的測定</p><p>　　微生物的測定是我們本次研究的關(guān)鍵所在，通過對南湖水體中微生物的測定，使我們對其水體中微生物的生態(tài)結(jié)構(gòu)及生理種群的分布具有一不定期的了解，并可為南湖的綜合治理提供依據(jù)。</p><p>　　本次實(shí)驗(yàn)主要采用平板菌落計(jì)數(shù)。平板菌落計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是一個單細(xì)胞系列而成的現(xiàn)象進(jìn)行的，也就是一個菌落即代表一個單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時，先

54、將待測樣品作一系列的稀釋，再取一不定量的稀釋菌液接種到培養(yǎng)皿中，使其均勻分布于平皿中的培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目即可換算出樣品中的含菌數(shù)。</p><p><b>　　操作步驟：</b></p><p>　　A、編號：取24根裝有4.5ml無菌水的試管置于試管架上，依照不同樣品所需進(jìn)行編號，再取6個含有玻璃珠的無菌三角瓶，依次為其編號

55、。</p><p>　　B、稀釋：移取水樣注入三角瓶中，震搖約20分鐘，使水樣與無菌水樣充分混合，將菌落分散。用1ml無菌吸管從中吸取0.5ml注入盛有4.5ml無菌水的試管中，吸取三次，并振搖使之充分混合。然后再用另一只吸管從此試管中吸取0.5ml注入另一盛有4.5ml無菌水的試管中。就此制成10―1、10―2、10―3、10－4的各種稀釋度的水樣。</p><p>　　C、倒平板：將事

56、先制好的培養(yǎng)基深化倒入已經(jīng)編好號的培養(yǎng)皿中，水平放置，使其冷卻。</p><p>　　D、取樣：用1ml移液管吸取樣品約0.5ml于相應(yīng)的培養(yǎng)皿中。</p><p>　　E、涂布：用涂布棒將樣品涂布均勻，在涂布時應(yīng)盡量小心，以免將培養(yǎng)基涂破，影響計(jì)數(shù)。</p><p>　　F、培養(yǎng)：將涂布好的培養(yǎng)基倒置于培養(yǎng)箱中，調(diào)節(jié)溫度至所需值進(jìn)行培養(yǎng)。</p>&

57、lt;p>　　G、計(jì)數(shù)：培養(yǎng)所需小時后，取出培養(yǎng)皿，用菌落計(jì)數(shù)儀掃描出菌落數(shù)，并按以下公式進(jìn)行H、H、計(jì)算：每毫升中總菌數(shù)=同一稀釋度兩次重復(fù)的菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)</p><p>　　I、制片：采用革蘭氏染色法，進(jìn)行制片觀察。</p><p>　　J、觀察：使用顯微鏡觀察，先用低倍鏡觀察，后用高倍鏡觀察。</p><p><b>　　菌落

58、數(shù)的報(bào)告原則：</b></p><p>　　A、選擇平均菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)進(jìn)行報(bào)告。</p><p>　　B、若有兩個稀釋度的菌落數(shù)均在30-300之間，則應(yīng)視二者菌數(shù)之比值如何。若其比值小 于2.0，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若比值大于2.0，則報(bào)其中較小的數(shù)字。</p><p>　　C、若所有稀釋度的菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)

59、以稀釋度最高的平均菌落數(shù)計(jì)算。</p><p>　　D、若所有稀釋度的菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)以稀釋度最低的平均菌落數(shù)計(jì)算。</p><p>　　E、若所有稀釋度的菌落數(shù)均不在30-300之間，其中一部分大于300，一部分小于30，則應(yīng)以最接近30或300的平均菌落數(shù)計(jì)算。</p><p>　　F、菌落總數(shù)在100以內(nèi)時，按實(shí)有數(shù)據(jù)報(bào)告，大于100時，采用兩位有效數(shù)字

60、，后面的數(shù)字四舍五入處理，為了縮短數(shù)字的長度，可用10的指數(shù)來表示</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p><b>　　3.1 細(xì)菌分析</b></p><p>　　3.1.1 水體中異養(yǎng)菌數(shù)量</p><p>　　將煙雨樓、小南湖、許家村、新蕩、水得灣和小石角六

61、個采樣點(diǎn)的水樣分別接種在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)48小時，結(jié)果見表1</p><p>　　表1 2011年2-4月份南湖水體中異養(yǎng)菌數(shù)量（個/ml）</p><p>　　從表1可以看出煙雨樓、小南湖和許家村水體中的異氧細(xì)菌多于水得灣、新蕩和小石角水中細(xì)菌數(shù)，這和煙雨樓、小南湖和許家村的游人多于后三處有關(guān)。</p><p>　　水中的異養(yǎng)細(xì)菌是以有機(jī)物質(zhì)作為碳

62、源和能源的 ，水域中的有機(jī)物質(zhì)的來源有兩個。一是現(xiàn)成的有機(jī)物質(zhì)自外界落入水域中的，另一部分是由于水域中的植物光合作用而形成的，這兩種有機(jī)物質(zhì)是水中異養(yǎng)細(xì)菌繁殖的基礎(chǔ)，這些異養(yǎng)細(xì)菌直接利用這些有機(jī)物質(zhì)。它們將有機(jī)物質(zhì)分解，一部分作為自己生長繁殖的能源物質(zhì)，一部分將其分解成其它生物易于吸收利用的小分子化合物，如纖維素分解細(xì)菌，它們能將纖維素分解成纖維二糖等物質(zhì)。因此，水中的異養(yǎng)細(xì)菌是參與湖中物質(zhì)循環(huán)的主要分解者，所以有機(jī)物質(zhì)多的水體中，異養(yǎng)

63、細(xì)菌的數(shù)量相對多。由此可見，煙雨樓，小南湖，許家村，作為南湖的主要景點(diǎn)，游人較多，帶入水中的有機(jī)物質(zhì)也是水中的異養(yǎng)細(xì)菌多于其它三處的方根原因。</p><p>　　3.1.2 水體中大腸桿菌數(shù)量</p><p>　　表2 南湖水體中大腸菌群的分布（個/L）</p><p>　　大腸菌群作為污染水體的指示菌，其數(shù)量的變化可以表示湖中水體受糞便污染的程度，表2所示南湖

64、水體中大腸菌群數(shù)量說明南湖水質(zhì)污染嚴(yán)重，大腸菌群數(shù)量只有小于1000（個/ml）時，才算是清潔水，因此，治理南湖水質(zhì)的任務(wù)仍然十分艱巨。</p><p>　　從表2看出，煙雨樓樣點(diǎn)的水中大腸桿菌的數(shù)量已達(dá)到60300個/L，其次是小南湖和許家村說明和這三處的人流量過多有關(guān)。</p><p>　　3.1.3 南湖水水質(zhì)測定</p><p>　　2011年2—4月在嘉

65、興南湖水面上6個采樣點(diǎn)采集水樣2次，對南湖水質(zhì)各項(xiàng)目進(jìn)行測定，取其平均值，結(jié)果如表3：</p><p>　　表3 2011年2~4月南湖水質(zhì)各項(xiàng)目測定結(jié)果（mg/L）</p><p>　　從表3得南湖水面上6個采樣點(diǎn)的水質(zhì)，COD、BOD、總磷、氨氮都超標(biāo)。</p><p>　　COD是衡量水質(zhì)的一個指標(biāo)。COD越高，表明水中的還原物質(zhì)多，表明水受污染的程度高，從小

66、南湖、煙雨樓、許家村的水體中，可以得出，南湖水受污染的程度較嚴(yán)重，按國家規(guī)定，南湖水中的COD含量已超過20mg/L，這是四類水的標(biāo)準(zhǔn)。</p><p>　　BOD是反映水體被有機(jī)物污染程度的綜合指標(biāo)，國家標(biāo)準(zhǔn)，超過4mg/L，即為四類水，超過6mg/L為五類水，從六個采樣點(diǎn)采集的水樣均超過4mg/L，其中，煙雨樓已超過6mg/L，屬于5類水，許蛇膽村也已達(dá)到5mg/L。</p><p>

67、　　磷是生物生長不可缺少的元素，但水體中含磷量過高是造成水體富營養(yǎng)化的主要原因之一，國家三類水的標(biāo)準(zhǔn)是不超過0.1mg/L，從表3的6個采樣點(diǎn)的水樣中，可以看出，均超過0.4mg/L，屬嚴(yán)重區(qū)，這和周邊的農(nóng)田亂施含有機(jī)磷的農(nóng)藥有關(guān)，農(nóng)田的水經(jīng)雨水沖入南湖中，造成總磷超標(biāo)。水中氨氮超標(biāo)說明含氮的物質(zhì)含量過高。氨氮按國家標(biāo)準(zhǔn)，2mg/L屬于5類水，可見南湖水中的氨氮也嚴(yán)重超標(biāo)。</p><p>　　2002年南湖經(jīng)整

68、治后水質(zhì)曾達(dá)到3類水的標(biāo)準(zhǔn)，但目前，水質(zhì)的各項(xiàng)指標(biāo)重新回落到4、5類水中的標(biāo)準(zhǔn)，這應(yīng)該引起有關(guān)部門的高度警惕。</p><p>　　3.2 南湖水體中微生物種屬鑒定及分布</p><p>　　從各樣點(diǎn)分離出的單菌落中隨機(jī)挑取68個株菌，按文獻(xiàn)提供的方法鑒定，并根據(jù)《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊》將細(xì)菌鑒定到屬，結(jié)果共12個屬，列表如表4</p><p>　　表4南湖水體中

69、微生物種群的生態(tài)分布</p><p>　　其中假單胞菌屬在各樣點(diǎn)中都能分離到，約占分離細(xì)菌種屬的34.2%，尤以煙雨樓和小南湖為多，是南湖水體中的優(yōu)勢菌；其次是芽孢桿菌屬，占18.5%，以水得灣最多；大腸桿菌科占13%，六個樣點(diǎn)的水體中均有分布；色桿菌屬占5.6%； 此外，還有纖維單胞菌屬、短桿菌屬、 產(chǎn)堿桿菌屬、 微桿菌屬、微球菌屬、枝動桿菌屬、葡萄球菌屬和無色桿菌屬，這些細(xì)菌屬均占百分之四以下。</p&

70、gt;<p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　　通過對南湖水不同地方的采樣調(diào)查，可以看出煙雨樓、小南湖和許家村水體中的異氧細(xì)菌多于水得灣、新蕩和小石角水中細(xì)菌數(shù)，這和煙雨樓、小南湖和許家村的游人多于后三處有關(guān)。</p><p>　　水中的異養(yǎng)細(xì)菌是以有機(jī)物質(zhì)作為碳源和能源的 ，水域中的有機(jī)物質(zhì)的來源有兩個。一是現(xiàn)成的有機(jī)物質(zhì)自外界落入水

71、域中的，另一部分是由于水域中的植物光合作用而形成的，這兩種有機(jī)物質(zhì)是水中異養(yǎng)細(xì)菌繁殖的基礎(chǔ)，這些異養(yǎng)細(xì)菌直接利用這些有機(jī)物質(zhì)。它們將有機(jī)物質(zhì)分解，一部分作為自己生長繁殖的能源物質(zhì)，一部分將其分解成其它生物易于吸收利用的小分子化合物，如纖維素分解細(xì)菌，它們能將纖維素分解成纖維二糖等物質(zhì)。因此，水中的異養(yǎng)細(xì)菌是參與湖中物質(zhì)循環(huán)的主要分解者，所以有機(jī)物質(zhì)多的水體中，異養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量相對多。由此可見，煙雨樓，小南湖，許家村，作為南湖的主要景點(diǎn)，游

72、人較多，帶入水中的有機(jī)物質(zhì)也是水中的異養(yǎng)細(xì)菌多于其它三處的方根原因。</p><p>　　大腸菌群作為污染水體的指示菌，其數(shù)量的變化可以表示湖中水體受糞便污染的程度，南湖水體中大腸菌群數(shù)量說明南湖水質(zhì)污染嚴(yán)重，大腸菌群數(shù)量只有小于1000（個/ml）時，才算是清潔水。</p><p>　　除此之外， COD是衡量水質(zhì)的一個指標(biāo)。COD越高，表明水中的還原物質(zhì)多，表明水受污染的程度高，從小南

73、湖、煙雨樓、許家村的水體中，可以得出，南湖水受污染的程度較嚴(yán)重，按國家規(guī)定，南湖水中的COD含量已超過20mg/L，這是四類水的標(biāo)準(zhǔn)。</p><p>　　BOD是反映水體被有機(jī)物污染程度的綜合指標(biāo)，國家標(biāo)準(zhǔn)，超過4mg/L，即為四類水，超過6mg/L為五類水，從六個采樣點(diǎn)采集的水樣均超過4mg/L，其中，煙雨樓已超過6mg/L，屬于5類水，許蛇膽村也已達(dá)到5mg/L。</p><p>　

74、　磷是生物生長不可缺少的元素，但水體中含磷量過高是造成水體富營養(yǎng)化的主要原因之一，國家三類水的標(biāo)準(zhǔn)是不超過0.1mg/L，從表3的6個采樣點(diǎn)的水樣中，可以看出，均超過0.4mg/L，屬嚴(yán)重區(qū)，這和周邊的農(nóng)田亂施含有機(jī)磷的農(nóng)藥有關(guān)，農(nóng)田的水經(jīng)雨水沖入南湖中，造成總磷超標(biāo)。水中氨氮超標(biāo)說明含氮的物質(zhì)含量過高。氨氮按國家標(biāo)準(zhǔn)，2mg/L屬于5類水，可見南湖水中的氨氮也嚴(yán)重超標(biāo)。2002年南湖經(jīng)整治后水質(zhì)曾達(dá)到3類水的標(biāo)準(zhǔn)，但目前，水質(zhì)的各項(xiàng)指

75、標(biāo)重新回落到4、5類水中的標(biāo)準(zhǔn)。因此，治理南湖水質(zhì)的任務(wù)仍然十分艱巨。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 姜彩虹，張美玲. 上海市內(nèi)不同水質(zhì)的河道春季浮游細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)分析. 微生物學(xué)通報(bào)，2009（04） [2] 胡嘉東，張錫輝等. 典型城市河流中嗅味物質(zhì)和微生物菌落特征. 環(huán)境科學(xué)研究, 2009（01） [3] 劉材

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