2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、<p><b>  本科畢業(yè)論文</b></p><p><b> ?。?0 屆)</b></p><p>  一株共附生微生物對真菌性植物病害防治的試驗</p><p>  所在學(xué)院 </p><p>  專業(yè)班級

2、 生物科學(xué) </p><p>  學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>  指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>  完成日期 年 月 </p><p><b>  目 錄<

3、;/b></p><p><b>  摘要I</b></p><p><b>  引言1</b></p><p><b>  1 材料與方法2</b></p><p>  1.1 實驗材料2</p><p>  1.1.1 供試菌株2&l

4、t;/p><p>  1.1.2 培養(yǎng)基2</p><p>  1.2 實驗方法2</p><p>  1.2.1 共附生放線菌的分離2</p><p>  1.2.2 發(fā)酵及發(fā)酵液提取3</p><p>  1.2.3 發(fā)酵液提取物對植物病原真菌的抑制作用測定3</p><p>  1.

5、2.4 發(fā)酵上清液對白粉病病原真菌生長抑制的野外試驗3</p><p><b>  2 結(jié)果4</b></p><p>  2.1 海葵共附生放線菌DH102菌株的分離4</p><p>  2.2 ??哺缴啪€菌DH102發(fā)酵液提取物對植物病原真菌抑制作用4</p><p>  2.3 ??哺缴啪€菌DH1

6、02發(fā)酵上清液對白粉病病原真菌生長抑制的野外試驗結(jié)果5</p><p><b>  3 討論7</b></p><p>  3.1 海洋放線菌作為防治真菌性植物病害的潛力7</p><p>  3.2 ??哺缴啪€菌DH102對植物白粉病的防治7</p><p><b>  參考文獻8</b&

7、gt;</p><p>  附譯文錯誤!未定義書簽。</p><p>  附譯文原文錯誤!未定義書簽。</p><p>  致謝錯誤!未定義書簽。</p><p><b>  摘要</b></p><p>  [摘要] 采用瓊脂擴散法測定海洋放線菌DH -102菌株發(fā)酵液對12種植物病原真菌

8、的抑制作用。對未定種海葵進行共附生放線菌分離,共分離到共附生海洋放線菌4株,其中菌株DH102從海葵的觸手部位分離到,由于發(fā)現(xiàn)該菌的菌液提取物有較好的抗蟲作用,結(jié)果表明:菌株DH102的發(fā)酵液提取物的普遍對三株病原真菌有較好的抑菌效果,表現(xiàn)出較明顯的抑制作用,其對香蕉根霉腐爛病病菌和番茄早疫病病菌抑菌圈分別為12、11mm;??哺缴啪€菌菌株DH102的發(fā)酵液以1/3體積的PBS緩沖液稀釋后,野外施用發(fā)現(xiàn)對狹葉十大功勞白粉病抑制效果不

9、甚明顯,兩個月不定期的處理后病葉仍然較高, 但可以看得出白粉的斑狀有所縮小</p><p>  [關(guān)鍵詞] 海洋放線菌;植物病原真菌;抑菌作用</p><p><b>  Abstract</b></p><p>  [Abstract] Agar diffusion method using marine actinomycetes DH

10、-102 Strains on 12 species of plant pathogenic fungi. A total of undetermined species of sea anemones were isolated epiphytic actinomycetes were isolated from the epiphytic marine actinomycetes were 4 strains, including

11、strains DH102 isolated from sea anemone tentacles to the site, due to the strain of the bacterium found in extracts of a more the role of a good insect, the results show that: strain DH102 extracts of the fermentatio<

12、/p><p>  [Key words]: marine actinomycete; botanic pathogenic fungi; antibacterial effect</p><p><b>  引言</b></p><p>  隨著陸生生物資源的減少,人們開始把目光轉(zhuǎn)向其他生態(tài)系統(tǒng),其中占地球資源 71%的海洋更成為國內(nèi)外新藥研究的

13、重點和熱點海洋微生物資源極其豐富,而且在特殊的生存環(huán)境中,海洋微生物能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎和功能天然的活性物質(zhì),越來越多的試驗證明,海洋微生物是海洋動植物活性物質(zhì)的真正生物源。目前,海洋微生物活性物質(zhì)研究發(fā)展迅速,國內(nèi)外已有從放線菌、真菌、細(xì)菌、微藻等海洋微生物中分離出具有抗腫瘤、抗病毒、抗細(xì)菌、免疫調(diào)節(jié)功能以及其他用途的生物活性物質(zhì)的相關(guān)報道,其中許多海洋生物代謝產(chǎn)物具有殺滅害蟲、除雜草、抗農(nóng)林業(yè)病原菌等多種作用,可用于生物農(nóng)藥的開發(fā)。有關(guān)專

14、家預(yù)測,海洋微生物將會成為新的醫(yī)用和農(nóng)用抗菌素的重要資源。</p><p>  病蟲害是我國農(nóng)林生產(chǎn)的大敵,據(jù)不完全統(tǒng)計,近幾年我國糧食產(chǎn)量因病蟲害每年損失近1000億 kg, 占全年糧食的 1/ 10,而且受異常氣候影響,我國農(nóng)作物病蟲害處于多發(fā)、頻發(fā)、重發(fā)態(tài)勢。人們已經(jīng)開始意識到傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥所造成的污染環(huán)境、損害人類健康、破壞生態(tài)環(huán)境等缺點,對生物農(nóng)藥的研究越發(fā)關(guān)注。海洋中蘊藏極其豐富的藥用資源,而且很多天然

15、產(chǎn)物特異結(jié)構(gòu)和藥理作用都是陸生生物無法比擬?,F(xiàn)代藥理研究表明,很多海洋微生物次生代謝產(chǎn)物具有較好的防治農(nóng)業(yè)害蟲效果。目前,國內(nèi)外研究較多的主要是微生物殺蟲劑、殺菌劑和農(nóng)用抗生素。</p><p><b>  材料與方法</b></p><p><b>  實驗材料</b></p><p><b>  供試菌株&l

16、t;/b></p><p>  放線菌DH102菌株:由采自舟山東部朱家尖海域的??麡悠?,從其觸手處分離獲得并保存。</p><p>  圖-1 采集的海葵樣</p><p>  Tab-1 Samples collected from sea anemones </p><p>  植物病原真菌:所用三株植物病原真菌為:毛霉菌(Mu

17、cor miehei),番茄早疫病病菌(Alternaria solani),和香蕉根霉腐爛病病菌(Rhizopus stolonifer)。由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)提供。</p><p><b>  培養(yǎng)基</b></p><p>  放線菌發(fā)酵培養(yǎng)基:發(fā)酵培養(yǎng)基用蛋白胨10g, 酵母提取物 2g, 面粉2g, 人工海水1000ml, pH 7.8。</p>&

18、lt;p>  真菌抑制實驗培養(yǎng)基:半海水配置的PDA培養(yǎng)基;</p><p><b>  實驗方法</b></p><p>  本試驗于2010年8月到2011年3月進行。</p><p><b>  共附生放線菌的分離</b></p><p>  共附生放線菌的分離與同組翁周能同學(xué)的論文相同

19、,用高氏一號培養(yǎng)基 ( 人工海水) 為分離培養(yǎng)基。使用前加入終濃度為50×10 -6的重鉻酸鉀作為細(xì)菌和真菌的抑制劑。</p><p>  將采集到的??麡悠废扔?.2μm濾膜過濾除菌的海水充分沖洗數(shù)次,以除去海葵表面松散附生的微生物,然后用70%的乙醇浸泡3min,做表面消毒,再用除菌海水洗凈殘留乙醇。用無菌刀片小心削割,切取小塊組織于滅菌Eppendorf管中研磨,然后加入1ml滅菌海水,振蕩混勻即

20、得組織勻漿。以上勻漿做10-1、10-2、10-3、10-4倍的梯度稀釋。吸取四個稀釋濃度即原液、10-1、10-2、10-3,各200μl涂布于高氏I號和CSA分離培養(yǎng)基平板,每個濃度3個重復(fù)。</p><p>  將涂布好的平皿放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),于28℃下培養(yǎng)21-28天。</p><p><b>  發(fā)酵及發(fā)酵液提取 </b></p><p

21、>  純化后的菌株經(jīng)斜面活化后,將孢子用無菌水洗下制成孢子懸液,接種于發(fā)酵培養(yǎng)基 ( 500 mL 錐形瓶裝液量 200 mL,分批進行總共5L的發(fā)酵量),28 ℃ 130r/min 搖床培養(yǎng)5.5 d;發(fā)酵結(jié)束后,將培養(yǎng)好的發(fā)酵液離心過濾,輔以流動水減壓抽濾,濾液在分液漏斗中用250ml乙酸乙酯萃取得提取液;濾渣用乙酸乙酯浸泡超聲波提取30min,過濾得濾液。合并上述乙酸乙酯提取液,用EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干,再用氯仿/甲醇溶解

22、轉(zhuǎn)移到 Eppendorf管中,各菌株的發(fā)酵提取液分別用1:1的氯仿/甲醇定容至1ml,置于4°C冰箱中保存?zhèn)溆?。本部分于本校醫(yī)學(xué)院5樓實驗室進行。</p><p>  發(fā)酵液提取物對植物病原真菌的抑制作用測定</p><p>  采用瓊脂擴散法。參照吳少杰, 王淑軍, 李富超, 等. 膠州灣海洋放線菌的分布及其抗微生物活性 中國海洋藥物, 2006, 25(5): 10.<

23、;/p><p>  將病原真菌的孢子用無菌水洗下制成孢子懸液,涂布接種于PDA培養(yǎng)基。取直徑φ6mm的濾紙片,蘸取海洋放線菌DH102菌株的發(fā)酵提取液約100 μL貼于含菌平板上, 25℃倒置恒溫培養(yǎng),觀察病原菌菌落生長狀況,培養(yǎng)1~2d后觀察、測量抑菌圈直徑。</p><p>  發(fā)酵上清液對白粉病病原真菌生長抑制的野外試驗</p><p>  無菌發(fā)酵液的制備:發(fā)酵

24、結(jié)束后,除少部分用于提取發(fā)酵液提取物外,將其它培養(yǎng)物的發(fā)酵液用棉紗布過濾,濾液以5000rpm離心,按1(稀釋液):3(母液)的比例用PBS磷酸緩沖劑稀釋發(fā)酵母液,貯存于水瓶中備用。</p><p>  野外試驗以舟山定海區(qū)東山路旁綠化帶某段患白粉病的狹葉十大功勞為試驗對象。對十大功勞灌木叢的一個固定的小塊用噴花壺裝上發(fā)酵液噴灑葉片,從3月至5月根據(jù)晴雨等氣候情況不定期進行,多在傍晚噴灑,施用量以葉片略濕滴水即停

25、。白粉病的病情描述參照沈潔的分級標(biāo)準(zhǔn)。</p><p><b>  結(jié)果</b></p><p>  ??哺缴啪€菌DH102菌株的分離</p><p>  對未定種??M行共附生放線菌分離,共分離到共附生海洋放線菌4株,其中菌株DH102從??挠|手部位分離到,由于發(fā)現(xiàn)該菌的菌液提取物有較好的抗蟲作用,因此拿來做進一步對植物病原菌的防治試驗

26、。</p><p>  圖-2 分離出的??哺缴啪€菌菌株DH102</p><p>  Tab-2 Were isolated from the sea anemone epiphytic strains of actinomycetes</p><p>  ??哺缴啪€菌DH102發(fā)酵液提取物對植物病原真菌抑制作用</p><p> 

27、 實驗發(fā)現(xiàn),菌株DH102的發(fā)酵液提取物的普遍對三株病原真菌有較好的抑菌效果,表現(xiàn)出較明顯的抑制作用,其對香蕉根霉腐爛病病菌和番茄早疫病病菌抑菌圈分別為12、11mm(圖3) 。</p><p>  ??哺缴啪€菌DH102發(fā)酵上清液對白粉病病原真菌生長抑制 的野外試驗結(jié)果</p><p>  ??哺缴啪€菌菌株DH102的發(fā)酵液以1/3體積的PBS緩沖液稀釋后,野外施用發(fā)現(xiàn)對狹葉十大

28、功勞白粉病抑制效果不甚明顯,兩個月不定期的處理后病葉仍然較高, 但可以看得出白粉的斑狀有所縮?。▓D4)。按照沈潔的病葉分類標(biāo)準(zhǔn),起初局部處于9級及以上的病葉經(jīng)兩個月的不定期處理后可見病葉斑點面積縮小,達到7級,但仍有大部分葉子病斑面積沒有改觀。</p><p><b> ?。ˋ)</b></p><p><b>  (B)</b></p&g

29、t;<p>  圖 4 ??哺缴啪€菌菌株DH102的發(fā)酵液對狹葉十大功勞白粉病的抑制效果局部圖 上圖(A)為病葉于2011年3月份拍照 (B)為5月中旬的拍照結(jié)果。</p><p>  Tab 4 anemones were epiphytic strain DH102 Actinomycetes fermentation broth powdery mildew on the narrow-l

30、eaf Mahonia inhibitory effect of the local map above (A) for the diseased leaves in March 2011 photo (B) to mid-May photo results</p><p><b>  討論</b></p><p>  海洋放線菌作為防治真菌性植物病害的潛力</

31、p><p>  隨著當(dāng)今人們生活水平的提高,對生活質(zhì)量提出更高的要求,食品安全問題日益關(guān)注。人類獲得優(yōu)質(zhì)安全的糧食及水果蔬菜成為優(yōu)質(zhì)生活的必然訴求。病菌及蟲害是制約糧食生產(chǎn)及果蔬種植、花卉栽培的一個重要因素。長期以來,利用化學(xué)農(nóng)藥防治病蟲害對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展起到了十分重要的作用。但也導(dǎo)致化學(xué)農(nóng)藥在自然界和食物鏈中長期累積,造成環(huán)境污染、生態(tài)平衡破壞。21世紀(jì)人類全面回歸自然,發(fā)展綠色低碳經(jīng)濟的潮流中,海洋微生物可以作為

32、一種綠色農(nóng)藥來代替生產(chǎn)過程污染嚴(yán)重、毒性強、對環(huán)境不友好的合成類化學(xué)農(nóng)藥的使用。</p><p>  根據(jù)文獻中評價抗菌活性的標(biāo)準(zhǔn),抑菌圈為7-11 mm為低活性,11-16 mm為中等活性,而我們的實驗表明??哺缴啪€菌菌株DH102的發(fā)酵液提取物在實驗室水平有中等強度的抑菌活性,對受試的三株植物病原真菌均表現(xiàn)出抗菌效果。</p><p>  我國東海海域??贩N多有分布,但由于各種原

33、因,有關(guān)其海葵共附生微生物的對抗植物病原菌的報道并不多見。應(yīng)該更好的開發(fā)利用這一海洋微生物資源。</p><p>  ??哺缴啪€菌DH102對植物白粉病的防治</p><p>  本試驗以狹葉十大功勞為對象,進行了海葵共附生放線菌菌株DH102的發(fā)酵上清液作為生物農(nóng)藥使用的潛在價值評估。十大功勞為小檗科十大功勞屬植物。有闊葉與狹葉十大功勞兩種??勺雠柙裕瑘@林種植及藥用。狹葉十大功勞(M

34、ahonia bealei) 廣泛應(yīng)用于道路綠化、大型綠地的景觀綠籬或綠帶。狹葉十大功勞白粉病是其主要病害, 感病后可使葉片變黑,嚴(yán)重時引起枝條大批死亡?!?--沈潔,徐薇玉,管麗琴。上海農(nóng)業(yè)科技,2007,3:104-105】在藥物防治的選擇上,主要有治療性殺真菌劑三唑酮乳油(粉銹寧),和另一種保護性殺菌劑,如75%的達科寧(百菌清)可濕性粉劑,來防止白粉病的分生孢子侵染新葉。 【--周定瑞,狹葉十大功勞白粉病防治,園林,2006,8

35、:44)】在本試驗中,??哺缴啪€菌菌株DH102的發(fā)酵上清液經(jīng)1/3的PBS稀釋后野外對抗白粉病的效果并不甚理想,但本試驗由于時間和條件的限制只是進行了一個稀釋度的試驗,更多的發(fā)酵液稀釋度有待檢驗。??哺缴啪€菌菌株DH102的發(fā)酵上清液仍不失具備一定的作為生防農(nóng)藥的應(yīng)用潛力。另外,因為野外試驗的不可控因素很多,受自然條件,晴雨氣候變化影響頗大</p><p><b>  參考文獻</b&g

36、t;</p><p>  [1] 田黎,顧振芳,陳杰等.海洋細(xì)菌B-9987菌株及對幾種植物病原真菌的作用[J]植物病理學(xué)報2003, 33(1)77-80.</p><p>  [2] 柳鳳,潘朝勃,何紅等.海洋細(xì)菌對辣椒疫霉和辣椒疫病的抑制作用[J]中國生物防治2008, 24(4): 379-381.</p><p>  [3] 王烈.海洋細(xì)菌9221的鑒定及

37、其抗真菌活性物質(zhì)性質(zhì)的初步研究[D].沈陽:中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所,2003.</p><p>  [4] AdinaRAYANA G,VENKATESAN M,SAISHA V,et al.Resistoflavine, Cytotoxic Compound from a Marine Actinomycete,treptomyces chibaensis AUBN 1/7[J].J Microbio

38、logical Research, 2007, 162: 322-327. </p><p>  [5] MASKEY R P,HELMKE E, KAYSERO,et al . Anti-cancer andAntibacterial Trioxacarcins with High Anti-malaria Activity froma Marine Atreptomycete and Their Absolu

39、te Stereochemistry[J]. Jantibiot,2004,57(12): 771-779. </p><p>  [6] JANOS B. Bioactive Microbial Metabolies[J].J Antibiot, 2005, 58(1):1-26.</p><p>  [7] 劉全永,胡江春,薛德林等。海洋微生物生物活性物質(zhì)研究應(yīng)用生態(tài)學(xué)報[J]20

40、02,13(7): 901-905.</p><p>  [8] 焦炳華,穆軍,許強芝等。海洋微生物來源新抗生素的研究抗感染藥學(xué)[J], 2004, 1(1): 1-9.</p><p>  [9] 林白雪,黃志強,謝聯(lián)輝。海洋細(xì)菌活性物質(zhì)的研究進展[J]微生物學(xué)報,2005, 45(4): 657-660.</p><p>  [10] 田黎,陳杰,何運轉(zhuǎn)等。農(nóng)用

41、抗生素的新資源—海洋微生物[J],中國生物防治, 2003, 19(3): 121-124.. </p><p>  [11] 谷俊,林親雄,邢瑩瑩。海洋放線菌M324抗菌物質(zhì)的發(fā)酵優(yōu)化與性質(zhì)的初步研究[J。藥物生物技術(shù),2006,13(5): 347-350.</p><p>  [12] 林親雄,奚濤,劉純慧等。海洋放線菌M326活性代謝產(chǎn)物的初步研究[J]中國海洋藥物雜志. 2006

42、, 25(1): 44-47.</p><p>  [13] 程沁園,葉亮邢,瑩瑩。海洋放線菌WB-F5發(fā)酵條件的優(yōu)化及抑菌活性產(chǎn)物性質(zhì)的初步研究[J]中國天然藥物. 2007, 5(2):142-145</p><p>  [14] 周美英,鄭志成。海洋放線菌S2216菌株鑒定及其抗真菌抗生素合成條件研究[J]廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 1999, 36(6): 109-114.<

43、;/p><p>  [15] 胡江春,薛德林,王書錦等。大豆連作障礙研究Ⅲ。海洋放線菌MB-97促進連作大豆增產(chǎn)機理[J]。應(yīng)用生態(tài)學(xué)報,2002, 13(9): l095-1098.</p><p>  [16] 邵彥坡,方麗萍,魏少鵬。海洋放線菌B-5菌株發(fā)酵液抗菌譜及穩(wěn)定性研究[J]西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2007, 16(3): 248-251.</p><p>  [

44、17] Gerard J M,Haden P,Kelly M T,et al. J. Nat . Prod. [J ] ,1999, 62 ( 1):480- 526. </p><p>  [18] Weis V M .Proc. Natl. Acad. Sci. USA [J ] , 1996, 93 (24): 13683 - 13688. </p><p>  [19] Osawa

45、R S. Lett. Appl. Microbiol. [J], 1995,21 5:288 -291. </p><p>  [20] James S G,Hilmatroem C,Kjelleberg S. Appl. Environ.Microbiol. [J ] , 1996 , 62 : 2783-2788. </p><p>  [21] Gil2Turnes M S, Hay

46、 M E, Fenical W.Science[J ], 1989,246:116-118. </p><p>  [22] Kobayashi M.Chem. Parm.Bull.Tokyo[J],1994,42(12) :2449- 2451.</p><p>  [23] Imamura N,NishijimaM,Takadera T,et al. J .Antibiot.(Toky

47、o) [J],1997,50(1):8- 12. </p><p>  [23] Imamura N,Miyuki N, KyoukoA , et al.J. Antibiotics[J], 1993,46(2):24 1. </p><p>  [24] Doshida J,Hasegewa H,Onoki H,et al. J.Antibiotics[J],1996,49 : 1105

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