北豆根及刺五加提取物對(duì)正常小鼠血液流變學(xué)作用的比較

1、<p>　　北豆根及刺五加提取物對(duì)正常小鼠血液流變學(xué)作用的比較</p><p>　　劉 蔚，車玲，孔華麗，劉 潔，溫筱煦，孫 玲，馮端浩</p><p>　　(中國人民解放軍總醫(yī)院第二附屬醫(yī)院藥劑科，北京 100091)</p><p>　　摘要 目的 研究比較北豆根提取物及刺五加提取物對(duì)小鼠血液流變學(xué)的作用。方法 實(shí)驗(yàn)一小鼠分別給予濃度為0.25

2、g·ｍｌ-1和1.0g·ｍｌ-1的北豆根提取物，實(shí)驗(yàn)二小鼠分別給予濃度為0.25g·ｍｌ-1和1.0g·ｍｌ-1的刺五加提取物(n=12,ig)，連續(xù)給藥3wk，并設(shè)生理鹽水組和維生素E組作為對(duì)照。血細(xì)胞分析儀進(jìn)行常規(guī)血細(xì)胞測(cè)定，熒光偏振法測(cè)定紅細(xì)胞膜流動(dòng)性和微粘度。結(jié)果 北豆根提取物可使平均血細(xì)胞容積（MCV）顯著降低，血小板數(shù)量（PLT）顯著升高，低濃度北豆根可顯著增加紅細(xì)胞數(shù)量（RBC），高

3、濃度北豆根可顯著降低白細(xì)胞數(shù)量（WBC）；低濃度北豆根可顯著增加紅細(xì)胞膜流動(dòng)性，降低微粘度，而高濃度北豆根的作用不明顯。高濃度刺五加提取物可顯著性增加血小板數(shù)量（PLT）及紅細(xì)胞膜流動(dòng)性，降低微粘度，低濃度刺五加的作用不明顯。結(jié)論 一定濃度的北豆根提取物及刺五加提取物可以增加紅細(xì)膜流動(dòng)性，從而降低血液粘度，改善血液流變學(xué)指標(biāo)。</p><p>　　關(guān)鍵詞 北豆根；刺五加；血液流變學(xué)；紅細(xì)胞膜流動(dòng)性；微粘度&l

4、t;/p><p>　　Comparative Studies on Extracts from Radix Rhizoma Menispermi and</p><p>　　Radix Acanthopanacis senticosi in Influencing Mice Blood Rheology</p><p>　　LIU Wei , CHE Ling ,

5、KONG Huali , FENG Duanhao, et al. </p><p>　　(The Second Hospital Affiliated to PLA General Hospital,Beijing 100091,China)</p><p>　　Abstract Objective To study the effect of Rhizoma Menisperm

6、i and Acanthopanax senticosus extracts on blood rheological changes in mice.Methods The first study two groups of mice were administrated by different doses of Rhizoma Menispermi extracts (0.25,1.0g·ｍｌ-1,n=12,ig) f

7、or 3wk. The second study two groups of mice were administrated by different doses of Acanthopanax senticosus extracts (0.25,1.0g·ｍｌ-1,n=12,ig) for 3wk. NS and vitamin E were set as controls. Blood ingredients were d

8、etermined</p><p>　　Key Words Rhizoma menispermi; Acanthopanax senticosus; hemorheology; erythrocyte membrane fluidity; microviscosity</p><p>　　北豆根是防己科植物蝙蝠葛Menispermum dauric-um DC.的根莖，是一種較常用的中藥

9、，在臨床上已廣泛應(yīng)用，主要作用是抑菌消炎、鎮(zhèn)咳祛痰、肌松和抗心率失常等?，F(xiàn)已有成藥北豆根片問世，功效為清熱解毒、消腫止痛，可用于治療氣管炎等[1]。實(shí)驗(yàn)證明，北豆根水提取物（RMW）和醇提取物（RME）對(duì)腫瘤細(xì)胞具有廣譜的抑制作用，并能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，而北豆根多糖成分（RMP）雖沒有抑瘤作用，但有免疫調(diào)節(jié)作用[2]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，北豆根里的蝙蝠葛堿阻滯Ca2+通道，抑制血小板激活，亦可參與血小板聚集的抑制，此作用對(duì)改善心肌缺血、防止血栓

10、形成，阻抑血小板活性增高所致冠心病和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展、治療缺血性心臟病誘發(fā)的心律失常，具有一定的意義[3]。</p><p>　　中藥刺五加是五加科植物刺五加Ａｃａｎ ｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ(Ｒｕｐｒ.ｅｔＭａｘｉｍ)Ｈａｒｍｓ的根和根莖,在我國使用已久。《本草綱目》稱刺五加“補(bǔ)中益氣,久服輕身耐老”。刺五加屬滋補(bǔ)性中藥,具有扶正固本、補(bǔ)腎健脾、益智安神的功效,主治脾腎陽虛、體虛乏力、腰膝酸

11、軟、食欲不振[4]。實(shí)驗(yàn)研究表明,刺五加能夠降低全血低切、中切和高切黏度以及血漿黏度,抑制血栓形成,從而改善血液流變學(xué)指標(biāo)[5,6]?，F(xiàn)代臨床和藥理動(dòng)物研究表明刺五加在急性腦梗死、冠心病等心腦血管病的治療方面顯示出良好的前景。</p><p>　　本文觀察比較了北豆根及刺五加提取物對(duì)小鼠血液流變學(xué)的作用，為它們?cè)谛哪X血管方面的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。</p><p><b>　　1

12、材料與方法</b></p><p>　　1.1儀器 K-4500型血細(xì)胞分析儀（日本東亞公司）;熒光分光光度計(jì)（日本日立公司,F-4000型）;離心機(jī)(上海醫(yī)療器械廠)。</p><p>　　1.2藥物與試劑:1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH,美國Sigma 公司,批號(hào):103F -0483）;淋巴細(xì)胞分離液(TBD生物技術(shù)發(fā)展中心,批號(hào):20020320),北豆根

13、（北京琪景飲片廠,批號(hào):051185），刺五加(北京海淀藥品批發(fā)公司, 批號(hào):051185)，維生素E（北京化學(xué)試劑公司, 批號(hào):051073）,其余所用試劑均為分析純。</p><p>　　1.3藥物制備 分別稱取北豆根及刺五加各500g，用5000mL蒸餾水浸泡2h后加蒸餾水煎煮3次，過濾，合并3次濾液，加熱濃縮至500mL，使每毫升煎劑含生藥1g，煎劑原液為高濃度。單取100mL煎劑原液加蒸鎦水稀釋4倍制

14、成低濃度提取物，置4℃冰箱備用。稱取60mg維生素E加食用油100mL,混勻配成油溶液為陽性對(duì)照，置4℃冰箱備用。</p><p>　　1.4動(dòng)物 昆明種鍵康小鼠購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK11-00-0025),體質(zhì)量（26±2）g,雌雄各半，適應(yīng)環(huán)境2d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。</p><p>　　1．5實(shí)驗(yàn)分組與給藥</p><p

15、>　　1.5.1 北豆根實(shí)驗(yàn) 48只小鼠隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組（0.9%氯化鈉注射液）,陽性對(duì)照組(維生素E),低濃度組(北豆根煎劑低劑量,0.25g/mL), 高濃度組(北豆根煎劑原液,1g/mL),灌胃給藥，每日1次，每次0.5 ml/只,連續(xù)給藥21d。</p><p>　　1.5.2 刺五加實(shí)驗(yàn) 48只小鼠隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組（0.9%氯化鈉注射液）,陽性對(duì)照組(維生素E),低濃度組(

16、刺五加煎劑低劑量, 0.25g/mL), 高濃度組(刺五加煎劑原液, 1g/mL),灌胃給藥，每日1次，每次0.5 ml/只,連續(xù)給藥21d。</p><p>　　1．6 血常規(guī)測(cè)定 于停藥次日將小鼠摘眼球取全血20uL，k3Ek3EDTA抗凝。用血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血液成分檢測(cè)。</p><p>　　1．7 紅細(xì)胞膜脂流動(dòng)性的測(cè)定 于停藥次日將小鼠摘眼球取全血，10g/L肝素抗凝,用

17、淋巴細(xì)胞分離液分離得到RBC,參照文獻(xiàn)[7]制備紅細(xì)胞懸液并稀釋至1×107 mL –1,配制DPH熒光探針并標(biāo)記，在37℃ 孵育30min，熒光偏振法測(cè)定。測(cè)定參數(shù)：激發(fā)波長(zhǎng)（EX）354nm，發(fā)射波長(zhǎng)（EM）430nm，根據(jù)下列公式分別計(jì)算偏振度（P），膜脂流動(dòng)性（LFU）和微粘度（η）：P=（Iv –Ih）/（Iv+Ih）式中Iv為起偏器和檢測(cè)器光軸均在垂直方向的光強(qiáng)度，Ih為起偏器光軸在垂直方向，檢測(cè)器光軸在水平方向的

18、光強(qiáng)度。LFU=(P最大/Pr -1)/Pr 式中P最大=0.5, Pr為P的實(shí)測(cè)值。η=2Pr/（0.46-Pr）式中0.46為常數(shù)。</p><p>　　1．8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 組間數(shù)據(jù)用配對(duì)t檢驗(yàn),采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件完成。</p><p><b>　　2 結(jié)果</b></p><p>　　2．1北豆根及刺五加提取物對(duì)小鼠

19、外周血象的影響</p><p>　　表1結(jié)果顯示：陽性對(duì)照藥維生素E可顯著性升高正常小鼠外周血的紅細(xì)胞（RBC）計(jì)數(shù)（P<0.01）,北豆根提取物可使平均血細(xì)胞容積（MCV）顯著降低（P<0.05），血小板計(jì)數(shù)（PLT）顯著升高（P<0.01），低濃度北豆根可顯著增加紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）（P<0.05），高濃度北豆根可顯著降低白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）（P<0.05）；與正常對(duì)照組比較，高

20、濃度刺五加提取物可顯著性增加血小板計(jì)數(shù)（PLT）（P<0.05）。</p><p>　　表1 北豆根及刺五加提取物對(duì)小鼠外周血象的影響(x±s)</p><p>　　Table 1 Effect of RM and RAS extracts on mice peripheral blood count(x±s)</p><p>　　組別

21、 N WBC/×109·L-1 RBC/×1012·L-1 MCV/fL-1 PLT/109·L-1</p><p>　　正常對(duì)照 12 4.50±1.91 9.20±0.57 52.13±1.58 1179.67±155.80&

22、lt;/p><p>　　維生素E 12 4.80±1.79 10.10±0.56** 51.41±1.60 1118.00±160.57</p><p>　　低濃度北豆根 12 4.16±2.82 9.72±0.20* 50.08±

23、0.87* 1699.00±191.92**</p><p>　　高濃度北豆根 12 3.76±2.40* 9.20±0.38 49.09±0.91** 1794.73±226.15**</p><p>　　正常對(duì)照 12 4.58±1.19 9

24、.17±0.41 56.34±1.20 1015.45±239.86</p><p>　　維生素E 12 4.88±1.79 10.07±0.55** 55.40±1.60 968.00±160.56</p><p>　　低濃度刺五加 12

25、 4.42±1.69 9.10±0.86 54.84±2.68 1102.78±178.05</p><p>　　高濃度刺五加 12 4.81±1.07 9.30±0.55 55.61±1.44 1129.90±161.30*</p>&l

26、t;p>　　*P<0.05, **P<0.01,與正常組比較</p><p>　　2．2北豆根及刺五加提取物對(duì)小鼠紅細(xì)胞膜脂流動(dòng)性的影響</p><p>　　表2結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，北豆根提取物低濃度組可明顯增加小鼠LFU，降低η，北豆根提取物高濃度組的作用不明顯。刺五加提取物高濃度組顯著增加小鼠LFU，顯著降低η（P<0.05），刺五加提取物低濃度組的作用

27、不明顯。同樣條件下，維生素E使LFU明顯增加，η顯著降低(P<0.05)。</p><p>　　表2 北豆根及刺五加提取物對(duì)小鼠紅細(xì)胞膜脂流動(dòng)性和微粘度的影響(x±s)</p><p>　　Table 1 Effect of RM and RAS extracts on mice LFU and microviscosity(x±s)</p><

28、;p>　　組別N LFU/mPa·s-1 η/mPa·s-1 </p><p>　　正常對(duì)照 12 1.560±0.064 5.023 ±0.395</p><p>　　維生素E 12 1.727±0.

29、179* 4.551±0.263*</p><p>　　低濃度北豆根 12 1.715±0.179** 4.487±0.191**</p><p>　　高濃度北豆根 11 1.604±0.177 4.733±0.202<

30、;/p><p>　　正常對(duì)照12 1.531±0.156 5.227±0.586</p><p>　　維生素E12 1.695±0.112* 4.736±0.263*</p><p>　　低濃度刺五加12 1.562±0.199 5.183±0

31、.723</p><p>　　高濃度刺五加12 1.606±0.104* 5.030±0.233*</p><p>　　*P<0.05,**P<0.01,與正常組比較</p><p><b>　　3討論</b></p><p>　　血液流變學(xué)是一門新興的學(xué)科，主要研

32、究全血以及血細(xì)胞，尤其是紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板的流變特性，血管的力學(xué)特性以及微循環(huán)血液流變學(xué)，肺循環(huán)血液流變學(xué)等。血液的正常流動(dòng)是維持生命活動(dòng)的重要前提，在人體內(nèi)任何一個(gè)有生命的細(xì)胞、組織、器官若得不到良好的血液供給，其生理功能將很快下降，甚至發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的改變，最終導(dǎo)致機(jī)體的死亡。血液流變性質(zhì)的異常將會(huì)引起機(jī)體血液循環(huán)障礙，其中尤以血液粘度為重要因素，諸多研究表明，像高血壓、缺血性疾病甚至癌癥等，雖有諸多治病因素，但均與血液粘度異常有

33、關(guān)[8,9]。維生素E是經(jīng)典的抗氧化劑，能健全生物膜，保護(hù)血細(xì)胞。</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)中將維生素E作為陽性對(duì)照，結(jié)果表明維生素E能提高紅細(xì)胞膜脂流動(dòng)性、降低微粘度，并能增加紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，顯示出良好的改善血液流變學(xué)指標(biāo)的作用[10,11]。相同實(shí)驗(yàn)條件下，北豆根提取物低濃度組（0.25g/ml）與生理鹽水組相比均可明顯增加紅細(xì)胞膜脂流動(dòng)性、降低紅細(xì)胞膜微黏度（P<0.01），北豆根提取物高濃度組（1.0

34、g/ml）對(duì)紅細(xì)胞膜脂流動(dòng)性及微黏度沒有作用。刺五加提取物高濃度組（1.0g/ml）可以顯著增加小鼠紅細(xì)胞膜脂流動(dòng)性、降低微粘度，刺五加提取物低濃度組（0.25g/ml）的作用不明顯，說明不同種類的中藥都有各自特定的治療劑量，提示臨床應(yīng)掌握好恰當(dāng)?shù)氖褂脛┝俊?lt;/p><p>　　同時(shí)在我們的實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，在對(duì)小鼠血液成分檢測(cè)中，與生理鹽水組比較，北豆根水提物低高濃度二個(gè)劑量組均可顯著增加小鼠的血小板數(shù)量（PLT）

35、，顯著降低平均血細(xì)胞容積（MCV），其中低濃度組還可顯著增加小鼠的紅細(xì)胞數(shù)量（RBC），此結(jié)果是否提示北豆根可以用于血小板低下的患者，還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明。北豆根提取物高濃度組可顯著降低小鼠的白細(xì)胞數(shù)量（WBC），與文獻(xiàn)報(bào)道[12]北豆根可以抑制炎性滲出和血細(xì)胞向炎癥部位聚集（趨化）相一致，白細(xì)胞減少時(shí)，神疲乏力，容易感染，結(jié)合紅細(xì)胞膜流動(dòng)性數(shù)據(jù)結(jié)果，高濃度北豆根提取物對(duì)LFU無影響，提醒臨床在北豆根的使用過程中，并不是濃度越高效果就

36、越好，有的中藥濃度高了不僅沒有療效，反而副作用增加，因此臨床使用應(yīng)嚴(yán)格掌握適應(yīng)癥，選取合適的劑量，適宜的療程，并在用藥過程中注意血常規(guī)的檢測(cè)。</p><p>　　在對(duì)小鼠血常規(guī)檢測(cè)中，刺五加提取物有輕微增加小鼠WBC、RBC及PLT的趨勢(shì)，其中對(duì)PLT的作用較顯著。在中醫(yī)學(xué)上，刺五加為補(bǔ)益類中藥，臨床上可用來治療</p><p>　　白血球減少癥，具有活血作用可提高骨髓造血功能，本文實(shí)驗(yàn)

37、結(jié)果也初步證實(shí)了刺五加的活血養(yǎng)血作用。</p><p>　　以上研究結(jié)果為北豆根及刺五加辯證施治血淤癥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，提示北豆根</p><p>　　及刺五加在心腦血管病和微循環(huán)障礙防治方面均具有一定的應(yīng)用前景，同時(shí)在臨床應(yīng)用中還要注意其使用劑量、療程、適應(yīng)癥及可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)，做到安全、合理、有效地利用中藥資源。當(dāng)然這些研究結(jié)果僅限于一種正常的動(dòng)物，有一定的局限性，未來更深入的研究必將

38、有助于對(duì)其藥理作用的全面認(rèn)識(shí)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　1.高學(xué)敏.中藥學(xué)[M] 北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:532.</p><p>　　2.梁文杰，劉東青，北豆根提取物對(duì)小鼠和人淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞作用的體外實(shí)驗(yàn)研究[J] 中國免疫學(xué)雜志，2005:21（1）,56.</p>&l

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