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文檔簡介
1、目的:探討艾迪注射液中人參、黃芪和刺五加提取物對斑蝥的增效減毒作用及其機制研究。
方法:采用MTT法考察人參、黃芪、刺五加提取物對斑蝥提取物引起的腫瘤細胞(SMMC-7721肝癌細胞、Hela宮頸癌細胞、U251人膠質瘤細胞)和正常大鼠腎細胞(NRK細胞)毒作用的影響,同時觀察SMMC-7721和NRK細胞形態(tài)的變化;采用小鼠肝癌H22模型,觀察人參、黃芪、刺五加提取物對斑蝥提取物體內(nèi)抑制腫瘤的增效作用;采用斑蝥造成大鼠急
2、性腎損傷模型,考察人參、黃芪、刺五加提取物對腎損傷的保護作用;采用ATP酶試劑盒檢測SMMC-7721、NRK細胞內(nèi)Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶活力;采用LDH試劑盒檢測SMMC-7721、NRK細胞外LDH酶活力;采用流式細胞術檢測SMMC-7721和NRK細胞凋亡;hoechst33342染色觀察SMMC-7721凋亡細胞形態(tài)變化;電鏡觀察腎臟超微結構變化;采用western blot法檢測Bcl-2和Caspa
3、se-3等凋亡相關蛋白的表達。
結果:MTT結果顯示人參、黃芪、刺五加提取物可提高斑蝥對腫瘤細胞增殖的抑制作用;人參(0.66,1.33mg/kg)、黃芪(0.28,0.55mg/kg)、刺五加(0.53,1.05mg/kg)對斑蝥(0.04mg/kg)體內(nèi)抑制H22移植瘤有增效作用(q>0.85);人參(385.00,770.00μg/ml)和黃芪提取物(32.00μg/ml)可明顯增加斑蝥(1.25μg/ml,以斑蝥素
4、計算)引起的SMMC-7721細胞LDH活力的升高(p<0.05),人參提取物(385.00,770.00μg/ml)明顯增強由斑蝥引起SMMC-7721細胞Na+K-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶活力的下降;人參(385.00,770.00μg/ml)、黃芪(32.00μg/ml)及刺五加(76.50μg/ml)提取物能明顯增強斑蝥(1.25 g/ml)引起SMMC-7721細胞凋亡(p<0.05);人參(770.00μg/ml
5、)、黃芪(32.00μg/ml)可明顯加強斑蝥素所致SMMC-7721細胞中bcl-2的下調作用、caspase-3的上調作用。
斑蝥在0.31-5.00μg/ml范圍內(nèi)明顯降低NRK細胞存活率,呈劑量依賴性;人參提取物(24.25,48.50μg/ml)、黃芪提取物(4.00,8.00μg/ml)、刺五加提取物(9.56μg/ml)降低斑蝥對NRK細胞毒作用;斑蝥(0.14 mg/kg,i.p.)連續(xù)15天給藥能使大鼠形
6、成急性腎臟損傷,大鼠尿量減少,尿蛋白升高,血清肌酐、尿素氮含量升高,病理切片顯示大鼠腎臟腎小球出現(xiàn)萎縮,腎遠曲小管水腫;人參(1.59,3.19 mg/kg)、黃芪(0.66,1.32 mg/kg)、刺五加(1.58,3.16mg/kg)提取物可降低斑蝥(0.14mg/kg)所致腎損傷大鼠的尿素氮、肌酐含量,減少尿液中尿蛋白含量,改善腎小球壞死、遠曲小管水腫狀態(tài),抑制腎小管細胞凋亡;人參(24.25,48.50μg/ml)、黃芪(4.0
7、0μg/ml)、刺五加(9.56μg/ml)可明顯減少斑蝥(1.25μg/ml)引起的NRK細胞LDH活力的升高(p<0.05),保護由斑蝥引起NRK細胞Na+K-ATP酶和Ca2+Mg2+-ATP酶活力的降低;人參(24.25,48.50μg/ml)、黃芪(4.00,8.00μg/ml)和刺五加(9.56,19.13μg/ml)提取物能抑制斑蝥(1.25μg/ml)引起NRK細胞凋亡;人參(24.25μg/ml)、黃芪(4.00μg/
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