復(fù)方黃芪提取物抗肝癌的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討黃芪提取物(CAE)抗肝癌的作用機(jī)制。 方法：利用MTT方法建立小牛血清(NBS)、轉(zhuǎn)化生長因子-β<,1>(TGF-β<,1>)體外刺激HepG2細(xì)胞增殖模型，研究CEA(5，10，20，40，80 mg/L)五個(gè)劑量對(duì)NBS、TGF-β<,1>誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞增殖的影響；采用免疫沉淀和Western-blot方法檢測CAE對(duì)TGF-β<,1>誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞內(nèi)Smad2C磷酸化的影響；Westem-blot

2、方法檢測3種MAPK抑制因子對(duì)TGF-β<,1>誘導(dǎo)的Smad2C、Smad2L、Smad3C、Smad3L磷酸化的影響；采用浸潤小室鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞的方法，檢測CAE(40 mg/L)對(duì)TGF-β<,1>誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞移行的影響。 結(jié)果：1．TGF-β<,1>(9pM·L<,-1>)、12.5％NBS作用0.5、1 h時(shí)無明顯促進(jìn)HepG2細(xì)胞增殖作用，但作用2，4，8，16，24 h均明顯促進(jìn)HepG2細(xì)胞增殖，CAE(5

3、～80 mg/L)呈濃度依賴型地抑制HepG2細(xì)胞增殖。2．CAE(40 mg/L)明顯抑制TGF-β<,1>(200 pM·L<'-1>，12h)誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞移行。3．TGF-β<,1>(9 pM·L<'-1>)作用1 h，明顯促進(jìn)Smad2C、Smad2L、Smad3C、Smad3L磷酸化，CAE高中低三個(gè)劑量呈濃度依賴性地抑制由TGF-β<,1>誘導(dǎo)的Smad2C磷酸化。4．C-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制因子(1，3

4、，10μM/L)呈濃度依賴性地抑制Samd2C、Smad3L的磷酸化，JNK抑制因子(1，3，10 μM/L)有抑制Smad3C磷酸化的趨勢(shì)，對(duì)Smad2L磷酸化無明顯影響；p38抑制因子(1，3，10 μM/L)呈濃度依賴性地抑制Smad2C、Smad3L磷酸化，p38抑制因子(1，3，10 μM/L)有抑制Smad3C磷酸化的趨勢(shì)，對(duì)Smad2L磷酸化無明顯影響；細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)抑制因子(1，3，10 μM．L<'-1>

5、)有抑制Smad2L磷酸化的趨勢(shì)；對(duì)Smad2C、Smad3L、Smad3C磷酸化無明顯影響。 結(jié)論：1．CAE可抑制HepG2細(xì)胞增殖與移行，提示，CAE可能具有抑制肝癌細(xì)胞生長與浸潤的作用；2．CAE高、中、低三個(gè)劑量可呈濃度依賴性地抑制由TGF-β<,1>誘導(dǎo)的Smad2C磷酸化，提示，CAE可能經(jīng)由TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路從而發(fā)揮抗肝癌的作用；3．JNK的抑制因子和p38的抑制因子明顯抑制TGF-β<,1>誘導(dǎo)的