復(fù)方牛胎肝提取物抗小鼠肝臟纖維化的機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究復(fù)方牛胎肝提取物通過(guò)抑制肝纖維化小鼠肝臟組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1/Smad2通路發(fā)揮抗纖維化作用的機(jī)制。
　　方法：健康雄性ICR小鼠90只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（10只），模型組（20只），治療組（60只），治療組按不同治療劑量分為大劑量治療組（20只），中劑量治療組（20只），小劑量治療組（20只）。模型組及治療組皮下注射30％四氯化碳溶液制備肝纖維化小鼠模型，同時(shí)正常組以生理鹽水皮下注射。治療組造模后8周隨機(jī)分為三組，分

2、別用復(fù)方牛胎肝提取物以臨床劑量的20倍、10倍、5倍灌胃治療，1次一天，持續(xù)4周，正常組及模型組同期予等量生理鹽水灌胃。12周處死全部小鼠，取部分肝臟組織經(jīng)HE染色后光顯微鏡觀察病理變化并對(duì)病理標(biāo)本進(jìn)行肝纖維化分期。提取小鼠肝臟總RNA行Real-Time PCR檢測(cè)正常組、模型組及治療組TGFβ1（transformation growth factor-β1轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1）、Smad（drosophila mothers agai

3、nst decapentaplegic protein蠕蟲(chóng)果蠅母抗同源蛋白）2的mRNA，提取小鼠肝臟總蛋白行免疫組織化學(xué)及Western蛋白印跡法分別檢測(cè)TGFβ1、Smad2蛋白的表達(dá)水平。各組間采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)多個(gè)樣本比較的秩和檢驗(yàn)(Kruskal-wallis法檢驗(yàn));相關(guān)性討論采用Pearson直線相關(guān)分析。
　　結(jié)果：小鼠肝臟病理學(xué)檢測(cè)和HE染色顯示正常對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞索排列整齊，呈放射狀，匯管區(qū)和膽管上皮

4、細(xì)胞形態(tài)完整;模型組病理切片可見(jiàn)出血性壞死伴大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，門脈區(qū)成纖維細(xì)胞增殖活躍，新生的纖維條索和再生的干細(xì)胞形成多數(shù)典型的假小葉;復(fù)方牛胎肝提取物治療組病理切片可見(jiàn)纖維化程度隨著劑量的增加而明顯減輕，各組的肝纖維化分期可見(jiàn)中大、中劑量組小鼠肝臟纖維化分級(jí)大都停留在肝纖維化S1、S2期，僅少數(shù)繼續(xù)進(jìn)展為S3、S4期，而小劑量治療效果欠佳，小鼠肝臟肝臟纖維化程度集中在S3、S4期，但肝纖維化程度較模型組有明顯緩解。Real-Time

5、 PCR及Western蛋白印跡法檢測(cè)出正常對(duì)照組TGFβ1、Smad2mRNA及蛋白表達(dá)量很低，模型組較高，治療組較模型組表達(dá)下降，大劑量治療組下降最為顯著，其他兩組隨治療劑量的減少表達(dá)逐漸增加;各組TGFβ1、Smad2mRNA表達(dá)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=27.877，26.688; P＜0.05)。直線相關(guān)性分析:各治療組TGFβ1、Smad2的mRNA表達(dá)水平與治療劑量均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.967，-0.956;P＜0.0