復方牛胎肝提取物抗小鼠肝臟纖維化的機制研究.pdf

1、目的：研究復方牛胎肝提取物通過抑制肝纖維化小鼠肝臟組織轉(zhuǎn)化生長因子β1/Smad2通路發(fā)揮抗纖維化作用的機制。
　　方法：健康雄性ICR小鼠90只，隨機分為正常對照組（10只），模型組（20只），治療組（60只），治療組按不同治療劑量分為大劑量治療組（20只），中劑量治療組（20只），小劑量治療組（20只）。模型組及治療組皮下注射30％四氯化碳溶液制備肝纖維化小鼠模型，同時正常組以生理鹽水皮下注射。治療組造模后8周隨機分為三組，分

2、別用復方牛胎肝提取物以臨床劑量的20倍、10倍、5倍灌胃治療，1次一天，持續(xù)4周，正常組及模型組同期予等量生理鹽水灌胃。12周處死全部小鼠，取部分肝臟組織經(jīng)HE染色后光顯微鏡觀察病理變化并對病理標本進行肝纖維化分期。提取小鼠肝臟總RNA行Real-Time PCR檢測正常組、模型組及治療組TGFβ1（transformation growth factor-β1轉(zhuǎn)化生長因子β1）、Smad（drosophila mothers agai

3、nst decapentaplegic protein蠕蟲果蠅母抗同源蛋白）2的mRNA，提取小鼠肝臟總蛋白行免疫組織化學及Western蛋白印跡法分別檢測TGFβ1、Smad2蛋白的表達水平。各組間采用完全隨機設(shè)計多個樣本比較的秩和檢驗(Kruskal-wallis法檢驗);相關(guān)性討論采用Pearson直線相關(guān)分析。
　　結(jié)果：小鼠肝臟病理學檢測和HE染色顯示正常對照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞索排列整齊，呈放射狀，匯管區(qū)和膽管上皮

4、細胞形態(tài)完整;模型組病理切片可見出血性壞死伴大量炎癥細胞浸潤，門脈區(qū)成纖維細胞增殖活躍，新生的纖維條索和再生的干細胞形成多數(shù)典型的假小葉;復方牛胎肝提取物治療組病理切片可見纖維化程度隨著劑量的增加而明顯減輕，各組的肝纖維化分期可見中大、中劑量組小鼠肝臟纖維化分級大都停留在肝纖維化S1、S2期，僅少數(shù)繼續(xù)進展為S3、S4期，而小劑量治療效果欠佳，小鼠肝臟肝臟纖維化程度集中在S3、S4期，但肝纖維化程度較模型組有明顯緩解。Real-Time

5、 PCR及Western蛋白印跡法檢測出正常對照組TGFβ1、Smad2mRNA及蛋白表達量很低，模型組較高，治療組較模型組表達下降，大劑量治療組下降最為顯著，其他兩組隨治療劑量的減少表達逐漸增加;各組TGFβ1、Smad2mRNA表達水平差異具有統(tǒng)計學意義(X2=27.877，26.688; P＜0.05)。直線相關(guān)性分析:各治療組TGFβ1、Smad2的mRNA表達水平與治療劑量均呈負相關(guān)（r=-0.967，-0.956;P＜0.0