皂莢提取物抗肝癌有效部位篩選及研究.pdf

1、研究目的:皂莢(Glelitsia sinensis Lam.)是治療乳腺癌、肺癌、肝癌等癌癥的常用配伍藥，后經抗腫瘤試驗和臨床研究證實了皂莢總浸膏具有確切的抗癌效果。本實驗是在對皂莢總浸膏抗癌有效和初步作用機理研究的基礎上，采用現(xiàn)代分離方法，對皂莢總浸膏進行分離和抗腫瘤部位篩選，確定皂莢的抗腫瘤活性部位。對確定的有效部位進行了提取，分離，純化，得到單體化合物，并進行結構鑒定。通過上述研究，為進一步分析中藥皂莢的抗癌活性物質提供依據。<

2、br>　　 實驗方法及結果:
　　 1、本實驗通過查閱相關文獻資料，并結合前期對皂莢提取工藝條件進行比較，最終確定皂莢總浸膏的最佳提取工藝為：皂莢生藥干燥，粉碎，過40目篩。分別用固-液比1∶10、1∶8、1∶8的75％乙醇溶液回流提取三次，提取時間分別為3h、2h、2h。合并提取液，減壓濃縮，得到總浸膏。
　　 2、通過體外細胞試驗，檢測皂莢提取物三個不同濃度組(高、中、低)對人肝癌細胞bel-7402細胞增殖、細胞

3、周期、肝癌相關基因(bax、bcl-2、p53)的表達及端粒酶活性的影響。結果顯示，三個濃度組皂莢提取液對人肝癌細胞bel-7402細胞增殖、調控癌基因與抑癌基因、促進癌細胞凋亡、抑制端粒酶活性差異均具有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 3、皂莢總浸膏加入適量的水稀釋，采用系統(tǒng)溶劑法，將皂莢總浸膏分別用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇進行萃取，分為石油醚部位、乙醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位五個不同

4、的極性部位。
　　 4、通過動物體內藥效學試驗對皂莢石油醚部位、乙醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位進行藥理活性篩選。結果表明，皂莢乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有顯著的抗腫瘤藥理活性。
　　 5、對皂莢乙酸乙酯部位抑制肝癌細胞作用機理作進一步研究，發(fā)現(xiàn)皂莢乙酸乙酯部位高劑量組通過增強小鼠肝癌細胞Smad4基因和蛋白的表達與下調Smad7基因和蛋白的表達，從而達到抑制腫瘤細胞增值的作用。
　　 6、對皂莢乙酸乙酯部位及

5、正丁醇部位進行硅膠柱層析分離，分別用100-200目和200-300目柱層析硅膠進行分離。經過反復分離，重結晶，得到單體化合物。
　　 7、通過1H-NMR譜、1H-1H COSY譜、13C-1H C0SY譜對所得單體化合物進行結構鑒定，成功得出化合物結構式。
　　 結論:
　　 1、本實驗優(yōu)化的最佳提取工藝簡單易行，有效成分提取效率高，提取完全。有利于最大量地提取出藥材中的有效成分。
　　 2、對提取的

6、皂莢浸膏進行體外細胞藥理實驗，實驗結果顯示，皂莢提取液對人肝癌細胞bcl-7402的增殖有顯著抑制作用，促進細胞凋亡。
　　 3、通過實驗動物藥理篩選實驗，皂莢乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物對人肝癌細胞bel-7402增殖具有顯著的抑制作用(P＜0.01)。確定了皂莢提取液乙酸乙酯部位和正丁醇部位均有確切的抗腫瘤活性。
　　 4、應用乙酸乙酯部位，通過研究其對小鼠肝癌細胞TGF-β/smads信號系統(tǒng)中Smad4、Smad

7、7基因和蛋白調控作用，進一步闡明了皂莢提取物抗癌的作用機理。
　　 5、利用硅膠柱層析分離法和核磁共振波譜法，得到7個單體化合物，并對其中4個進行了結構鑒定。其中一個黃酮類化合物，三個二氫黃酮類化合物，分別為：化合物Ⅰ3'-甲氧基-5，7，4'-三羥基黃酮-7-0-β-D-葡萄糖苷、化合物Ⅱ5，7，3'，5'-四羥基二氫黃酮-7-0-β-D-葡萄糖苷、化合物Ⅲ3'-甲氧基-5，7，4'-三羥基二氫黃酮-7-0-β-D-葡萄糖苷、