苦瓜提取物體外抗腫瘤活性部位的篩選及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:本文通過(guò)研究苦瓜不同溶劑提取部位的抗腫瘤活性，篩選出有效部位，并分析活性部位的化學(xué)成分，旨在采用體外藥理實(shí)驗(yàn)聯(lián)合RT-PCR實(shí)驗(yàn)與流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)苦瓜抗腫瘤的作用機(jī)理進(jìn)行初步研究。
　　苦瓜，又可稱為涼瓜，為葫蘆科植物，是一年生攀緣草本。含有多種生物活性成分，具有抗腫瘤、抗病毒、降血糖、抗生育、抗氧化、抑菌等作用?！侗静菥V目》就稱:苦瓜“苦寒、無(wú)毒、除邪熱、解勞乏、清心明目、益氣壯陽(yáng)?！笨喙暇哂薪笛?、抗菌、消炎、抗病毒、提高

2、機(jī)體免疫力及墮胎、抗生育等作用，國(guó)內(nèi)外學(xué)者也多次報(bào)道了這方面的研究，而且特別是對(duì)苦瓜在防腫瘤方面所起的作用更為關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)主要研究苦瓜不同提取物體外抗腫瘤作用并初步探討其作用機(jī)理，具體工作包括以下內(nèi)容:
　　方法:1苦瓜提取物的制備:采用大孔吸附柱色譜法，依次采用水、20％、40％、60％、80％甲醇對(duì)苦瓜醇提物進(jìn)行洗脫，得到苦瓜5種不同濃度溶劑的提取物。
　　2苦瓜活性部位的篩選:本文選用體外培養(yǎng)的人胃癌細(xì)胞MGC-803

3、為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，以半?shù)致死率為評(píng)定指標(biāo)，采用MTT實(shí)驗(yàn)研究上述5種苦瓜不同溶劑提取物對(duì)MGC-803細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。
　　3當(dāng)選定苦瓜提取物最佳抗腫瘤活性部位后，配制不同濃度的苦瓜抗腫瘤活性部位溶液，繼續(xù)采用MTT實(shí)驗(yàn)，探索苦瓜抗腫瘤活性部位的最低有效濃度。
　　4采用RT-PCR實(shí)驗(yàn)，研究苦瓜80％甲醇提取部位不同濃度給藥時(shí)MGC-803相關(guān)基因P53、Bax與Bcl-2相對(duì)表達(dá)量。
　　5運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)研究不同濃

4、度苦瓜80％甲醇提取部位對(duì)人胃癌細(xì)胞MGC-803細(xì)胞周期的分布的影響。
　　結(jié)果:1 MTT實(shí)驗(yàn)表明，苦瓜60％、80％甲醇提取部位抗腫瘤效果最佳，其中，80％甲醇提取部位抗腫瘤效果更優(yōu)。在24h時(shí)對(duì)人胃癌細(xì)胞MGC-803的抑制率已超過(guò)50％，達(dá)到半數(shù)致死作用。且當(dāng)苦瓜80％甲醇提取部位給藥濃度達(dá)到75μg/ml時(shí)，其抗腫瘤效果最佳。
　　2 RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)給藥濃度為50μg/ml、75μg/

5、ml時(shí)能顯著下調(diào)Bcl-2的相對(duì)表達(dá)，上調(diào)P53、Bax的相對(duì)表達(dá)。同時(shí)給藥濃度為75μg/ml時(shí)，與DMSO對(duì)照組比較，人胃癌細(xì)胞MGC-803相關(guān)基因P53、Bax與Bcl-2表達(dá)具有極顯著差異。而當(dāng)給藥濃度為25μg/ml時(shí)，與對(duì)照組比較，P53、Bax和Bcl-2基因的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3流式細(xì)胞技術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)給藥濃度分別為0、25、50、75μg/ml時(shí)，人胃癌細(xì)胞MGC-803凋亡細(xì)胞(LR)/壞死細(xì)胞