新型卟啉化合物體外抗腫瘤作用篩選及機(jī)理研究.pdf

1、目的:觀察新合成的金屬卟啉化合物對(duì)肝癌細(xì)胞(HepG2)、胃癌細(xì)胞(SGC-7901)、結(jié)腸癌細(xì)胞(sw480)、高分化鼻咽癌細(xì)胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌細(xì)胞(CNE-2)、小鼠單核巨噬細(xì)胞(RAW264.7)、肺癌細(xì)胞(A549)以及乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)的抗腫瘤作用,并篩選療效較好的藥物進(jìn)一步研究卟啉化合物抗腫瘤作用機(jī)理。
　　方法:1.藥物抗腫瘤活性篩選:SRB法和MTT法測(cè)定藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響;鄰二氮菲-Fe2

2、+氧化法和鄰苯三酚自氧化法測(cè)定藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞清除羥自由基和超氧陰離子自由基能力的影響;Griess法測(cè)定腫瘤細(xì)胞中NO自由基含量的變化;Giemsa染色法觀察腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化。2.藥物抗腫瘤機(jī)理研究:羅丹明123測(cè)定線粒體膜電位變化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡;DNA完整性檢測(cè);實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞C-myc基因的mRNA表達(dá)量的變化;ELISA法測(cè)定腫瘤細(xì)胞端粒酶活性的變化。
　　結(jié)果:八種金屬卟啉化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的

3、生長(zhǎng)均具有一定的抑制作用,且隨著藥物濃度的升高,細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率基本呈上升的趨勢(shì);細(xì)胞對(duì)羥自由基和超氧陰離子自由基的清除能力下降;細(xì)胞上清液中 NO自由基的含量升高;Giemsa染色后觀察到凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯增加且藥物對(duì) HepG2細(xì)胞作用最顯著。上述效果最好的兩種藥物是Rup-03和Rup-04,Rup-03對(duì)五種腫瘤細(xì)胞(HepG2、CNE-1、CNE-2、sw480以及RAW264.7細(xì)胞)的殺傷作用較好,Rup-04對(duì) SGC-7

4、901細(xì)胞的殺傷作用較好。隨著Rup-03濃度的增加(10-9~10-6 mol/L),線粒體膜電位熒光強(qiáng)度減弱;流式細(xì)胞儀顯示HepG2細(xì)胞凋亡率逐漸增加;瓊脂糖凝膠電泳圖顯示DNA發(fā)生了降解;C-myc基因的 mRNA相對(duì)表達(dá)量減少且端粒酶活性降低。這些結(jié)果均表明,細(xì)胞凋亡程度隨著藥物濃度的增加而加重。
　　結(jié)論:八種新型金屬卟啉化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞均具有一定的殺傷作用,且殺傷作用與濃度具有一定相關(guān)性,總體效果最好的藥物為Rup-