旋覆花素體外抗腫瘤作用研究.pdf

1、腫瘤是一類常見病、多發(fā)病，目前，惡性腫瘤已成為危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。其死亡率在發(fā)達(dá)國(guó)家居第一位，在發(fā)展中國(guó)家居第二位，且發(fā)病率仍呈上升趨勢(shì)。世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)，到2020年，將有2000萬新發(fā)癌癥病例，其中死亡人數(shù)達(dá)1200萬，且絕大部分將發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。因此，攻克腫瘤成為近40年來各國(guó)政府與科研、醫(yī)療機(jī)構(gòu)的主要任務(wù)之一，其中，中醫(yī)中藥抗腫瘤作用的研究一直備受關(guān)注，已成為腫瘤治療過程中不可或缺的手段之一。雖然化療藥物殺死殺傷癌細(xì)

2、胞的能力較強(qiáng)，近期療效較好，但由于化療藥的毒副作用明顯，甚至殺死正常細(xì)胞，因而近年來從天然藥物中尋找高效低毒的抗腫瘤藥物成為研究熱點(diǎn)。因此，中藥如何調(diào)整癌癥晚期患者生理平衡，提高病人的免疫力和生存質(zhì)量，降低化療和放療的毒副作用，降低復(fù)發(fā)率，提高生存率，以及治療、控制癌癥發(fā)展等，是目前惡性腫瘤治療過程中值得研究的一個(gè)重要課題。
　　 據(jù)報(bào)道，菊科旋覆花屬植物歐亞旋覆花是一種傳統(tǒng)中草藥，中國(guó)、韓國(guó)和日本等國(guó)都有分布，我國(guó)主產(chǎn)于河南、

3、河北、江蘇、浙江、安徽、山東、內(nèi)蒙等地，具有抗炎、抗肝炎、抗肝損傷、抗腫瘤等多種生物活性。Park EJ經(jīng)研究得到的歐亞旋覆花氯仿提取物在HL-60細(xì)胞中顯示出很高的細(xì)胞毒性；吳一兵等從歐亞旋覆花中用不同方法得到石油醚提取物、氯仿提取物、醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物，并用8種腫瘤細(xì)胞：SK、ASPC、BG、HGC27、PANC、H466、Colon和Eca-109對(duì)得到的四部分萃取物進(jìn)行抗腫瘤試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)氯仿和石油醚部分對(duì)不同細(xì)胞系在72

4、h內(nèi)有一定的抑制作用。旋覆花素是從中藥旋覆花中經(jīng)氯仿抽提得到的提取物，其中旋覆花內(nèi)酯可能是旋覆花抗腫瘤的有效化學(xué)成分之一，目前已引起國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者的關(guān)注。
　　 本實(shí)驗(yàn)擬采用MTT法，檢測(cè)低、中、高三個(gè)劑量范圍旋覆花素對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞株，小鼠肉瘤S180細(xì)胞株、人肺腺癌A549細(xì)胞株、人卵巢癌SK-OV3細(xì)胞株及人宮頸癌Hela細(xì)胞株的細(xì)胞毒性作用，并通過比較旋覆花素抑制H22、S180、A549、SK-OV3和Hela細(xì)胞

5、生長(zhǎng)的量效關(guān)系曲線，分析旋覆花素對(duì)以上五種腫瘤細(xì)胞的毒性特點(diǎn)。
　　 一、旋覆花素體外抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)劑量范圍篩選。
　　 目的：尋找旋覆花素對(duì)H22、S180、A549、SK-OV3、Hela的細(xì)胞毒性的最佳劑量范圍。
　　 方法：（1）配制低（0.3125μg/ml、0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml）、中（3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.

6、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml）、高（31.25μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml）三組劑量范圍的旋覆花素溶液，用MTT法檢測(cè)各劑量范圍對(duì)以上五種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，測(cè)定各劑量范圍對(duì)以上五種腫瘤細(xì)胞的OD值，并計(jì)算抑制率，選出最佳劑量范圍。
　　 結(jié)論：（1）旋覆花素在體外具有抗腫瘤作用且存在一定的選擇性。旋覆花素在31.2

7、5μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml的劑量時(shí)，對(duì)H22、S180、A549及SK-OV3四種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用均較明顯，而對(duì)Hela細(xì)胞的抑制作用均較低。（2）旋覆花素對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用與劑量有顯著的依賴關(guān)系。在31.25μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml劑量時(shí)旋覆花素對(duì)S180、SK-OV3及Hela細(xì)胞的抑制作用最高分別為12.00％、18.1

8、5％及14.07％；對(duì)H22和A549細(xì)胞的抑制作用最高分別為70.09％和56.81％。可見，在31.25μg/ml、62.5μg/ml及125μg/ml劑量時(shí)，旋覆花素對(duì)S180、SK-OV3及Hela細(xì)胞的抑制作用明顯低于對(duì)H22和A549細(xì)胞的抑制作用，但在250μg/ml、500μg/ml及1000μg/ml劑量時(shí)，旋覆花素對(duì)H22、S180、A549及SK-OV3四種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用更明顯，最高抑制率均在67.50％以