樺褐孔菌多糖提取與體外抗腫瘤作用研究.pdf

1、1、通過(guò)液體培養(yǎng)分別篩選了葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、地瓜淀粉、玉米淀粉、玉米面、乳糖、甘露醇8種碳源和豆粉、麩皮、玉米面、蛋白胨、酵母膏、NH4HCO3、NaNO3、NH4NO38種氮源，并最終通過(guò)正交試驗(yàn)確定培養(yǎng)基。結(jié)果表明:以葡萄糖作碳源時(shí)，菌球干重最大，為2.92g/L;葡萄糖組和地瓜淀粉組的多糖含量顯著高于其他碳源組;對(duì)pH的記錄說(shuō)明發(fā)酵液pH自4-6呈上升趨勢(shì)，樺褐孔菌F1菌株在培養(yǎng)過(guò)程中不斷的分泌堿性物質(zhì)。以酵母膏為氮源的條件下

2、測(cè)得的菌球干重最大為9.18g/L，其次是碳酸氫銨和蛋白胨，分別為8.12mg/L和7.56mg/L;蛋白胨組的蛋白含量變化幅度較大，開(kāi)始上升緩慢，第10天起上升較快，達(dá)到2.54mg/ml最大值。正交試驗(yàn)結(jié)果分析顯示最佳培養(yǎng)基配方應(yīng)為:蔗糖4％，蛋白胨0.25％，KH2PO40.3％，MgSO40.05％，接種量為10％。供試的5個(gè)因素中，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響程度大小依次為:碳源＞MgSO4＞KH2PO4＞氮源＞接種量。
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3、、本文對(duì)幾種多糖提取方法進(jìn)行了篩選，采用熱水提取法。通過(guò)對(duì)料液比、提取時(shí)間、提取次數(shù)、提取溫度和初始提取pH的初步試驗(yàn)，確定的條件為料液比1∶40，提取時(shí)間為2h，提取溫度100℃，初始提取pH=8，提取2次，此法最終多糖提取率為14.98％。通過(guò)正交試驗(yàn)確定的優(yōu)化條件為提取溫度100℃，料液比1∶40，提取時(shí)間2.5h，最佳pH為8，提取次數(shù)為3次。
　　 3、本章采用前面的蔗糖4％,蛋白胨0.25％，KH2PO40.3％,M

4、gSO40.05％作為中試發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量4％,轉(zhuǎn)速180r/min，通氣量0.5-2vvm，罐壓0.01-0.02kg/cm2，溫度28℃，培養(yǎng)時(shí)間7d。適時(shí)終止發(fā)酵，sevage法脫除粗提物中的蛋白成分，用H2O2脫色，水溶液裝入透析袋透析除去小分子鹽雜質(zhì)。通過(guò)葡聚糖凝膠柱層析進(jìn)一步純化。
　　 4、分別用所得的樺褐孔菌幾個(gè)樣品對(duì)食管癌EC109細(xì)胞株、乳腺癌MDA細(xì)胞株、宮頸癌Siha細(xì)胞株進(jìn)行體外抗腫瘤效果測(cè)試。結(jié)果表

5、明:樺褐孔菌多糖幾個(gè)樣品對(duì)EC-109細(xì)胞的抑制率均在20％以上，而醇溶組分在聯(lián)合化療藥物5-氟尿嘧啶后抗瘤作用大增，子實(shí)體醇溶聯(lián)合組達(dá)到了所有藥物組中最高的50.68％，大大超過(guò)了陽(yáng)性對(duì)照的24.20％;對(duì)MDA乳腺癌細(xì)胞試驗(yàn)中，僅有胞外多糖粗提物和子實(shí)體多糖粗提物有較強(qiáng)的抑制作用，最好抑制率分別為78.14％和85.85％，與陽(yáng)性對(duì)照的82.70％相差無(wú)幾，而聯(lián)合用藥組抑制率均在80.10％-83.33％的范圍內(nèi)，幾乎與陽(yáng)性對(duì)照平齊