樺褐孔菌的活性成分研究.pdf

1、樺褐孔菌Inonotus obliquus(Pers.: Fr.) Pilat為多孔菌科的藥用真菌，分布于北半球45°～50°的地區(qū)，我國以黑龍江、吉林兩省資源較為豐富。民間用于治療一些惡性腫瘤。目前樺褐孔菌的化學(xué)成分主要以三萜類成分為主，此外還有甾類、多糖類、木質(zhì)素類以及小分子芳香類化合物等。已有大量藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，樺褐孔菌具有抗腫瘤、抗病毒、抗炎、降血脂、降血糖及保肝等廣泛的藥理作用。目前，有關(guān)樺褐孔菌（Inonotus obliq

2、uus）化學(xué)成分的系統(tǒng)性研究還不夠深入，且對于其中微量的化學(xué)成分的活性評價(jià)尚不全面，此外，單體化合物的藥理作用研究目前多局限于體外實(shí)驗(yàn)。借于此，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了樺褐孔菌的活性成分研究。
　　本論文采用95％乙醇對樺褐孔菌（Inonotus obliquus）進(jìn)行回流提取，并依次用石油醚、乙酸乙酸、正丁醇萃取;將萃取物分別采用硅膠柱色譜、ODS開放柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜、半制備HPLC進(jìn)行化學(xué)成分的分離，共分離得到了

3、14個(gè)化合物;并根據(jù)理化性質(zhì)及1H-NMR、13C-NMR、APCI-MS、DEPT、HSQC、HMBC等波譜數(shù)據(jù)鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)，分別為lanosterol(1)、inotodiol(2)、3β-hydroxy-lanosta-8，24-diene-21-a1(3)、inonotsuoxide A(4)、inonotsuoxide B(5)、trametenolic acid(6)、lanosta-8,23E-diene-3β,22

4、R,25-triol(7)、betulinic acid(8)、3β,28-dihydroxylup-20(29)-ene(9)、olelanolic acid(10)、4-(3,4-dihydroxyphenyl)-(E)-3-buten-2-one(11)、(22E,24S)-5α,8α-epidioxy-24-methyl-cholest-6,9(11),22-trien-3β-ol(12)、8-epidioxy-5α,8α-er

5、gosta-6,22E-dien-3β-ol(13)、3β-hydroxylanosta-7，9(11)，24-trien-21-oic acid(14)。這14個(gè)化合物中有8個(gè)為四環(huán)三萜類，3個(gè)五環(huán)三萜類，2個(gè)甾類化合物，1個(gè)酚類化合物。經(jīng)檢索，其中化合物10、12和14為首次從該藥用真菌中分離得到。
　　體外實(shí)驗(yàn)采用MTT法對分離得到的化合物1-10、12-14對人結(jié)腸癌HT-29、人宮頸癌Hela兩種腫瘤細(xì)胞株的抗腫瘤活性進(jìn)

6、行了初步評價(jià)，活性篩選結(jié)果表明，對人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株，化合物5表現(xiàn)出中等的細(xì)胞毒活性，IC50值為22.27μM，化合物2、4、8、12、13表現(xiàn)出比較弱的細(xì)胞毒活性，IC50值分別為50.31、31.99、59.72、30.76、58.23μM，而其余的化合物均未表現(xiàn)出細(xì)胞毒活性，IC50值均大于100。對人宮頸癌Hela細(xì)胞株，化合物4、5表現(xiàn)出中等的細(xì)胞毒活性，IC50值分別為12.15、14.22μM，而化合物1、2、8、

7、12表現(xiàn)出較弱的活性，IC50值為62.29、34.11、30.30、35.82μM，其余的化合物均未表現(xiàn)出細(xì)胞毒活性，IC50值均大于100。上述結(jié)果表明，化合物1、2、4、5、8、12、13是樺褐孔菌的活性成分。
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對化合物1、2、6對CCl4致小鼠氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用進(jìn)行了研究，測定了CCl4所致氧化小鼠體內(nèi)的超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的活性及還原型谷胱甘肽