樺褐孔菌多糖的提取、純化及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、隨著人們工作壓力的增大，腫瘤患者越來越多，且具有了年輕化的趨勢，癌癥已成為危害人類健康的第二殺手，僅次子心腦血管疾病。目前治療惡性腫瘤仍以化療、放療、手術(shù)治療為主。臨床使用的抗腫瘤藥物都會有不同程度的毒副作用，比如化療藥物在破壞腫瘤細(xì)胞的同時，又破壞正常組織的細(xì)胞，使人體的免疫系統(tǒng)紊亂。從中藥，尤其是植物資源中尋找療效好、毒副作用小的抗腫瘤活性成分，已成為國內(nèi)外抗腫瘤研究的熱門開發(fā)領(lǐng)域。動物和臨床試驗表明:樺褐孔菌多糖沒有明顯毒副作用，

2、并已被證明具有抗腫瘤的功效。本實驗在研究提取、脫蛋白和脫色方法的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對其單糖組成成分及其體外抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。
　　首先，對樺褐孔菌粗多糖成分進(jìn)行了提取，并通過正交試驗確定了最佳提取工藝，其參數(shù)為:料液比1∶40（W/V）、提取時間2.5h、提取溫度90℃，在優(yōu)化條件下進(jìn)行重復(fù)實驗，得出的多糖平均得率為1.82％，重復(fù)性良好，多糖的純度達(dá)到21.1％。
　　其次，進(jìn)行了粗多糖的脫蛋白質(zhì)和脫色實驗。通過考察多糖保

3、留率和蛋白脫除率，比較了Sevage法、三氯乙酸(TCA)法、三氯乙酸-正丁醇(TCA-NBA)法、鹽酸法、酶法輔助等方法的脫蛋白效果，結(jié)果酶法輔助三氯乙酸-正丁醇法的脫蛋白效果優(yōu)，蛋白脫除率達(dá)到82.3％，且多糖保留率較高，達(dá)到76.1％，經(jīng)脫蛋白的多糖純度提高到81.1％;采用活性炭粉末、過氧化氫、殼聚糖和聚酰胺層析柱對樺褐孔菌多糖進(jìn)行脫色，從脫色率和多糖保留率兩方面進(jìn)行考察，選擇了脫色效果優(yōu)的聚酰胺層析柱為適宜的脫色方法，其脫色率

4、達(dá)到89.3％，多糖保留率為91.7％，經(jīng)脫色的多糖純度提高到85.8％。
　　再次，對樺褐孔菌多糖中的單糖組成進(jìn)行了分析。本論文采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化高效液相色譜新方法來分析樺褐孔菌多糖中的單糖組成。結(jié)果顯示，樺褐孔菌多糖主要含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖6種單糖。各單糖之間摩爾比為:甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖∶半乳糖∶木糖∶阿拉伯糖=2.13∶1.36∶7.01∶2.98∶1∶

5、1.78。在樺褐孔菌多糖的PMP衍生化色譜圖中發(fā)現(xiàn)了未知峰，經(jīng)HPLC-MS分析未知物的m/z為164。采用在水解樣品中加入一定量巖藻糖對照品的方法進(jìn)行進(jìn)一步的驗證，結(jié)果顯示，加入一定量巖藻糖的樣品組在未知成分的相應(yīng)保留時間位置的峰信號明顯增加，由此推斷未知成分是巖藻糖。
　　最后，采用MTT法研究了樺褐孔菌多糖對人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、小鼠骨髓瘤細(xì)胞(SP2)、人張氏肝細(xì)胞(Chang)增殖的抑制作用。樺褐孔菌多糖濃度在10～