中華補(bǔ)血草多糖的提取純化及抗腫瘤活性.pdf

1、白花丹科補(bǔ)血草屬植物中華補(bǔ)血草(Limonium sinense(Girard)Kuntze),為多年生泌鹽草本植物,廣泛分布于我國(guó)東北、華北等地區(qū),尤以江蘇省沿海灘涂分布甚廣。目前對(duì)其藥理作用的研究主要集中在抗菌、抗病毒、補(bǔ)血止血等方面。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),中華補(bǔ)血草粗提物具有增進(jìn)免疫、抗腫瘤以及對(duì)抗正常細(xì)胞損傷等多種藥理活性,且其多糖類成分含量豐富。本論文采集江蘇鹽城灘涂產(chǎn)中華補(bǔ)血草,研究其多糖成分的提取、分離純化、化學(xué)結(jié)構(gòu)特征以

2、及抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用,為中華補(bǔ)血草開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 1.運(yùn)用單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)研究中華補(bǔ)血草總多糖(LSP)的提取條件,確定了總多糖的最佳提取條件為:提取溫度95℃；超聲時(shí)間50 min；料液比1:12；提取2次后醇沉。采用該工藝提取的LSP得率為12.80％,苯酚-硫酸法測(cè)定中華補(bǔ)血草總多糖含量為60％。運(yùn)用DEAE-52纖維素柱層析方法,得到中華補(bǔ)血草多糖的3種組分:LSPD-1,LSPD-2,LSPD-3,再

3、分別過(guò)Sephadex G-100凝膠柱進(jìn)一步純化,得到LSPs-1,LSPs-2,LSPs-3三組分,經(jīng)高效液相檢測(cè),呈單一對(duì)稱峰,表明達(dá)到均一純度。
　　 2.采用UV、HPLC、GC等分析手段,分析了LSPs-1,LSPs-2,LSPs-3的單糖組成和平均分子量。該3種組分的紫外光譜在260 nm-280 nm處無(wú)明顯的吸收,表明不含核酸、蛋白質(zhì)。HPLC測(cè)定3種組分的平均分子量分別為:1.31×105 Da,1.33×1

4、05 Da,1.65×106 Da。GC結(jié)果顯示:LSPs-1主要由葡萄糖、半乳糖和甘露糖組成,其摩爾比為1.77:1:2.38；LSPs-2主要由葡萄糖、鼠李糖和甘露糖組成,其摩爾比為1:11.67:2.24:LSPs-3主要葡萄糖和木糖組成,其摩爾比為1:1.01。
　　 3.研究了LSP抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)兩個(gè)方面的藥理活性。結(jié)果顯示,400 mg／kgLSP顯著抑制荷瘤小鼠瘤體的生長(zhǎng),抑瘤率達(dá)38％,LSP能部分抑制離體培養(yǎng)

5、的HepG2、Hela等腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),但抑制率低于常用抗腫瘤藥物5-Fu。與抗腫瘤藥5-Fu聯(lián)合使用后,對(duì)heps實(shí)體瘤小鼠瘤體生長(zhǎng)的抑制率增加了23.8％,同時(shí)降低了5-Fu免疫毒性,表明其與化療藥物聯(lián)用具有減毒增效作用。免疫調(diào)節(jié)試驗(yàn)結(jié)果表明,100 mg／kg LSP能對(duì)抗環(huán)磷酰胺(CTX)的免疫抑制作用,提高巨噬細(xì)胞吞噬活性、小鼠溶血素水平、脾臟細(xì)胞體外增殖,即顯著提高小鼠非特異性免疫和特異性免疫活性。
　　 總之,本論