百蕊草多糖的提取、純化、結構表征及抗氧化活性的研究.pdf

1、為了提高百蕊草多糖的實際應用價值，本論文采用了響應面分析和正交實驗分析法對百蕊草多糖的堿提取工藝、脫蛋白方法和脫色工藝進行了優(yōu)化。在此基礎之上，利用DEAE-52陰離子交換色譜柱分離純化百蕊草粗多糖，并對分離得到的各個組分多糖的結構特征及抗氧化性質進行了一系列探討，所得實驗結果如下：
　　1.單因素實驗和響應面分析得出，百蕊草多糖得率(Yield)與料液比(A)、提取溫度(B)、提取時間(C)和氫氧化鈉濃度（ D）之間的二次擬合方

2、程為：Y=-294.43208+0.79207A+2.97038B+70.64933C+240.34833D-0.0059AB+0.34AC+2.325 AD-0.163BC-0.1425BD+2.6CD-0.040423A2-0.012281B2-16.81733C2-207.93333D2，優(yōu)化后的百蕊草多糖堿提工藝參數(shù)為：料液比1:33g/mL，提取溫度95℃，提取時間2h，氫氧化鈉濃度0.74mol/L，經(jīng)驗證百蕊草多糖的實際提

3、取率20.86％，與預測值的相對偏差小于1%。
　　2.比較了Sevage法、三氯乙酸法和鹽酸法三種脫蛋白方法各自的蛋白質清除率和多糖損失率，最終確定選用三氯乙酸法脫蛋白。利用正交實驗優(yōu)化百蕊草多糖的過氧化氫脫色工藝，優(yōu)化后的脫色工藝條件為：脫色溫度60℃，pH調至8.5，加入6%體積的過氧化氫，脫色2小時。
　　3.百蕊草粗多糖(TP)經(jīng)DEAE-52陰離子交換色譜柱分離得到了TP-W、TP-1和TP-3三個組分，將粗多糖

4、及各組分分別進行氣相色譜(GC)分析。GC結果顯示，TP-W由阿拉伯糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖組成，其組成比例為10.54%：5.41%：4.62%：13.01%：30.38%：35.78%；TP-1是由阿拉伯糖、木糖、半乳糖和甘露糖組成，其組成比例為23.18%：25.64%：14.57%：36.50%；TP-3由阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、半乳糖和甘露糖組成，其組成比例為28.50%：16.00%：23.30%：11.79%

5、：20.3%。
　　4.TP-W、TP-1和TP-3的紫外光譜顯示，各組分均不含有蛋白質及核酸類雜質，多糖純度較高。TP-3的紅外光譜顯示，在3400、2900cm-1等處有明顯的糖類物質特征吸收峰，且是具有吡喃環(huán)結構的β構型異頭碳。
　　5.測定了百蕊草總多糖及其三個組分的還原能力以及對DPPH自由基、羥基自由基的清除能力。結果表明，百蕊草多糖具有較強抗氧化活性，其中TP的還原能力與清除DPPH自由基的能力較強，TP-3組

6、分對羥基自由基的清除能力較強，TP-1與TP-W也都表現(xiàn)出了還原力與清除自由基的能力。
　　6.TP-3經(jīng)靜態(tài)激光光散射儀（DLS）和動態(tài)激光光散射儀（SLS）檢測，測得TP-3的重均分子量為3.819×107g/mol，分子旋光半徑為423.3nm，流體力學半徑為1239.94nm，分子構象傾向于球形。
　　7.TP-3經(jīng)剛果紅結合實驗和透射電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)其分子微觀形態(tài)主要為具有三股螺旋結構的球形分子，與激光散射的檢測結果