北蒼術多糖的提取、性質及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：
　　本文對北蒼術多糖的提取、分離純化工藝進行了優(yōu)選，并對其單糖組成、抗腫瘤活性進行了初步探測。研究了純化后的北蒼術多糖的部分物理化學性質，分子量，糖醛酸含量、單糖組成及其連接方式，為北蒼術多糖的規(guī)?；a及臨床應用提供了實驗依據。
　　方法：
　　1.以北蒼術多糖的含量和純度為指標考察了半纖維素酶、纖維素酶、果膠酶及其復合酶法輔助超聲提取對北蒼術多糖提取率的影響，優(yōu)選出最佳的酶組合。利用正交試驗考察酶解溫度、酶

2、解時間、酶解pH及料液比對北蒼術多糖含量的影響，優(yōu)選出最佳酶解工藝。
　　2.以北蒼術多糖損失率，脫蛋白率為指標，考察 Sevag法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶酶解-三氯乙酸法及三氯乙酸-正丁醇法對北蒼術多糖脫蛋白的影響。通過DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析和Sephadex-150凝膠柱層析進行分離純化，得到北蒼術精制多糖。
　　3.通過間羥基連苯法測定糖醛酸的含量，并通過紅外光譜（IR），凝膠滲透色譜，

3、氣質聯用（GC-MS）對所得北蒼術精制多糖進行了性質、分子量和組成分析的研究。并采用MTT法測定北蒼術多糖對卵巢癌細胞株Skov3細胞增殖的抑制作用，臺盼藍法測定北蒼術多糖對 Hela細胞、肝癌細胞株 hepg2及7721的影響。
　　結果：
　　1.酶法輔助超聲提取北蒼術多糖的最佳酶解組合為纖維素酶與果膠酶（比例為1:1），最佳酶解工藝為酶用量為藥材的1.2％（g/g），在 pH5、50℃條件下酶解50min，在此條件下，

4、北蒼術多糖的提取率是32.29％，遠高于不酶解的對照組（高出48.66%）。DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析法及SephadexG-150凝膠柱層析法分離均得到一個單一組分，經苯酚-濃硫酸法測定其純度達92.68%。
　　2.實驗所得北蒼術精制多糖為均一組分，白色粉末，易溶于水，其多糖含量為92.68%，蛋白質含量為0.8%，粗多糖和精制多糖糖醛酸含量分別為4.36%和4.07%，分子量為11171Da。紅外

5、光譜顯示出多糖的特征峰。GC-MS測定其僅有果糖組成，并以2→1方式連接。
　　3.北蒼術多糖對卵巢癌細胞株skov3、人宮頸癌Hela細胞、肝癌細胞株hepg2及7721增殖均有明顯的抑制作用，尤其是對肝癌細胞株hepg2增殖的抑制率達87.40%。
　　結論：
　　在本實驗研究中，采用不同的酶對北蒼術藥材進行酶解后以超聲提取北蒼術多糖，以多糖的含量和純度為指標，進行酶解北蒼術工藝的初探。經過篩選，選定纖維素酶與果膠

6、酶（比例為1:1）為北蒼術的酶解方法。并以該方法輔助超聲提取北蒼術多糖，考察了酶解溫度，酶解時間、酶解pH及料液比對北蒼術多糖含量的影響。
　　在此條件下，北蒼術多糖的提取率為32.29%，遠高于不酶解的對照組（比直接超聲法高出48.66%），條件穩(wěn)定且重現性好。本實驗選取的脫蛋白方法為TCA法，在此方法下脫蛋白后的北蒼術多糖含量高，損失少。脫蛋白后的北蒼術多糖經DEAE陰離子交換柱和Sephadex-G150凝膠柱純化后為單一峰

7、，多糖純度高達92.68%，GC-MS法測定其由果糖(98.2%)和少量的葡萄糖(1.8%)組成，并以2→1方式連接。綜合甲基化及NMR圖譜分析結果，ACPS的結構可以表示如下：
　　α-D-Glcp-(1→2)-[β-D-Fruf-(1→2)-β-D-Fruf-]n-(1→2)-β-D-Fruf，其對對人卵巢癌細胞株Skov3、肝癌細胞株hepg2及7721、宮頸癌Hela細胞的增殖均有一定的抑制作用。本研究為擴大其臨床應用范圍