納米硒化黑木耳多糖抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的:本研究通過響應面法優(yōu)化液體發(fā)酵及發(fā)酵罐發(fā)酵獲得黑木耳胞外多糖，并通過乙醇沉淀法分離胞外多糖，以黑木耳多糖為原料對其進行納米硒化，并進一步考察納米硒化黑木耳多糖的抗菌活性和抗腫瘤活性，旨在為進一步對納米硒化黑木耳多糖研究奠定基礎，為更合理開發(fā)和利用黑木耳這一藥用資源提供依據(jù)。
　　方法:以黑木耳菌原菌作為材料，在無菌條件下對黑木耳菌進行PDA培養(yǎng)。對培養(yǎng)成功后的黑木耳菌轉移至液體培養(yǎng)基中，并通過響應面法優(yōu)化液體發(fā)酵的培養(yǎng)條件。

2、單因素法優(yōu)化發(fā)酵罐發(fā)酵條件。培養(yǎng)液體所得的黑木耳多糖通過苯酚硫酸法來進行檢測。對黑木耳多糖進行納米硒化，并將納米硒化后的黑木耳多糖通過TEM進行表征，觀察并測量其粒徑大小?？疾焖眉{米硒化黑木耳多糖的抗菌和抗腫瘤活性，通過MTT法進行納米硒化黑木耳多糖的抗腫瘤活性實驗。
　　結果:白色絲狀體黑木耳菌在擴大培養(yǎng)的PDA培養(yǎng)基上長勢良好。響應面法優(yōu)化的液體培養(yǎng)基適合黑木耳菌生長。黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖的最優(yōu)條件為碳源可溶性淀粉3％、

3、氮源胰蛋白胨0.15%、水果皮莎白瓜皮4%、中藥材紅景天10%，在此條件下的黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖含量為0.02451 g/ml。發(fā)酵罐培養(yǎng)單因素試驗中，最佳溫度為26℃，在此條件下胞外多糖含量最高。最佳轉速為120r/min，在此條件下胞外多糖含量最高。利用實驗獲得的納米硒化黑木耳多糖溶液進行抑菌試驗，其中對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度為50mg/mL，抑菌圈直徑為7.34mm；對枯草桿菌的最小抑菌濃度為25mg/mL，抑菌圈直徑為

4、6.58mm；對大腸桿菌的最小抑菌濃度為12.5mg/mL，抑菌圈直徑為7.95mm；對綠膿桿菌的最小抑菌濃度為50mg/mL，抑菌圈直徑為6.97mm。通過納米硒化黑木耳多糖進行抗腫瘤實驗，1.5mg/ml的抑制率為61.27%，1mg/ml的抑制率為44.22%，0.5mg/ml的抑制率為41.36%，0.25mg/ml的抑制率為36.75%，0.125mg/ml的抑制率為28.96%。
　　結論:以黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖為

5、考察目標，通過實驗獲得了黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖的最優(yōu)條件，在此優(yōu)化條件下的黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖含量最高。同時在發(fā)酵罐培養(yǎng)優(yōu)化實驗獲得的培養(yǎng)最優(yōu)條件下，也可以獲得較高含量的黑木耳多糖。通過實驗獲得納米硒化黑木耳多糖溶液，并且采用TEM進行了表征，符合納米的粒徑要求。在抑菌實驗中，可以觀察到納米硒化黑木耳多糖溶液對大腸桿菌抑菌效果最佳。通過納米硒化黑木耳多糖抗腫瘤實驗，濃度越高抑制效果越好，最佳濃度為1.5 mg/ml，其抑制率為61