黑木耳多糖AAP-Ⅱa級分的制備及其生物活性的研究.pdf

1、黑木耳是我國重要的食用菌作物之一。黑木耳中含有大量的活性成分一黑木耳多糖。近代，由于黑木耳多糖具有重大保健價值而倍受學術界重視，本文在前人的工作基礎上開展了對黑木耳多糖AAP-Ⅱa級分的特性、結構以及生物活性，包括抗菌作用、抑制腫瘤作用、抗衰老抗心肌缺血及其分子作用機理等的系統(tǒng)研究。主要研究結果如下： 1.黑木耳多糖AAP-Ⅱa級分的化學特性表征 將市售黑木耳干品去雜、粉碎、脫脂、浸提(超聲波協(xié)同酶法)、離心或過濾、濃縮

2、，醇沉、酶與Sevage復合法脫除蛋白質，經(jīng)冷凍干燥后，即得黑木耳多糖。 黑木耳多糖的平均提取率為8.58％。采用DEAE SephadeX A-25色譜柱對脫除蛋白質后的黑木耳多糖進行分級，并用Sepbadex G-200凝膠色譜柱純化，得到黑木耳多糖AAP-Ⅱa級分，該級分得率為4.59％。并對AAP-Ⅱa級分的純度和理化特性進行了鑒定。經(jīng)過液相色譜，紙層析分析說明，AAP-Ⅱa級分是由葡萄糖、巖藻糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和鼠

3、李糖組成的雜多糖，摩爾比例為11.52:1.27:1.00:0.61:0.23。凝膠柱層析法測得其平均分子量為165000。AAP-Ⅱ a級分中中性糖含量為58.93％，葡萄糖醛酸的含量為33.82％；蛋白質含量為1.90％：鈣、鎂、硒、鐵元素含量分別為：3.01mg／g、2.23mg／g、23.51ttg／g和1.04mg／g。采用原子力顯微鏡和掃描電鏡觀察了多糖分子的形貌。推測糖分子在固態(tài)時是產(chǎn)生大的島嶼狀的宏觀聚集，分子間分子內(nèi)結

4、合致密。 2.黑木耳多糖AAP-Ⅱa級分的抗菌效果研究 結果表明，AAP-Ⅱa級分對大多數(shù)革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌均有較強的抑菌作用，對部分酵母菌也有良好的抑制生長作用，且抑菌所需濃度低，抑菌pH值作用范圍廣、熱穩(wěn)定性強，其抗菌效果略低于苯甲酸鈉，對霉菌沒有明顯的抑制作用。 3.黑木耳多糖AAP-Ⅱa級分對肝癌H22細胞的生長抑制作用 通過體內(nèi)給藥，結果顯示AAP-Ⅱa級分能顯著抑制肝癌H22細胞的

5、生長，同時明顯提高了荷瘤小鼠的免疫器官重量，促進小鼠淋巴細胞的增殖作用和遲發(fā)型超敏反應強度，增強免疫作用等，其作用效果與劑量呈正相關。上述結果提示，AAP-Ⅱa級分的體內(nèi)抗腫瘤活性是通過增強機體的免疫活性來實現(xiàn)的。另外它可使荷瘤小鼠血清的SOD含量升高，MDA值降低。說明其抗腫瘤活性還與其抗氧化活性有關。 4.黑木耳多糖AAP-Ⅱa級分的抗衰老作用 實驗表明，AAP-Ⅱa可降低小鼠體內(nèi)MDA和脂褐素含量，并能抑制衰老模型

6、小鼠體內(nèi)MDA和脂褐素含量的升高，說明AAP-Ⅱa對細胞結構和細胞物質(如脂質、蛋白質等)具有良好的保護作用。AAP-Ⅱa能提高小鼠體內(nèi)GSH-Px活性和SOD活性，甚至在衰老模型的某些器官中，它們的活性高于正常對照組。 5.黑木耳多糖AAP-Ⅱa級分抗衰老的作用機理 通過DNA“l(fā)adder”和流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，一定濃度的AAP-Ⅱa可以調(diào)節(jié)胸腺細胞的細胞周期，并能在一定程度上抑制胸腺細胞過度凋亡，降低其凋亡率。AA

7、P-Ⅱa能下調(diào)促凋亡的Fas基因的轉錄，并上調(diào)抗凋亡的Bc1-2基因的轉錄，說明AAP-Ⅱa在調(diào)控細胞凋亡方面具有下調(diào)促凋亡基因表達及上調(diào)抗凋亡基因表達的協(xié)同作用，從而重塑凋亡調(diào)控基因表達的平衡狀態(tài)，逆轉衰老時細胞過度凋亡的趨勢從而延緩衰老。 6.黑木耳多糖AAP-Ⅱa級分的抗心肌缺血活性 實驗證明AAP-Ⅱa具有改善心肌缺血的作用。同時還能降低血壓，而對心律沒有明顯影響：AAP-Ⅱa 50mg·Kg<'-1>組在改善心

8、電圖ST段的上移作用較明顯，且有一定程度的縮小心肌梗塞區(qū)面積的作用。提示AAP-Ⅱa在抗氧自由基這一保護缺血心肌的重要途徑中有顯著作用，這可能是AAP-Ⅱa抗心肌缺血、保護缺血時心肌細胞損傷的機制之一。首次報道AAP-Ⅱa能顯著提高血清中PGI<,2>代謝產(chǎn)物6-KetoPGF<,lα>的水平，而對TXA<,2>的代謝產(chǎn)物TXB<,2>水平的影響不顯著，即能促進促缺血心肌組織PGI<,2>的合成，這可能是AAP-Ⅱa保護心肌缺血的又一機