黑木耳多糖AAP-4與原花青素對輻射誘導(dǎo)氧化損傷協(xié)同防護作用.pdf

1、電離輻射對機體的損傷是通過原發(fā)作用的直接和間接作用，引起生物分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的變化，出現(xiàn)相應(yīng)生化代謝紊亂，繼而導(dǎo)致各種慢性疾病等。篩選高效低毒的輻射防護劑已成為科研工作者研究的熱點。針對兩個或兩個以上多個通路的天然產(chǎn)物組合作為一種新型的輻射防護劑，被認(rèn)為是更好的延遲輻射損傷的方法。新的證據(jù)表明，多靶向或不同靶向劑組合具有多種途徑的抗輻射活性，而不會引起任何毒性，將有利于預(yù)防或治療電離輻射損傷。因此，通過體外抗氧化的相互作用效果研究，從6種

2、多酚中篩選出與黑木耳多糖（AAP）協(xié)同抗氧化活性最強的葡萄籽原花青素（GSP）作為后續(xù)研究目標(biāo),并對 AAP組成和結(jié)構(gòu)進行分析,研究AAP-4與GSP的組合對輻射誘導(dǎo)氧化損傷協(xié)同防護功效，進一步揭示其作用機制。
　　通過6種具有代表結(jié)構(gòu)的多酚與黑木耳多糖對 ABTS+·和 DPPH·自由基清除效果為50％的研究分析，表明GSP與AAP的組合對ABTS+·（CI0.41±0.06）和DPPH·（CI0.91±0.09）清除具有較好的

3、協(xié)同抗氧化效果。通過在體外抗氧化模型，使用Compusyn軟件，系統(tǒng)分析了AAP與GSP體外抗氧化的相互作用效果，結(jié)果表明 AAP與GSP對ABTS+·、O2-·、DPPH·和OH·自由基的清除效果，具有顯著的協(xié)同效應(yīng)，從而降低組分的使用劑量；對總還原能力，具有一定的協(xié)同效應(yīng)；而對脂質(zhì)過氧化的抑制作用，未顯示出協(xié)同效果。
　　通過DEAE-52、Sephadex G-200層析對AAP進行純化，得到主要成分AAP-4。采用 FT-

4、IR、HP-GPC、GC-MS對其結(jié)構(gòu)進行表征，研究發(fā)現(xiàn) AAP-4分子量為3.30×105，由D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖以及D-半乳糖以摩爾比例1.97：4.67：9.91：0.31組成，通過甲基化和NMR對AAP-4結(jié)構(gòu)做進一步表征，結(jié)果得出 AAP-4的糖殘基構(gòu)型主要為α-D-Xylp-)1→、3,6→)-α-D-Manp-(1→和4→)-β-D-Glcp-(1→， AAP-4主鏈?zhǔn)怯?Glcp和 Manp組成的甘露葡聚糖，

5、α-D-Xylp-)1→為末端殘基。
　　通過細(xì)胞和小鼠的輻射誘導(dǎo)氧化損傷模型，研究 AAP-4與 GSP對脾細(xì)胞的協(xié)同輻射防護作用，研究結(jié)果表明 AAP-4與 GSP組合顯著的增加了脾細(xì)胞的存活能力、脾細(xì)胞的增殖能力，進而協(xié)同提升了機體的免疫活性；表明AAP-4與GSP組合能夠通過降低氧化產(chǎn)物量，提高抗氧化物質(zhì)的含量，減少輻射對脾細(xì)胞DNA的損傷，從而起到了有效的協(xié)同輻射防護作用。
　　通過對細(xì)胞周期進行分析，研究AAP-

6、4與GSP的協(xié)同輻射可能防護機制，表明AAP-4與GSP的組合能夠抑制60Co-γ射線輻射誘導(dǎo)G0/G1期小鼠脾細(xì)胞的停滯，并對60Co輻射誘導(dǎo)的脾細(xì)胞凋亡起到協(xié)同防護功效；利用免疫組織化學(xué)的方法，通過對細(xì)胞凋亡線粒體途徑進行分析，研究發(fā)現(xiàn) AAP-4與 GSP能夠通過抑制Bax、細(xì)胞色素c和Caspase-3的表達，促進Bcl-2的表達，最終達到協(xié)同抑制脾細(xì)胞凋亡的效果。
　　本研究發(fā)現(xiàn) AAP-4與 GSP的組合可以提高機體抗