黑木耳中性多糖片段硫酸酯對(duì)輻射誘導(dǎo)氧化應(yīng)激防護(hù)作用.pdf

1、隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,由于空間技術(shù)和核技術(shù)的應(yīng)用,輻射傷害不僅見于戰(zhàn)時(shí),已滲透到各個(gè)領(lǐng)域,輻射產(chǎn)生大量自由基能引發(fā)機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng),現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為炎癥、腫瘤、衰老、血液病、以及心、肝、肺、皮膚等近百余種相關(guān)疾病的發(fā)生機(jī)理與體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多而得不到及時(shí)有效清除有著密切的關(guān)系,由于合成抗氧化劑存在穩(wěn)定性差、作用時(shí)間短、毒副作用、不適合長(zhǎng)期服用等問題,發(fā)掘新型天然抗氧化劑已成為食品科學(xué)和航天醫(yī)學(xué)的研究重點(diǎn)。本課題采用化學(xué)修飾方法制備黑木耳中性多

2、糖片段硫酸酯(Sulfate of neutral Auricularia auricular polysaccharides,SNAAP),采用清除體外自由基進(jìn)行活性跟蹤,經(jīng)細(xì)胞模型確證,SNAAP對(duì)氧化應(yīng)激具有很好的防護(hù)作用,進(jìn)一步建立氧化應(yīng)激動(dòng)物模型,從細(xì)胞、分子水平系統(tǒng)研究SNAAP輻射防護(hù)作用,旨在促進(jìn)黑木耳及其多糖資源的深度開發(fā)利用。
　　選用氯磺酸-N,N二甲基甲酰胺(CSA-DMF)作為酯化試劑,采用單因素實(shí)驗(yàn),以

3、硫酸酯化試劑(CSA:DMF)體積比為1:6;酯化溫度為50℃,反應(yīng)時(shí)間為3h,進(jìn)行非選擇性修飾制備木耳中性多糖片段硫酸酯:得率為51.89±1.36％,離子色譜法測(cè)定其硫酸根含量為31.00±2.79%,計(jì)算硫酸基取代度為0.78±0.11;經(jīng)氣相色譜法分析該工藝下制備SNAAP產(chǎn)物中甲酰胺和N,N-二甲基甲酰胺溶劑殘留量分別為80.1±7.5μg/L和64.1±4.8μg/L,均符合人用藥品注冊(cè)技術(shù)規(guī)范國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)和中國(guó)藥典

4、(2000版)限量標(biāo)準(zhǔn)。
　　采用活性跟蹤法,研究了SNAAP的體外抗氧化活性,當(dāng)受試樣品濃度為2.0mg/mL時(shí),SNAAP對(duì)超氧自由基清除率為95.71%,而黑木耳中性多糖片段清除率僅為3.75%,表明硫酸酯化能顯著提高黑木耳中性多糖片段對(duì)超氧自由基的清除能力,篩選得到SNAAP對(duì)超氧自由基清除活性最強(qiáng)。紅外光譜解析SNAAP在1249cm-1(νS=O)和820cm-1(νC-O-S)處有-OSO3的S=O伸縮振動(dòng)和C-O-

5、SO3基團(tuán)的伸縮振動(dòng)特征吸收峰,說明合成產(chǎn)物SNAAP有硫酯鍵。且硫酸基位于SNAAP中單糖殘基平伏位置,并在C6位上發(fā)生取代;紫外光譜顯示SNAAP未出現(xiàn)新的特征吸收峰,證明該酯化方法是較為溫和的硫酸化修飾手段。原子力顯微鏡表征SNAAP分子中具有三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),相對(duì)分子量為6.53×106Da,且與黑木耳中性多糖片段相比,經(jīng)過硫酸化,SNAAP的分子量分布變窄,分子量較為均一和集中。SNAAP單糖組成分別由D-核糖、D-甘露糖、L

6、-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-半乳糖組成,各單糖之間摩爾比例為1.0:7.0:1.0:1.0:4.0:10:2.0。
　　MTT法評(píng)價(jià)了SNAAP不具有細(xì)胞毒性作用,以X射線輻射誘導(dǎo)人外周血為氧化應(yīng)激模型,采用血常規(guī)分析,篩選得到SNAAP對(duì)氧化應(yīng)激防護(hù)作用最佳,進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)SNAAP中劑量組(60μg/mL)可以將輻射受損的白細(xì)胞數(shù)維持至對(duì)照組水平,減少輻射引起的畸變白細(xì)胞數(shù),具有輻射防護(hù)功效。

7、r>　　構(gòu)建γ輻射誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激動(dòng)物模型,研究發(fā)現(xiàn)SNAAP各劑量組能夠直接清除輻射產(chǎn)生的自由基,可有效的促進(jìn)造血系統(tǒng)恢復(fù)和免疫細(xì)胞增殖和生長(zhǎng),提高機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能;能夠顯著提高小鼠各臟器中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和乳酸脫氫酶(LDH)活性,增加還原型谷胱甘肽(GSH)的含量,降低髓過氧化物酶(MPO)活性,降低丙二醛(MDA)水平,證實(shí)SNAAP能夠有效激活抗氧化酶系,抑制氧