褐藻多糖硫酸酯對(duì)HUVEC血管生成作用的影響.pdf

1、目的:血管生成是指已存在的血管芽生和套疊式的微血管生長(zhǎng)形成新血管的過(guò)程，是一個(gè)由多種細(xì)胞因子、細(xì)胞外基質(zhì)和多種細(xì)胞組分共同參與的、動(dòng)態(tài)的、協(xié)調(diào)的復(fù)雜過(guò)程。新生血管生成主要涉及血管內(nèi)皮細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞的增殖、遷移、分裂、分化，以及隨后的管腔化，這一過(guò)程受到很多的血管生成因子和抑制因子的精密調(diào)控。新生血管為腫瘤生長(zhǎng)提供必需的氧氣和養(yǎng)料，是腫瘤不斷生長(zhǎng)的“命脈”，并為腫瘤轉(zhuǎn)移提供了有利的條件。因此，通過(guò)抗血管生成療法，來(lái)達(dá)到遏制腫瘤擴(kuò)散轉(zhuǎn)移的行

2、為，是目前治療腫瘤的有效策略之一。
　　 褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan)是褐藻的細(xì)胞間產(chǎn)物，是一種水溶性雜多糖，其主要成分為L(zhǎng)-巖藻糖和硫酸根，除此之外，還含有半乳糖、木糖、甘露糖、糖醛酸等。研究發(fā)現(xiàn)其具有抗病毒、抗氧化、抗炎癥、抗血管生成、抗凝血、抗腫瘤等生物活性，且其生物學(xué)效應(yīng)與它的硫酸根含量密切相關(guān)。本論文旨在研究褐藻多糖硫酸酯抗新血管生成作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探究。通過(guò)利用不同的血管生成模型，在體外、半體內(nèi)等不同水

3、平對(duì)褐藻多糖硫酸酯的抗新血管生成作用進(jìn)行了評(píng)價(jià);采用western、PT-PCR等方法初步探討褐藻多糖硫酸酯對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF-A)表達(dá)的影響。
　　 方法:1.采用熱水浸提-乙醇沉淀法從裙帶菜孢子葉中提取得到褐藻多糖硫酸酯，并通過(guò)苯酚-硫酸法、硫酸鋇比濁法、硫酸-咔唑法、尺寸排阻色譜柱法、旋光度法測(cè)定了Fucoidan的總糖含量、硫酸根含量、糖醛酸含量、分子量和旋光度。
　　

4、 2.采用MTT的方法檢測(cè)不同濃度的褐藻多糖硫酸酯對(duì)人臍靜血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　 3.利用Transwell模型評(píng)價(jià)不同濃度的褐藻多糖硫酸酯對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移抑制作用。
　　 4.采用管腔形成模型評(píng)價(jià)了褐藻多糖硫酸酯對(duì)新血管生成的抑制作用。
　　 5.應(yīng)用新生血管網(wǎng)的抑制實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)了褐藻多糖硫酸酯在體外水平抑制新血管生成作用。
　　 6.采用大鼠動(dòng)脈環(huán)模型探討了褐藻多糖硫酸酯在半體內(nèi)水

5、平抑制新血管生成作用。
　　 7.利用western、RT-PCR方法檢測(cè)經(jīng)褐藻多糖硫酸酯處理的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF-A在蛋白水平和基因水平的表達(dá)，對(duì)其抗血管生成機(jī)制進(jìn)行初步探究。
　　 結(jié)果:1.苯酚-硫酸法、硫酸鋇比濁法、硫酸-咔唑法、尺寸排阻色譜柱法結(jié)果顯示褐藻多糖硫酸酯的總糖含量、硫酸根含量、糖醛酸含量和分子量分別為59.2％、21％、9.13％和9.52×104Da。旋光度檢測(cè)顯示褐藻多糖硫酸酯的旋光度為

6、0.99°(0.6mg/ml)。
　　 2.MTT結(jié)果顯示褐藻多糖硫酸酯對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用，并且與多糖的濃度及作用時(shí)間有依賴關(guān)系。作用24h抑制效果不明顯，48h的增殖抑制率明顯提高。
　　 3.Transwell模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示褐藻多糖硫酸酯能夠抑制人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力。
　　 4.管腔形成模型結(jié)果顯示褐藻多糖硫酸酯對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的管腔形成有一定的抑制作用，且隨著藥物

7、濃度的增加，其抑制作用提高，有較好的量效關(guān)系。
　　 5.新生血管網(wǎng)的抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明褐藻多糖硫酸酯對(duì)已經(jīng)形成的新生血管網(wǎng)具有抑制作用，且抑制作用較為顯著。
　　 6.大鼠動(dòng)脈環(huán)模型是內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、管腔形成的一個(gè)綜合結(jié)果的體現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明隨著褐藻多糖硫酸酯濃度的增加其對(duì)動(dòng)脈環(huán)新生血管生成的抑制作用也隨之增加。
　　 7.Western、RT-PCR結(jié)果均顯示褐藻多糖硫酸酯作用人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞能夠下調(diào)V