褐藻多糖硫酸酯對人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：研究褐藻多糖硫酸酯(FPS)對體外培養(yǎng)的人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞(HRIF)增殖的影響，對其分泌纖維連接蛋白(FN)、層粘連蛋白(LN)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的影響，以及對HRIF凋亡的影響，以期探討FPS抗腎間質(zhì)纖維化的作用機(jī)理，為藥物的進(jìn)一步開發(fā)提供分子細(xì)胞學(xué)理論依據(jù)。 方法：1.HRIF的原代培養(yǎng)與鑒定：取人腎腎乳頭組織，切碎后經(jīng)胰蛋白酶消化，用含15﹪胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)液在5﹪CO2、37℃孵育箱

2、中培養(yǎng)。通過細(xì)胞形態(tài)、免疫熒光化學(xué)檢測波形蛋白、α-肌動蛋白、細(xì)胞角蛋白和結(jié)蛋白等作細(xì)胞鑒定。 2.臺盼蘭拒染法進(jìn)行細(xì)胞毒試驗檢測藥物安全性：以不同濃度的FPS(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)孵育體外培養(yǎng)的HRIF不同時間(24小時、48小時)，用不加藥物的HRIF作對照。結(jié)束培養(yǎng)后，洗脫細(xì)胞，臺盼蘭染色，計算各組活細(xì)胞比率。 3.MTT法檢測細(xì)胞增殖：以不同濃度的FPS(25μg/

3、ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/m1)孵育體外培養(yǎng)的HRIF不同時間(24小時、48小時)，用不加藥物的HRIF作對照。結(jié)束培養(yǎng)后，采用MTT法檢測各組HRIF增殖情況。 4.ELISA法分別檢測FN、LN、TGF-β1的水平：以不同濃度的FPS(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)孵育體外培養(yǎng)的HRIF不同時間(24小時、48小時)，用不加藥物的HRIF作對照。結(jié)束培養(yǎng)后各組

4、取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，用ELISA法分別檢測FN、LN、TGF-β1的分泌水平。 5.流式細(xì)胞儀檢測HRIF凋亡情況：以不同濃度的FPS(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)孵育體外培養(yǎng)的HRIF24小時，用不加藥物的HRIF作對照。結(jié)束培養(yǎng)后，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。 結(jié)論：本實驗成功培養(yǎng)了人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞。證實FPS可明顯抑制體外培養(yǎng)的HRIF增殖，而且可以減少FN、LN兩種細(xì)胞外基質(zhì)