血管緊張素-(1-7)對醛固酮激活腎間質(zhì)成纖維細胞的影響.pdf

1、目的:觀察血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]對醛固酮(ALD)激活大鼠腎間質(zhì)成纖維細胞(NRK-49F)及細胞外基質(zhì)分泌的影響,并初步探討其機制。方法:體外傳代培養(yǎng)NRK-49F細胞,按1×105/ml濃度接種于六孔板中,按以下實驗分組加入不同干預(yù)因素:(1)對照組:僅加入含體積分數(shù)10％胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基,即正常培養(yǎng)基;(2)ALD組:正常細胞培養(yǎng)基中加入的ALD刺激液,調(diào)整其終濃度為10-7mol/L;(3)

2、Ang-(1-7)組:正常細胞培養(yǎng)基中加入的Ang-(1-7)刺激液,調(diào)整其終濃度為10-6mol/L;(4)ALD+Ang-(1-7)組:正常細胞培養(yǎng)基中加入Ang-(1-7)+ALD混合刺激液,調(diào)整其終濃度分別為10-6mol/L和10-7mol/L。按上述實驗分組進行如下檢測:(1)干預(yù)細胞48h后,運用細胞免疫化學(xué)染色法檢測細胞激活標(biāo)志物α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達;(2)干預(yù)細胞48h后,運用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELIS

3、A)檢測各組細胞上清液中Ⅰ型膠原(ColⅠ)的含量;按上述實驗分組干預(yù)細胞30min后,提取細胞總蛋白,運用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測各組細胞中磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK1/2)的表達。結(jié)果:(1)細胞免疫化學(xué)染色檢測結(jié)果:干預(yù)48h后:對照組組細胞仍呈長梭型,胞漿內(nèi)僅見少量棕黃色顆粒,Ang-(1-7)組與之類似;而ALD組細胞胞漿比例增大,細胞肥大,部分細胞呈多角狀,胞漿內(nèi)染色明顯,呈顆粒狀,分界清楚。半

4、定量分析顯示對照組細胞及Ang-(1-7)組細胞只有基礎(chǔ)量的α-SMA表達,與對照組細胞相比較,Ang-(1-7)組細胞α-SMA的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),而ALD組細胞及ALD+Ang-(1-7)組細胞α-SMA的表達顯著升高(P<0.05);與 ALD組細胞相比較, ALD+Ang-(1-7)組細胞α-SMA的表達明顯減少(P<0.05)。(2)ELISA檢測結(jié)果:干預(yù)48h后:ALD組細胞及ALD+Ang-(1-7)

5、組細胞上清液中ColⅠ含量較對照組顯著升高(P<0.05),而Ang-(1-7)組細胞上清液中ColⅠ含量與對照組相比較沒有明顯變化(P>0.05);與 ALD組細胞相比較, ALD+Ang-(1-7)組細胞上清液中ColⅠ含量明顯減少(P<0.05)。(3)Western blot檢測結(jié)果:干預(yù)細胞30min后:與對照組細胞相比較,ALD組細胞pERK1/2的表達顯著升高(P<0.05),Ang-(1-7)組細胞pERK1/2表達差異