帕立骨化醇對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞活化及增殖的影響.pdf

1、目的:觀察帕立骨化醇對(duì)血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)誘導(dǎo)的大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞(NRK49F)增殖及活化的影響,并初步探討其機(jī)制。
　　 方法:將傳代培養(yǎng)的NRK49F按以下分組加入不同干預(yù)因素:帕立骨化醇終濃度分別為10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L,AngⅡ終濃度為10-6mol／L。①對(duì)照組:NRK49F培養(yǎng)液中不加入干擾因素；②帕立骨化醇組:NRK49F培養(yǎng)液中分別加入終濃度為

2、10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L的帕立骨化醇；③AngⅡ組:NRK49F培養(yǎng)液中加入終濃度為10-6mol／L的AngⅡ；④AngⅡ+帕立骨化醇組:NRK49F培養(yǎng)液中同時(shí)加入終濃度為10-6mol／L的AngⅡ和終濃度分別為10-6mol／L、10-7mol、L10-8mol／L的帕立骨化醇。(1)用WST-1法檢測(cè)腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞數(shù)目,在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光光度(OD)值,OD值越大代表細(xì)

3、胞數(shù)目越多。(2)采用細(xì)胞免疫化學(xué)法(SP法)檢測(cè)各組細(xì)胞α-SMA蛋白表達(dá),并用mage-pro plus6.0分析系統(tǒng)對(duì)α-肌動(dòng)蛋白的表達(dá)進(jìn)行半定量分析,以顆粒的光密度IOD值反映陽(yáng)性細(xì)胞蛋白表達(dá)總量:IOD值越大代表陽(yáng)性細(xì)胞蛋白表達(dá)總量越多。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)NRK49F的細(xì)胞周期及凋亡。各組數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±S)表示,使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析,組間差異采用單因素設(shè)計(jì)的方差分析,兩兩比較采用LSD法,

4、P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:(1)WST-1法檢測(cè)腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞數(shù)目檢測(cè)結(jié)果:①帕立骨化醇能抑制基礎(chǔ)狀態(tài)下的NRK49F增殖:與對(duì)照組OD值0.3956相比,10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L帕立骨化醇的OD值分別為0.1288、0.2218、0.3208；對(duì)照組與帕立骨化醇組、帕立骨化醇組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②帕立骨化醇能抑制Ang

5、Ⅱ誘導(dǎo)的NRK49F的增殖:與AngⅡ組OD值0.4853相比,10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L帕立骨化醇+AngⅡ的OD值分別下降了0.1837、0.1466和0.1071； AngⅡ組與帕立骨化醇組、帕立骨化醇組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)α-SMA蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果:①帕立骨化醇能明顯抑制基礎(chǔ)狀態(tài)的NRK49F的α-SMA的表達(dá):與對(duì)照組IOD值68.7438相比,10-6mol／L

6、、10-7mol／L、10-8mol／L帕立骨化醇的IOD值分別為0、0、35.6285；對(duì)照組與帕立骨化醇組、帕立骨化醇組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②帕立骨化醇能明顯AngⅡ誘導(dǎo)的NRK-49Fα-SMA蛋白的表達(dá),從而抑制AngⅡ誘導(dǎo)的NRK49F的活化:與AngⅡ組IOD值237.54相比,10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L帕立骨化醇+AngⅡ的IOD值分別下降了214.504、206.

7、584和167,75.44；AngⅡ組與帕立骨化醇組、帕立骨化醇組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果:在基礎(chǔ)狀態(tài)下,經(jīng)過(guò)不同濃度的帕立骨化醇(10-6mol／L、10-7mol／L、10-8mol／L)誘導(dǎo)48小時(shí)后,NRK-49F細(xì)胞G1期細(xì)胞較對(duì)照組增加(22.％、16％、13％),在AngⅡ組誘導(dǎo)狀態(tài)下,帕里骨化醇干預(yù)組G1期細(xì)胞較AngⅡ組亦明顯增加(22.％、13％、11％)(P<0.05)