共生菌來(lái)源天然產(chǎn)物的體外抗腫瘤活性篩選及作用機(jī)制研究.pdf

1、為獲得微生物新藥的多樣性，科研人員逐漸將目光投向較少研究的特境微生物。共生菌在與宿主長(zhǎng)期共進(jìn)化過(guò)程中，易形成特殊的代謝途徑，能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎和活性顯著的次生代謝產(chǎn)物，是抗腫瘤新藥及先導(dǎo)化合物的豐富來(lái)源。
　　本學(xué)位論文首先采用MTT法對(duì)從共生菌發(fā)酵產(chǎn)物中分離獲得的15個(gè)天然化合物進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選，測(cè)試細(xì)胞株為人肝癌細(xì)胞株HepG2和SMMC-7721，人宮頸癌細(xì)胞株HeLa，陽(yáng)性對(duì)照藥為順鉑。結(jié)果顯示:①trichoverr

2、itone(4)、chaetoglobosin E(6)和penochalasin C(8)對(duì)HepG2細(xì)胞具有顯著的增殖抑制活性，IC50值分別為0.053、0.74和0.16μg/mL; dehydrovomifoliol(2)、cytoglobosin A(7)、Guxi-2(9)、deoxyleporin B(11)和fumigaclavine C(13)對(duì)HepG2細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖抑制活性，IC50值分別為7.62、7.33

3、、4.10、4.51和2.72μg/mL。②trichoverritone(4)、chaetoglobosin F(5)、penochalasin C(8)和fumigaclavine C(13)對(duì)SMMC-7721細(xì)胞具有顯著的增殖抑制活性，IC50值分別為0.12、0.94、0.56和0.65μg/mL; dehydrovomifoliol(2)、Guxi-2(9)和deoxyleporin B(11)對(duì)SMMC-7721細(xì)胞具有較

4、強(qiáng)的增殖抑制活性，IC50值分別為4.03、1.62和8.10μg/mL。③trichoverritone(4)、chaetoglobosin F(5)、 penochalasin C(8)、Guxi-2(9)、deoxyleporin B(11)和fumigaclavine C(13)對(duì)HeLa細(xì)胞具有顯著的增殖抑制活性，IC50值分別為0.13、0.18、0.84、0.17、0.23和0.13μg/mL; dehydrovomifo

5、liol(2)和chaetoglobosin E(6)對(duì)HeLa細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖抑制作用，IC50值分別為3.81和7.20μg/mL。黃花蒿內(nèi)生菌Myrotheciumroridum IFB-E091產(chǎn)生的新環(huán)肽化合物Guxi-2(9)對(duì)上述三株腫瘤細(xì)胞株均表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，其抗腫瘤活性值得深入研究。
　　本學(xué)位論文還進(jìn)一步研究了Guxi-2(9)、mytoxin B和myrothecine A對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的

6、體外抗腫瘤活性機(jī)制。量效關(guān)系研究表明，在測(cè)試濃度梯度范圍內(nèi)，Guxi-2對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的作用隨化合物濃度的增加明顯增強(qiáng)，具有明顯的劑量依賴(lài)性;myrothecine A對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的作用隨著濃度的增加有一定的增強(qiáng)，表現(xiàn)出一定的劑量依賴(lài)性;而mytoxinB對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的作用隨化合物濃度的增加沒(méi)有明顯的變化。時(shí)效關(guān)系研究表明，在測(cè)定時(shí)間范圍內(nèi)，Guxi-2、mytoxinB和myrothecineA對(duì)SM

7、MC-7721細(xì)胞的作用隨時(shí)間的延長(zhǎng)有一定的增強(qiáng)，呈現(xiàn)一定的時(shí)間依賴(lài)性。細(xì)胞形態(tài)觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，三個(gè)化合物都能不同程度地改變SMMC-7721細(xì)胞形態(tài)。細(xì)胞周期分析顯示，Guxi-2和mytoxin B能顯著誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞S期阻滯，而myrothecine A誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞S期阻滯的作用較弱。AnnexinⅤ/PI雙染色法發(fā)現(xiàn)，Guxi-2和mytoxin B能顯著提高SMMC-7721細(xì)胞的凋亡率，而myrothec

8、ine A對(duì)SMMC-7721細(xì)胞凋亡率的影響較小。Western blot分析顯示，Guxi-2和mytoxinB分別處理SMMC-7721細(xì)胞后，抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)下降、促凋亡蛋白Bax的表達(dá)增加，說(shuō)明這兩個(gè)化合物可能都是通過(guò)下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)和上調(diào)Bax蛋白的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡;myrothecine A處理SMMC-7721細(xì)胞后，抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)有微弱變化，而促凋亡蛋白Bax的表達(dá)明顯