丹參多酚酸鹽體外抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景及目的：從中醫(yī)藥中開(kāi)發(fā)研制新的抗腫瘤有效成分是當(dāng)前癌癥治療的熱點(diǎn)課題。傳統(tǒng)中藥丹參具有活血化瘀功效，臨床廣泛用于心腦血管疾病。大量研究結(jié)果表明，丹參具有抗腫瘤作用，但對(duì)于丹參抗腫瘤的研究主要集中在脂溶性成分方面。本課題采用丹參的水溶性活性成分丹參多酚酸鹽為原料，首次研究了其體外抗腫瘤的作用，探討其可能機(jī)制，為今后應(yīng)用于臨床治療腫瘤提供了一定的依據(jù)。 方法：1. 采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定丹參多酚酸鹽體外對(duì)人肝癌細(xì)

2、胞株SMMC-7721細(xì)胞、人肺腺癌細(xì)胞株SPC-A-1細(xì)胞、B淋巴瘤細(xì)胞株Raji細(xì)胞、急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞四種人體腫瘤細(xì)胞株增殖的影響，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線； 2. 通過(guò)倒置顯微鏡、吉姆薩(Giemsa)染色、吖啶橙(AO)熒光染色和透射電鏡觀察SMMC-7721細(xì)胞形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的變化； 3. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的改變及細(xì)胞凋亡情況； 4. 基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)凋亡梯狀條帶；

3、 5. 應(yīng)用蛋白免疫印跡(Western Blot)技術(shù)檢測(cè)凋亡有關(guān)的基因P53和Bcl-2的蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：1. 丹參多酚酸鹽在一定濃度范圍內(nèi)(0.2mg/ml~1 mg/ml)對(duì)SPC-A-1、SMMC-7721、Raji、HL-60等細(xì)胞株的增殖都有明顯的抑制作用，且呈時(shí)間和劑量依賴關(guān)系； 2. 光鏡下可見(jiàn)丹參多酚酸鹽處理后SMMC-7721細(xì)胞體積變小，核固縮、深染、邊集，晚期細(xì)胞核破裂等凋亡形態(tài)，隨藥

4、物濃度增加細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變?cè)矫黠@，電鏡下可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的變化，如胞質(zhì)內(nèi)空泡增多，核染色質(zhì)凝聚和邊集，及有膜包裹的凋亡小體出現(xiàn)； 3. 0.4mg/ml丹參多酚酸鹽作用于SMMC-7721細(xì)胞不同時(shí)間后，碘化丙啶(PI)單染流式細(xì)胞儀分析，G0/G1期出現(xiàn)“凋亡峰”，S期細(xì)胞比例明顯增加；不同濃度丹參多酚酸鹽作用于SMMC-7721細(xì)胞48小時(shí)后，Annexin V-FITC/PI雙染結(jié)果丹參多酚酸鹽誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡率遠(yuǎn)大于壞死率

5、，且作用呈濃度依賴性，提示丹參多酚酸鹽可將SMMC-7721細(xì)胞阻滯于S期繼而發(fā)生細(xì)胞凋亡； 4. 不同濃度丹參多酚酸鹽作用于SMMC-7721細(xì)胞48小時(shí)后，DNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示藥物組有梯形凋亡條帶(DNA ladder)，而陰性對(duì)照組未見(jiàn)此現(xiàn)象； 5. 不同濃度丹參多酚酸鹽作用SMMC-7721細(xì)胞48小時(shí)，Western Blot檢測(cè)顯示低、中濃度藥物組細(xì)胞的P53蛋白表達(dá)水平有明顯升高，而高濃度藥物組的P