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文檔簡(jiǎn)介
1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
由于腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞對(duì)天然多胺需求的巨大差異,使天然多胺成為良好的腫瘤靶向性載體。萘酰亞胺類化合物對(duì)DNA有良好的嵌入性能,腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的DNA存在差異性,可以起到一個(gè)靶向治療作用,因此,萘酰亞胺-多胺綴合物能產(chǎn)生良好的靶向抗腫瘤作用。PI3K/Akt信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一,通過(guò)影響下游多種效應(yīng)分子的活化狀態(tài),在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮抑制凋亡、促進(jìn)增殖的關(guān)鍵作用,與人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本文主要
2、研究新型萘酰亞胺-多胺綴合物4W誘導(dǎo)人轉(zhuǎn)染Akt1結(jié)腸癌細(xì)胞與正常結(jié)腸癌細(xì)胞在增殖、分化、存活、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面的影響,并做了相應(yīng)分子機(jī)制的探討。
實(shí)驗(yàn)方法:
以人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116為研究對(duì)象,通過(guò)基因轉(zhuǎn)染把Akt1基因轉(zhuǎn)入HCT116細(xì)胞內(nèi),通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)能力檢測(cè),克隆形成檢測(cè),細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè),來(lái)研究Akt1對(duì)HCT116細(xì)胞的影響。通過(guò)MTT法來(lái)檢測(cè)4W的抗腫瘤活性,通過(guò)AO/EB, PI/Hoechs
3、t33342, RH123/ Hoechst33342, Lyso-Tracker Red/ Hoechst33342,ROS/Hoechst33342熒光染色法檢測(cè)4W對(duì)細(xì)胞的凋亡的影響,通過(guò)transwell小室實(shí)驗(yàn),研究4W對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲的影響,通過(guò)免疫印跡法來(lái)檢測(cè)Bcl-2家族,細(xì)胞色素c,MMP家族等相關(guān)的蛋白的表達(dá),并對(duì)其相互關(guān)系進(jìn)行了分析。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
轉(zhuǎn)染過(guò)Akt1的HCT116細(xì)胞與正常的HCT1
4、16結(jié)腸癌細(xì)胞相比,細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖能力有所提高,細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力有所降低,通過(guò)4W對(duì)兩種細(xì)胞處理,發(fā)現(xiàn)對(duì)其都有生長(zhǎng)抑制作用,并且凋亡呈時(shí)間劑量依賴性,但轉(zhuǎn)染的細(xì)胞對(duì)于藥物有更好的耐受。通過(guò)transwell小室的遷移和侵襲實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)4W能抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移和侵襲,呈時(shí)間劑量依賴性。通過(guò)熒光染色實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)4W能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。通過(guò)免疫印跡實(shí)驗(yàn),4W能夠引起Caspase家族的活化,細(xì)胞色素c的釋放, Bcl-2家族活化,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,
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