新型萘酰亞胺類似物以及簡(jiǎn)單有機(jī)胺降解核酸及其可能作用機(jī)理.pdf

1、由于人工核酸酶可在核酸底物的特定部位將其斷裂，所以它可以作為重要的分子生物學(xué)工具，可應(yīng)用于疾病的基因治療，蛋白質(zhì)分離純化中去除核酸，還可用于反義PCR技術(shù)、DNA足跡技術(shù)、化學(xué)探針等。無論從生物學(xué)、化學(xué)和醫(yī)學(xué)的角度，人工核酸酶的研究都具有非常重要的理論及應(yīng)用價(jià)值。 本論文應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳、HPLC、DNA克隆與測(cè)序、32p核酸標(biāo)記/放射自顯影和計(jì)算機(jī)分子模擬技術(shù)，考察了在沒有金屬離子存在條件下，新型萘酰亞胺類化合物和簡(jiǎn)單有機(jī)胺

2、切割核酸的活性，初步探索其降解核酸的機(jī)理。本論文工作主要分以下四個(gè)方面：(1)光激發(fā)下萘酰亞胺類似物降解核酸。在光激發(fā)下萘酰亞胺類似物能夠高效地降解核酸，并且發(fā)現(xiàn)該過程對(duì)蛋白質(zhì)的活性及其活性中心氨基酸幾乎沒有影響，具有一定的選擇性。 (2)加熱條件下萘酰亞胺類似物降解核酸。通過瓊脂糖凝膠電泳分析在沒有金屬離子的加熱條件下，萘酰亞胺類化合物對(duì)DNA/RNA及其核酸模擬物也具有很好的切割活性，并且具有濃度和時(shí)間可控性；尤其在70℃加

3、熱條件下，濃度在μM級(jí)的不同萘酰亞胺類化合物對(duì)不同大小的質(zhì)粒DNA都有切割活性，降解產(chǎn)生的DNA線性片段約為原大小的一半。另外在生理?xiàng)l件下，具有最好切割活性的萘酰亞胺類化合物C2可以高效地降解玉米葉基因組DNA和總RNA、小牛胸腺DNA、寡聚核苷酸，而對(duì)蛋白質(zhì)及氨基酸沒有影響。 (3)有機(jī)胺降解核酸。有機(jī)胺常被用來修飾萘酰亞胺化合物的側(cè)鏈，因此本論文考察了其降解核酸的活性。結(jié)果顯示，在70℃加熱條件下，部分二元或多元有機(jī)胺可以有

4、效地切割DNA，并且具有很好的濃度和時(shí)間可控性。濃度在mM級(jí)的部分有機(jī)胺對(duì)不同大小的DNA都普遍具有切割活性。而在50℃加熱條件下，DNA降解效果明顯低于70℃。 (4)核酸降解機(jī)理初步探索。為了研究核酸降解的機(jī)理，通過T4DNA連接酶反應(yīng)、DNA克隆測(cè)序、32P核酸標(biāo)記/放射自顯影和計(jì)算機(jī)分子模擬技術(shù)確定了萘酰亞胺化合物在加熱條件下是以水解型機(jī)理切割核酸的，并且具有切割GG/GC位點(diǎn)的選擇性，初步推測(cè)萘酰亞胺化合物切割核酸的機(jī)