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文檔簡介
1、目的:制備虎尾輪根黃酮類提取物,觀察其對腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用。
方法:95%乙醇回流提取制備虎尾輪根粗提物,D101型大孔吸附樹脂純化得到黃酮類提取物。以蘆丁為對照品,通過對粗提物和黃酮類提取物在不同絡(luò)合條件下的紫外-可見光譜掃描,選擇合適的含量測定方法。以黃酮類含量為指標(biāo),用動態(tài)吸附法比較4種大孔吸附樹脂的吸附率和解吸率,篩選出從粗提物中富集黃酮類的最佳樹脂類型,并對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化,純化粗提物中的黃酮。MTT法觀察虎
2、尾輪根提取物對CA46、NB4、AGS和BEL-7404細(xì)胞生長的影響;用Hoechst33258染色法、瓊脂糖凝膠電泳法檢測細(xì)胞凋亡情況;用TUNEL法測定細(xì)胞凋亡率。
結(jié)果:運(yùn)用氯化鋁-醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH5.2)比色法,虎尾輪根粗提物、黃酮類提取物和蘆丁光譜峰形相似,在405 nm處均有明顯吸收,線性回歸方程為D=24.338c+0.0043,r=0.9996,n=5(D:吸光度,c:濃度(μg·mL-1)),蘆
3、丁濃度在0.008~0.04 mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD<3%(=6);絡(luò)合物吸光度60分鐘內(nèi)穩(wěn)定,RSD<1%(n=6);平均回收率99.59%。ADS-17型樹脂對虎尾輪根黃酮類有較好的吸附和解吸效果,其最佳工藝條件為:上樣濃度0.8 mg·mL-1,吸附流速2 mL·min-1,30%~90%乙醇溶液梯度洗脫?;⑽草喐痔嵛镏悬S酮類含量為13.6%,ADS-17樹脂純化后黃酮類提取物中黃酮類含量為63.3%
4、。MTT測定結(jié)果顯示,粗提物及黃酮類提取物均可抑制CA46、NB4、AGS和BEL-7404細(xì)胞的增殖,黃酮類提取物的抑制作用更強(qiáng),與粗提物相比差異顯著(P<0.01),且抑制作用隨藥物濃度的增加和作用時間的延長而增強(qiáng)。四種細(xì)胞中以AGS細(xì)胞受到的抑制作用最明顯?;⑽草喐S酮類能引起AGS細(xì)胞凋亡,凋亡率與正常對照組相比,12.8μg·mL-1組差異有顯著性(P<0.05);32、80、200、500μg·mL-1組差異有非常顯著性(P
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