虎尾輪根黃酮類提取物的制備及體外抗腫瘤作用的初步研究.pdf

1、目的：制備虎尾輪根黃酮類提取物，觀察其對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用。
　　 方法：95％乙醇回流提取制備虎尾輪根粗提物，D101型大孔吸附樹脂純化得到黃酮類提取物。以蘆丁為對(duì)照品，通過對(duì)粗提物和黃酮類提取物在不同絡(luò)合條件下的紫外-可見光譜掃描，選擇合適的含量測(cè)定方法。以黃酮類含量為指標(biāo)，用動(dòng)態(tài)吸附法比較4種大孔吸附樹脂的吸附率和解吸率，篩選出從粗提物中富集黃酮類的最佳樹脂類型，并對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，純化粗提物中的黃酮。MTT法觀察虎

2、尾輪根提取物對(duì)CA46、NB4、AGS和BEL-7404細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；用Hoechst33258染色法、瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；用TUNEL法測(cè)定細(xì)胞凋亡率。
　　 結(jié)果：運(yùn)用氯化鋁-醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH5.2)比色法，虎尾輪根粗提物、黃酮類提取物和蘆丁光譜峰形相似，在405 nm處均有明顯吸收，線性回歸方程為D=24.338c+0.0043，r=0.9996，n=5(D：吸光度，c：濃度(μg·mL-1))，蘆

3、丁濃度在0.008～0.04 mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD＜3％(=6)；絡(luò)合物吸光度60分鐘內(nèi)穩(wěn)定，RSD＜1％(n=6)；平均回收率99.59％。ADS-17型樹脂對(duì)虎尾輪根黃酮類有較好的吸附和解吸效果，其最佳工藝條件為：上樣濃度0.8 mg·mL-1，吸附流速2 mL·min-1，30％～90％乙醇溶液梯度洗脫?；⑽草喐痔嵛镏悬S酮類含量為13.6％，ADS-17樹脂純化后黃酮類提取物中黃酮類含量為63.3％

4、。MTT測(cè)定結(jié)果顯示，粗提物及黃酮類提取物均可抑制CA46、NB4、AGS和BEL-7404細(xì)胞的增殖，黃酮類提取物的抑制作用更強(qiáng)，與粗提物相比差異顯著(P＜0.01)，且抑制作用隨藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。四種細(xì)胞中以AGS細(xì)胞受到的抑制作用最明顯?；⑽草喐S酮類能引起AGS細(xì)胞凋亡，凋亡率與正常對(duì)照組相比，12.8μg·mL-1組差異有顯著性(P＜0.05)；32、80、200、500μg·mL-1組差異有非常顯著性(P