影響荷斯坦母牛產(chǎn)奶性狀候選基因的研究.pdf

1、本研究以荷斯坦母牛為試驗材料，采用聚合酶鏈式反應（PCR）、聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)（CAPS）、單鏈構象多態(tài)（SSCP）、序列分析和基因克隆等方法研究PPARGC1A，F(xiàn)ASN和STAT5A候選基因的遺傳變異，并分析這些基因?qū)伤固鼓概?個產(chǎn)奶性狀（305 d產(chǎn)奶量、蛋白率、乳脂率、乳糖率、干物質(zhì)率）的影響，尋找影響荷斯坦母牛產(chǎn)奶性狀的主效基因或有較大關聯(lián)的基因型或遺傳標記，為奶牛產(chǎn)奶性狀的標記輔助選擇提供科學依據(jù)。主要研究

2、結果如下：
　　 1)PPARGC1A基因DNA序列中存在C85330T、A103592C、2632delCTTT和T84064C四個突變位點。C85330T突變位點經(jīng)HaeⅢ酶切產(chǎn)生三種基因型CC、CT和TT，其頻率分別為0.621、0.326和0.053；A103592C突變位點經(jīng)NheⅠ酶切產(chǎn)生三種基因型AA、AC和CC，基因型頻率分別為0.430、0.444、0.126；2632delCTTT突變位點經(jīng)SSCP檢測發(fā)現(xiàn)

3、三種基因型EE、EF、FF，其頻率分別為0.742、0.237、0.021；T84064C突變位點經(jīng)SSCP檢測發(fā)現(xiàn)三種基因型GG、GH、HH，其基因型頻率分別為0.770、0.218、0.012。Χ2檢驗表明所檢測到的四個多態(tài)位點均處于Hardy-Weinberg平衡。關聯(lián)分析顯示，對于C85330T突變位點，TT和CT基因型乳脂率最小二乘均值顯著高于CC基因型所對應的值（P<0.05），TT和CT基因型乳脂率最小二乘均值差異不顯著（

4、P>0.05）；TT是提高乳脂率的最有利基因型，CC是最不利基因型；對于A103592C突變位點，AA和AC基因型蛋白率最小二乘均值顯著高于CC基因型所對應的值（P<0.05），AA和AC基因型蛋白率最小二乘均值差異不顯著（P>0.05）；AA是提高蛋白率的最有利基因型，CC是最不利基因型。對于2632delCTTT和T84064C突變位點，基因型之間5個產(chǎn)奶性狀最小二乘均值差異均不顯著（P>0.05）。
　　 2)FASN基

5、因DNA序列中存在G15028A和G16923A兩個突變位點。G15028A突變位點經(jīng)SSCP檢測發(fā)現(xiàn)三種基因型AA、AB、BB，基因型頻率分別為0.757、0.233、0.010；G16923A突變位點經(jīng)SSCP檢測發(fā)現(xiàn)三種基因型CC、CD、DD，基因型頻率分別為0.489、0.425、0.086，且該突變導致丙氨酸變?yōu)樘K氨酸。Χ2檢驗表明該兩個多態(tài)位點均處于Hardy-Weinberg平衡。關聯(lián)分析結果初步顯示荷斯坦母牛FASN基因

6、G16923A多態(tài)位點的等位基因D與荷斯坦母牛較高乳脂率顯著相關（P<0.05），D等位基因是提高奶牛乳脂率的一個潛在的DNA標記。
　　 3)STAT5A基因DNA序列中存在A14217G和17266indelCCT兩個突變位點。A14217G突變位點經(jīng)MspA1Ⅰ酶切產(chǎn)生三種基因型AA、AG和GG，其基因型頻率分別為0.252、0.486、0.262；17266indelCCT突變位點經(jīng)SSCP檢測發(fā)現(xiàn)三種基因型CC、CT

7、、TT，基因型頻率分別為0.751、0.234、0.015。Χ2檢驗表明該兩個多態(tài)位點均處于Hardy-Weinberg平衡。關聯(lián)分析表明，AG和GG基因型蛋白率最小二乘均值顯著高于AA基因型所對應的值（P<0.05），GG和AG基因型蛋白率最小二乘均值差異不顯著（P>0.05）；GG是提高蛋白率的最有利基因型，AA是最不利基因型。TT和CT基因型305 d產(chǎn)奶量最小二乘均值顯著高于CC基因型所對應的值（P<0.05），TT和CT基因型