實驗大腸桿菌的培養(yǎng)與分離浙科版選修

1、浙科版生物選修（1）生物技術(shù)實踐IB模塊,1-1什么是生物技術(shù),生物技術(shù)=生物工程 應(yīng)用自然科學及工程學原理，以微生物體、動物體、植物體或其組成部分作為生物反應(yīng)器將物料進行加工，以提供產(chǎn)品來為社會服務(wù)的技術(shù)。,1-2 傳統(tǒng)生物技術(shù),傳統(tǒng)生物技術(shù)指主要通過微生物的發(fā)酵來生產(chǎn)商品.如:醬、醋、酒、面包、奶酪、酸奶等,1-3 現(xiàn)代生物技術(shù),一般而言，現(xiàn)代生物技術(shù)可以分成以下五種：一、細胞工程二、發(fā)酵工程三、蛋白質(zhì)工程

2、四、酶工程五、基因工程,現(xiàn)代生物技術(shù)與傳統(tǒng)生物技術(shù)的本質(zhì)區(qū)別是現(xiàn)代生物技術(shù)中用到了基因工程。,一、細胞工程,按照人們的需要和科學設(shè)計改變細胞的遺傳基礎(chǔ)，并通過細胞(組織)培養(yǎng)，細胞雜交(融合)，核移植和胚胎移植等技術(shù)，重組細胞的結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物，以改變生物的結(jié)構(gòu)和功能，快速繁殖和培養(yǎng)出人們所需要的新物種的生物工程技術(shù)。,二、發(fā)酵工程,微生物的無氧呼吸叫發(fā)酵1.定義：利用DNA重組技術(shù)對不同生物的遺傳基因，根據(jù)人們的意愿，進行基因的

3、切割、拼接及重新組合，再轉(zhuǎn)入生物體內(nèi)，產(chǎn)生出人們所期望的產(chǎn)物或創(chuàng)造出具有新的遺傳特征的生物類型。,蛋白質(zhì)工程主要包括了解合成蛋白質(zhì)的DNA編碼序列、蛋白質(zhì)的分離純化、蛋白質(zhì)的序列分析和結(jié)構(gòu)功能分析、蛋白質(zhì)結(jié)晶和結(jié)構(gòu)力學分析等。,三、蛋白質(zhì)工程,酶工程即利用基因工程等手段，改變酶或蛋白質(zhì)的折疊方式、空間結(jié)構(gòu)、催化活性和穩(wěn)定性等,四、酶工程,選修1需學習的實驗,（微生物的利用） 實驗1 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 （酶的應(yīng)用）

4、 實驗4 果汁中的果膠和果膠酶 實驗5 加酶洗衣粉的使用條件和效果 實驗6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測 （生物工程在食品加工中的應(yīng)用） 實驗8 果酒及果醋的制作實驗 實驗10 泡菜的腌制和亞硝酸鹽的測定（淺嘗現(xiàn)代生物工程） 實驗11 植物的組織培養(yǎng),實驗1 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離,第一部分 :微生物的利用,一、基礎(chǔ)知識,1微生物,2培養(yǎng)基,3無菌技術(shù),二、實驗操作,2微生物的接種技術(shù),1操作步驟,,微

5、生物包括哪五類：,病毒細菌和藍細菌放線菌真菌原生動植物,特點：結(jié)構(gòu)都相當簡單,個體多數(shù)十分微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結(jié)構(gòu).,,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,,,一基礎(chǔ)知識,（一）微生物,1放線菌,1、結(jié)構(gòu)：單細胞原核分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）,鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素,微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/3是由放線菌產(chǎn)生的,應(yīng)用:,2病毒的結(jié)構(gòu)

6、,朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）,病毒的增殖：,3真菌,,如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu),酵母菌和霉菌,青霉,4細菌的外形與大小,細菌：單細胞不分枝的原核微生物。細菌細胞微小而透明，通常用適當染料染色（革蘭氏染色）后顯微鏡觀察,圖1-1 常見的三種細菌典型形態(tài)A.球菌 B.桿菌 C.弧菌,,,,細菌細胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、 擬核，細胞質(zhì)中又有液

7、泡、儲存性顆粒、核質(zhì)等。,細菌的構(gòu)造,圖 細菌的結(jié)構(gòu),細胞膜,擬核,*細胞壁,成分：肽聚糖細胞壁有哪些功能？ ①固定細胞外形；,②保護細胞免受外力的損傷；,,③阻攔大分子物質(zhì)進人細胞；,④使細胞具有致病性及對噬菌體的敏感性。,傷寒桿菌細胞壁中含毒素,芽孢,有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又

8、小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌.,菌落：,單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。,菌落,細菌的菌落特征因種而異,5細菌的營養(yǎng)物質(zhì),碳源 有機 、無機氮源 有機 、無機水無機鹽生長因子 即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶,根據(jù)

9、細菌所利用的能源和碳源的不同將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌:異養(yǎng)菌:腐生菌寄生菌 大部分病原菌,細菌的營養(yǎng)類型,,光能自養(yǎng)型:光合細菌化能自養(yǎng)型:硝化細菌,鐵細菌,硫細菌,大腸桿菌屬于異養(yǎng)兼性厭氧菌,（二）培養(yǎng)基,培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。,（1）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等，而液體

10、培養(yǎng)基一般用于工業(yè)生產(chǎn)。（2）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。（3）按化學成分來分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。,1.培養(yǎng)基的類型和用途,液體培養(yǎng)基：,表面生長,均勻混濁生長,沉淀生長,按物理狀態(tài)來分,固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔,按物理狀態(tài)來分,半固體培養(yǎng)基：,無動力 有動力(彌散),,,觀察細菌的運動、厭氧菌的分離和菌種鑒定,按物理狀態(tài)來分,選擇培養(yǎng)基,加入青霉素的培養(yǎng)基: 分離酵母菌、

11、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: 分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基: 分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: 分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細胞,按功能來分,鑒別培養(yǎng)基,伊紅美藍乳糖培養(yǎng)基,按功能來分,當大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時細菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍結(jié)合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光

12、澤。常用的伊紅美藍乳糖培養(yǎng)基，可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌,天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點：來源受限;成分復(fù)雜，影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析;易發(fā)生支原體污染;,天然培養(yǎng)基：,按化學成分來分,根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。

13、 優(yōu)點：標準化生產(chǎn)，組分和含量相對固定;成本低 缺點： 缺少某些成分，不能完全滿足體外細胞生長需要。,合成培養(yǎng)基:,按化學成分來分,血清中含有：①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子； ③激素；④促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長因子⑥轉(zhuǎn)移蛋白⑦不明成分,人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。,按化學成分來分,3.培養(yǎng)

14、基內(nèi)所含的基本物質(zhì),一般營養(yǎng)物質(zhì)(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)無機鹽其他物質(zhì) pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。,2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方 .,(2)碳源,可作為碳源的物質(zhì)有:含碳無機物: 、 、含碳有機物：,蛋白質(zhì),脂肪

15、酸,,碳酸鹽,碳酸氫鹽,糖類（主要）葡萄糖 乳糖,二氧化碳,不同微生物所利用的碳源不同異養(yǎng)型微生物的碳源為自養(yǎng)型微生物的碳源為,含碳有機物（有機碳）,含碳無機物（無機碳）,(3)氮源,可作為氮源的物質(zhì)有:含氮無機物： 、 、 、含氮有機物：,蛋白胨,牛肉膏,尿素,,固氮微生物所利用的氮源是,氮氣,氨氣,硝酸鹽,氨鹽,氮氣,不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方,不管哪種培

16、養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、 無機鹽、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH 、氧氣、滲透壓的要求．,細菌喜葷，霉菌喜素,大腸桿菌配方：酵母提取物：0.5g 蛋白胨：0.5g Nacl：0.5g 瓊脂 ： 1g 水:50ml,細菌喜中性偏堿，霉菌喜中性偏酸,3培養(yǎng)基配制原則：,營養(yǎng)要協(xié)調(diào)目的要明確PH要適宜,（三）無菌技術(shù),1.無菌技術(shù)的概念,無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物

17、的操作中，所有防止雜菌污染的方法。,（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒 ；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌 ；（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。,從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實驗過程要無菌操作,（１）消毒定義：,2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別,是指殺滅病原微生物的方法。區(qū)分為高程度消毒、中程度消毒、低程度消毒三種方式

18、。,1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 如牛奶的消毒3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……,(2)消毒的方法：,滅菌,概念：使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。方法：a 灼燒滅菌 b 干熱滅菌 c 高壓蒸汽滅菌,,灼燒滅菌,微生物的接種工具 (接種環(huán)、接種針)或其他金

19、屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒,注意適用范圍,干熱滅菌 160－170℃ ；1－2h,能耐高溫的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿),高壓蒸汽滅菌 100kPa 121℃ 15-30min,通常用于培養(yǎng)基的滅菌,,最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。 有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試

20、管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。 而培養(yǎng)皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。,1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？,2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、

21、燒瓶和吸管（3） 實驗操作者的雙手,答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。,答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。,思考,1,大腸桿菌的培養(yǎng)和分離,3.微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序,1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存,,二、實驗操作,1制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基2純化大腸桿菌3將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)1

22、2h和24h后，觀察并記錄,二、實驗操作,1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）,大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實驗操作,培養(yǎng)基的配置與滅菌,取2個250ml的三角瓶中分別裝入50mlLB液體培養(yǎng)基和50mlLB固體培養(yǎng)基（剛配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮紙包裝后高壓鍋滅菌15min。,LB液體培養(yǎng)基——細菌的擴大培養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基——細菌的劃線分離,封口膜：既通氣又不使菌進入,2、純化大腸桿菌,接種方法有：劃線分離法和涂布分離法,劃

23、線分離法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. 在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,這就是菌落.,微生物的接種技術(shù),1．計算、稱量2．溶化3．調(diào)pH：　pH7．6　4．過濾：這一步可以省去。5．分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。6．加塞7．包扎,操作步

24、驟,8．滅菌: 將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170 ℃下滅菌2h。 9．倒平板: 待培養(yǎng)基冷卻到50 ℃左右時，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種. 10．無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃

25、的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。,倒平板技術(shù),平板劃線的操作,不能使用脫脂棉，否則容易吸水，造成污染。,,,,1.旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；2.是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。,,,微生物的恒溫培養(yǎng),微生物的恒溫培養(yǎng),微生物的恒溫培養(yǎng),四、課題成果評價,（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2 d后無

26、菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習。 （三）是否進行了及時細致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的

27、同學會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣。,注意事項:1.接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次.2.劃線首尾不能相接3.劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)12~24h,1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 ℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？,問題討論,答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。,2.為什么

28、需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？,答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。,微生物的恒溫培養(yǎng),微生物的恒溫培養(yǎng),微生物的恒溫培養(yǎng),平板劃線的操作,不能使用脫脂棉，否則容易吸水，造成污染。,,,,1.旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；2.是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。,,,四、課題成果評價,（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保

29、溫1～2 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習。 （三）是否進行了及時細致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同

30、，及時觀察記錄的同學會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣。,（四）大腸桿菌的劃線分離,注意事項:1.接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次.2.劃線首尾不能相接3.劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)12~24h,1、劃線分離法,問題討論,1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？,答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避

31、免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？,答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,3.在作第二次以及其后的劃線操作時，

32、為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？,答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。,4.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？,5.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？,答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面

33、的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。,答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。,涂布分離法,純種的菌種稀釋一般采取最簡單常規(guī)的稀釋涂布平板法。 將菌種用接種環(huán)蘸取，放入培養(yǎng)液內(nèi)進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)即可。,涂布分離法,(1)系列稀釋操作:,涂布平板操作,劃線分離法和涂布分離法哪個更

34、好呢？,劃線分離：方法簡單，但單 菌落較難分開。涂布分離：單菌落更易分 開，但操作復(fù)雜。,分離后,一個菌體便會形成一個菌落,這是消除污染雜菌的通用方法,也是用于篩選高表達量菌株的最簡便方法之一,（五）大腸桿菌分離后保存,1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。2、長期保存：甘油冷凍管藏法,1.如何操作才可以盡量避免被雜菌污染?,(1)

35、膽大心細，操作快捷。（2）注意滅菌操作原則，滅菌徹底，降低環(huán)境污染概率。（3）注意微生物生長條件，如PH、滲透壓、溫度等。細菌喜堿，喜蛋白質(zhì)，喜37度；霉菌喜酸，喜糖，喜25-30度,2.在培養(yǎng)后如何判斷是否有雜菌污染?,（1）菌落的形態(tài)看，是否濕潤，透明，粘稠，顏色等。是區(qū)別細菌、酵母、放線菌和霉菌關(guān)鍵指標。（2）顯微鏡觀察其形態(tài)、大小、看是否有菌絲、孢子、芽孢。是區(qū)別細菌、酵母、放線菌和霉菌關(guān)鍵指標。（3）上述方法較難區(qū)別同

36、類的不同物種，需借助化學和進一步的形態(tài)觀察，如用革蘭氏染色法等。,3.進行恒溫培養(yǎng)時為什么要將培養(yǎng)皿倒置?,恒溫培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中的水分會以水蒸氣的形式蒸發(fā)，倒放培養(yǎng)皿則會使水蒸氣凝結(jié)成水滴留在蓋上；如果正放，則水分形成的水滴會落入培養(yǎng)基表面并擴散開。如果培養(yǎng)皿中已形成菌落，則會導(dǎo)致菌隨水擴散，很難再分成單菌落，達不到分離目的。,4.實驗完成后,接種過細菌的器皿應(yīng)如何處理?,所有接觸過菌的器皿都要先高壓滅菌后再洗滌（特別是培養(yǎng)基）；使用

37、后的廢棄物也要高壓滅菌后再拋棄,5.如果分離的是轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌,如何保證不被普通的大腸桿菌所污染?,轉(zhuǎn)基因用的質(zhì)粒不是細菌中原有的，而是經(jīng)過改造的，通常加入了抗性基因的DNA序列，所以可用含有相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)基對菌體進行培養(yǎng)。,接 種,,【典例解析】,例1．有關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機物只提供無機鹽 D.無機氮源也能提供能量,解析：不同的微生

38、物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項，它的表達是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而NaCl則只能提供無機鹽。對于D選項，無機氮源提供能量的情況還是存在

39、的，如NH3可為硝化細菌提供能量和氮源。,答案：D,例2．下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是A.防止雜菌污染 B.消滅雜菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.滅菌必須在接種前,答案：B,解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜

40、菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因為與發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。,例3．右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是 。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入 .,自養(yǎng)型微生物,含碳有機物,解釋：過量食鹽可用于培養(yǎng)

41、金黃色葡萄球菌，金黃色葡萄球菌是異養(yǎng)型的。,（3）若除去成分②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng) 。（4）表中營養(yǎng)成分共有 類。（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是 。,固氮微生物,3,調(diào)整pH,（6）右表中各成分重量確定的原則是 。（7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分是