第六章 芳酸類非甾體抗炎藥物的分析模板

1、第六章 芳酸類非甾體抗炎藥物的分析,主要內容：,§1 典型藥物分類與理化性質§2 鑒別試驗§3 特殊雜質檢查§4 含量測定§5 體內藥物分析,,醇羥基,,酚羥基,醇,酚,,羧酸,,芳酸,酯,游離羧基,游離羧基,,按結構分類,,水楊酸類,鄰氨基苯甲酸類,芳酸類非甾體藥物：分子結構中含有取代苯基的一類羧酸化合物。,鄰氨基苯乙酸類,芳基丙酸類,吲哚乙酸類,苯并噻嗪甲酸類,其他非甾體

2、抗炎藥,§1 典型藥物分類與理化性質,一、水楊酸類,典型藥物,水楊酸(salicylic acid),,游離羧基,,酚羥基，發(fā)生三氯化鐵反應,,苯環(huán),,游離羧基,阿司匹林(aspirin),酯鍵,苯環(huán),,pKa = 3.49,直接中和法兩步滴定法,水解后生成水楊酸雜質,水解后才發(fā)生三氯化鐵反應,雙水楊酯,,,甲芬那酸,,二、鄰氨基苯甲酸類,,有強烈綠色熒光,三、鄰氨基苯乙酸類,雙氯芬酸鈉,,,,有刺鼻感,布洛芬,ibup

3、rofen,,四、芳基丙酸類,五、吲哚乙酸類,吲哚美辛,,,六、苯并噻嗪甲酸類,吡羅昔康,,其他非甾體抗炎藥,對乙酰氨基酚,,,結構分析,包括：芳酸、芳酸酯、芳酸鹽共同點： 苯環(huán)、羧基不同點：不同的取代基（如酚羥基、芳伯氨基、鹵原子、雜環(huán)等）,主要理化性質,1.性狀：固體，有一定的熔點。2.溶解性：幾乎不溶于水，易溶于有機溶劑。堿金屬鹽易溶于水，難溶于有機溶劑。,3.酸性：,芳酸具游離羧基，呈酸性，其pKa在3～6之間，屬中等強

4、度的酸或弱酸；—X、—NO2、—OH等吸電子取代基存在使酸性增強。水楊酸>阿司匹林>苯甲酸； —CH3、—NH2等斥電子取代基存在使酸性減弱。,,鄰位取代>間位、對位取代，尤其是鄰位取代酚羥基，由于形成分子內氫健，酸性大為增強。芳環(huán)取代的脂肪酸類，酸性較弱。如雙氯芬酸、布洛芬等。,,4.易水解具有酯鍵和酰胺鍵的藥物均可發(fā)生水解?？捎檬Ｓ鄩A量法測定含量，如美洛昔康。 5.紫外、紅外特征吸收光譜分子中具有苯

5、環(huán)和特征官能團，具有紫外和紅外特征吸收。6.基團或元素特性酚羥基、芳伯氨基、鹵素、硫元素等。,§2 鑒別試驗,一、與三氯化鐵的反應,1.水楊酸反應,紫堇色,a.反應極為靈敏。,b.反應適宜的pH值為4~6 ，在強酸性下配合 物分解。,阿司匹林,+,+,,,+Fecl3,紫堇色配位化合物,水解后鑒別,?,對乙酰氨基酚 藍紫色,2.酚羥基反應,二、縮合反應,硫酸,二硝基苯肼,酮洛芬,

6、,腙,橙色,,,,三、重氮化－偶合反應,－－芳香第一氨的反應,HCl,Ar-NH2,,,重氮鹽,偶合,紅色,,對乙酰氨基酚貝諾酯,,貝諾酯,,,水解,重氮化,偶合,四、氧化反應,甲芬那酸,黃色(綠色熒光)(JP13),K2Cr2O7,深藍色→棕綠色,,H2SO4,,,,五、水解反應,1.阿司匹林,－－酯結構水解,2.雙水楊酯,雙水楊酯,,NaOH,煮沸,,水楊酸鈉,,稀HCl,水楊酸,,（白色）,沉淀在醋酸銨試液中可溶解,,六、特征元

7、素的分析,1.氯元素雙氯芬酸鈉+碳酸鈉 熾灼灰化 加水煮沸過濾 濾液顯氯化物鑒別反應2.硫元素美洛昔康于試管中熾灼，產生的氣體能使?jié)駶櫟拇姿徙U試紙顯黑色。,,,,1.紫外分光光度法,最大吸收波長（和/或最小吸收波長）吸光度法吸光度比值法,七、光譜法,對照圖譜對照,《藥品紅外光譜集》,水楊酸的紅外吸收光譜圖,2.紅外分光光度法,八、薄層色譜法比較供試品溶液與對照品溶液的比移值,九、HPLC比較供

8、試品溶液與對照品溶液的保留時間,§3 特殊雜質檢查,阿司匹林中游離水楊酸及有關物質的檢查,1.阿司匹林中游離水楊酸的檢查,來源：生產過程中乙?；煌耆?，或貯藏過程中 水解產生 。,ChP2005方法：鐵鹽比色法（稀硫酸鐵銨 ）,原理：阿司匹林結構中無酚羥基，不與高鐵鹽反應; 水楊酸有酚羥基，則可與高鐵反應呈紫堇色。,缺點：供試品溶液制備過程中阿司匹林可水解生成

9、 新的游離水楊酸。 ChP2010采用HPLC檢查。原料藥和制劑均需檢查游離水楊酸，限量各不相同。,2.阿司匹林中有關物質的檢查,指除游離水楊酸外的合成原料苯酚及其他合成副產物。色譜條件：與檢查“游離水楊酸”的流動相不同。要求：除水楊酸峰外，其他各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積（0.5%） 。,,,,,雜質對照品法,方法： 供試品→供試品溶液 雜質對照品→對照品溶液,,,供試品,對照

10、品,判斷：供試品中所含雜質斑點不得超過相應的雜質對照斑點。 優(yōu)點：同一物質，同一Rf值比較，準確度高、直觀性強。 缺點：需要雜質對照品。,,2.主成分自身對照法（高低濃度對比法）,方法：,（×）,判斷：,供試品溶液所顯雜質斑點不得深于對照溶液的主斑點（或熒光強度）,§4 含量測定,本類藥物原料藥的含量測定：酸堿滴定法制劑的含量測定：紫外-可見分光光度法和HPLC法,,一、酸堿滴定法,1

11、.直接滴定法－－阿司匹林,原理: 阿司匹林分子中有游離羧基，具弱酸性，可用標準堿溶液直接滴定。,方法: 取本品約0.4g, 精密稱定, 加中性乙醇 (對 酚酞指示液顯中性) 20mL溶解后, 加酚 酞指示液3滴, 用氫氧化鈉滴定(0.1mol/L) 滴定。每 1ml的氫氧化鈉滴定(0.1mol/L) 相當于18.02mg的C9

12、H8O4 。,,生成的鈉鹽是強堿弱酸鹽，偏堿性。,（2）指示劑為何選用酚酞？,討論:（1）溶劑為何使用中性乙醇？,使用乙醇：a.使供試品易于溶解;b.防止酯水解 使用中性乙醇：乙醇對酚酞顯酸性，扣除乙醇的酸性對測定的影響。,（3）操作事項,滴定過程中不斷振搖，防止局部水解 。,（4）特點 操作簡便，但缺乏專屬性，酸性物質有干擾。,不適合用于水楊酸含量較高的樣品測定。,（5）滴定度的計算,2. 剩余量滴定法,美洛昔康有烯醇

13、式結構，顯酸性，可用氫氧化鈉滴定液滴定，但在一般溶劑中溶解性差。用定量過量的氫氧化鈉滴定液溶解后，用鹽酸滴定液回滴定剩余的氫氧化鈉。,美洛昔康,【含量測定】取本品約0.4g，精密稱定，精密加氫氧化鈉滴定液（0. lmol/L)25ml，微溫溶解，放冷，加中性乙醇（對溴麝香草酚藍指示液顯中性）100ml ，加溴麝香草酚藍指示液10滴，用鹽酸滴定液（0.lmol/L)滴定，并將滴定的結果用空白試驗校正。每lml氫氧化鈉滴定液（0.lmol/

14、L)相當于35.14mg的 C14H13N3O4S2。,3. 水解后剩余滴定法－－阿司匹林,原理: 阿司匹林酯結構在堿性條件下易于水解, 加入定量過量的氫氧化鈉滴定液, 加熱 水解, 剩余的堿用硫酸滴定液回滴定。,方法：取本品約1.5g，精密稱定，置燒杯中，加氫氧化鈉滴定液(0.5mol/L)50.0ml，混合，緩緩煮沸10min 加酚酞指示液，用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定，并將滴定結果

15、用空白試驗校正。每lml的氫氧化鈉滴定液(0.5mol/L)相當于45.04mg的C9H8O4 。,,討論：（1）為何做空白試驗？如何操作？,氫氧化鈉在加熱時易吸收CO2，生成碳酸鹽。使測定結果偏高。不加入樣品，其余操作步驟和加樣一致。,（2）滴定度如何計算？,,阿司匹林：氫氧化鈉=1:2,T=0.5×180.16×1/2=45.04(mg/ml),F：硫酸滴定液的校正因子,×,4. 兩步滴定法－－Ch

16、P2005 阿司匹林片和腸溶片,原理: 阿司匹林片中加入少量穩(wěn)定劑（酒石酸或枸櫞酸）, 制劑過程中分解產物（水楊酸、醋酸）均消耗氫氧化鈉。因此，不能采用直接滴定法，采用先“中和”再“水解滴定”的兩步滴定法。,第一步 中和,酒石酸枸櫞酸水楊酸醋酸,,+NaOH →,酒石酸鈉枸櫞酸鈉水楊酸鈉醋酸鈉,,第二步 水解后剩余滴定,反應摩爾比為1∶1,+NaOH,定量過量,,方法,中和:取本品10片

17、，精密稱定，研細，精密稱取片粉適量(約相當于阿司匹林0.3 g)，置錐形瓶中，加入中性乙醇20ml，振搖使溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)至溶液顯粉紅色。此時中和了存在的游離酸，阿司匹林也同時成為鈉鹽。,,,水解和測定: 在中和后的供試品溶液中，精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加熱15min并時時振搖，迅速放冷置室溫，用硫酸滴定液 (0.05mol/L)滴定，結果

18、用空白試驗校正。每 1ml氫氧化鈉滴定液 (0.1mol/L) 相當于18.02 mg的C9H8O4 。,討論: （1）優(yōu)點 消除了酸性雜質的干擾,（2）反應的摩爾比 阿司匹林:氫氧化鈉＝1:1 T=0.1×180.16=18.02mg/ml,（3）含量計算,F：硫酸滴定液的校正因子,5. 非水溶液滴定法,吡羅昔康具有吡啶環(huán)，顯堿性?！竞繙y定】取本品約0.2g，精密稱定，加

19、冰醋酸20ml使溶解，加結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.lmol/L)滴定至溶液顯藍綠色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每l ml 高氯酸滴定液（0 .lmol/ L ) 相當于 33.14 mg的C15H13N3O4S。,二、紫外-可見分光光度法,1. 直接紫外-可見分光光度法,原理:藥物在某一波長處有最大吸收，采用 對照品法或吸收系數(shù)法進行含量測定。,A＝,·,C L,,USP（29）測定阿司匹林膠

20、囊的含量?？蓪⑺酒チ峙c水楊酸和其他中性堿性雜質分離。,2. 柱分配色譜－紫外分光光度法,1.色譜柱的制備：,硅藻土3g和新制碳酸氫鈉液（1→12）2ml的混合填充劑,2.對照溶液：用冰醋酸氯仿溶液（1→100） 供試液：樣品的氯仿溶液[鹽酸-甲醇（1→50 ）],3.樣品上樣、氯仿洗滌,乙酰水楊酸和水楊酸成鈉鹽保留于柱上，不 被氯仿洗脫。氯仿可除去中性或堿性雜質。,乙酰水楊酸游離，被氯仿洗脫。水楊酸酸性