病毒感染的檢查方法與防治原則

1、,醫(yī) 學(xué) 微 生 物 學(xué)(Medical Microbiology),第二篇 病毒學(xué),第二十四章 病毒感染的檢查方法與防治原則,教學(xué)目標(biāo),熟悉：人工主動(dòng)免疫和人工被動(dòng)免疫的常用生物制品。了解：病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。有效抗病毒藥物的抗病毒機(jī)制及應(yīng)用價(jià)值。,思考：,病毒如此之小和活細(xì)胞內(nèi)寄生，我們?nèi)绾畏蛛x培養(yǎng)及檢查？血清學(xué)診斷和分子生物學(xué)檢查的理論基礎(chǔ)是什么？可通過(guò)什么方式預(yù)防病毒的感染？,對(duì)抗病毒有招--巴斯德在18

2、89年發(fā)明了狂犬病疫苗 病毒的面貌清晰地呈現(xiàn)在人們的眼前僅僅百余年的歷史，但明確的病毒致病的記載早在四百多年前就有了。早在1566年，瘋狗咬人致病的案例已經(jīng)被記錄下來(lái)，但直到1885年，人們還不知道狂犬病到底由什么引起。,在細(xì)菌學(xué)說(shuō)占統(tǒng)治地位的年代，巴斯德的試驗(yàn)為狂犬病的防治開(kāi)辟了新的路徑。巴斯德發(fā)現(xiàn)，將狂犬病延髓提取液多次注射兔子后，再將這些毒性已遞減的液體注射狗，狗就能抵抗狂犬病毒的侵染。 1885年的一天，人們把一個(gè)被瘋

3、狗咬過(guò)的9歲男孩邁斯特爾送來(lái)求救，巴斯德給這個(gè)孩子注射了毒性減到很低的提取液，然后再逐漸用毒性較強(qiáng)的提取液注射。巴斯德的方法拯救了男孩的生命。,第一節(jié) 病毒感染的檢查,檢測(cè)內(nèi)容,查病毒,查特異性抗體,病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶,電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng),,,,一、標(biāo)本的采集與送檢,原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意： 1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢

4、 3.血清學(xué)診斷采雙份血清,二、病毒的分離與鑒定,（一）病毒分離培養(yǎng)方法類型 細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture） 雞胚接種（egg inoculation） 動(dòng)物接種（animal inoculation）,標(biāo)本,無(wú)菌處理,細(xì)胞培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)動(dòng)物接種,,指標(biāo)陽(yáng)性指標(biāo)陰性,,病毒鑒定,盲傳2～3代,,,,,指標(biāo)陰性,,病毒陰性,一般程序,1.動(dòng)物接種 最原始 應(yīng)用：尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng) 動(dòng)物：兔、

5、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型 缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛伏病毒,2.雞胚接種 孵化9～14天的雞胚,3.細(xì)胞培養(yǎng) 在一定條件下用離體的活組織或活細(xì)胞培養(yǎng)病毒的方法,證實(shí)病毒存在的方法：① CPE② 紅細(xì)胞吸附及凝集③ 干擾現(xiàn)象④ pH值改變,細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落 如腺病毒等多數(shù)病毒,腮腺炎病毒感染細(xì)胞,紅細(xì)胞吸附（hemadsorptio

6、n）,HA＋紅細(xì)胞表面HA受體→細(xì)胞吸附,病毒胞膜表面血凝素(HA) ＋相應(yīng)抗體＋紅細(xì)胞→吸附抑制,紅細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn),干擾現(xiàn)象（interference）,風(fēng)疹病毒＋人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE(－),?？刹《荆伺吣I細(xì)胞 病毒增殖，CPE(＋),,,＋人胚腎細(xì)胞,風(fēng)疹病毒埃可病毒,,CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+) ?？刹《?-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-) ?？刹《?+),（二）病毒

7、的鑒定,1.形態(tài)學(xué)鑒定 電子顯微鏡2.病毒的血清學(xué)鑒定 鑒定病毒種、型、亞型 血凝抑制試驗(yàn)、免疫標(biāo)記3.病毒分子生物學(xué)鑒定,三、病毒感染的診斷（一）病毒形態(tài)學(xué)鑒定,電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見(jiàn)大病毒（痘類病毒）或包涵體，對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大,（二）免疫學(xué)檢查法檢查病毒抗原 ELISA血凝抑制試驗(yàn)、中和試驗(yàn)檢查病毒特異性IgM 風(fēng)疹病毒、甲型肝炎病毒等（三）檢查病毒核酸核酸雜

8、交技術(shù)PCR技術(shù),第二節(jié) 病毒感染的防治原則,,一、人工主動(dòng)免疫常用生物制品,滅活疫苗、活疫苗；基因工程疫苗；亞單位疫苗；核酸疫苗,二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品,免疫血清血清丙種球蛋白細(xì)胞因子等,三、病毒感染的治療,干擾素和干擾素誘生劑中草藥 基因治療劑 治療性疫苗,,,抗病毒化學(xué)制劑,反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）,核苷類藥物 碘苷 阿昔洛韋非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 蛋白