病毒感染的檢查方法與防治原則

1、,醫(yī) 學 微 生 物 學(Medical Microbiology),第二篇 病毒學,第二十四章 病毒感染的檢查方法與防治原則,教學目標,熟悉：人工主動免疫和人工被動免疫的常用生物制品。了解：病毒感染的實驗室診斷方法。有效抗病毒藥物的抗病毒機制及應用價值。,思考：,病毒如此之小和活細胞內寄生，我們如何分離培養(yǎng)及檢查？血清學診斷和分子生物學檢查的理論基礎是什么？可通過什么方式預防病毒的感染？,對抗病毒有招--巴斯德在18

2、89年發(fā)明了狂犬病疫苗 病毒的面貌清晰地呈現在人們的眼前僅僅百余年的歷史，但明確的病毒致病的記載早在四百多年前就有了。早在1566年，瘋狗咬人致病的案例已經被記錄下來，但直到1885年，人們還不知道狂犬病到底由什么引起。,在細菌學說占統(tǒng)治地位的年代，巴斯德的試驗為狂犬病的防治開辟了新的路徑。巴斯德發(fā)現，將狂犬病延髓提取液多次注射兔子后，再將這些毒性已遞減的液體注射狗，狗就能抵抗狂犬病毒的侵染。 1885年的一天，人們把一個被瘋

3、狗咬過的9歲男孩邁斯特爾送來求救，巴斯德給這個孩子注射了毒性減到很低的提取液，然后再逐漸用毒性較強的提取液注射。巴斯德的方法拯救了男孩的生命。,第一節(jié) 病毒感染的檢查,檢測內容,查病毒,查特異性抗體,病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類：如逆轉錄酶,電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng),,,,一、標本的采集與送檢,原則基本與細菌相似，但應注意： 1.標本用“雙抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢

4、 3.血清學診斷采雙份血清,二、病毒的分離與鑒定,（一）病毒分離培養(yǎng)方法類型 細胞培養(yǎng)（cell culture） 雞胚接種（egg inoculation） 動物接種（animal inoculation）,標本,無菌處理,細胞培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)動物接種,,指標陽性指標陰性,,病毒鑒定,盲傳2～3代,,,,,指標陰性,,病毒陰性,一般程序,1.動物接種 最原始 應用：尚無敏感細胞的病毒培養(yǎng) 動物：兔、

5、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點：結果易觀察，可建立動物模型 缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內常帶有潛伏病毒,2.雞胚接種 孵化9～14天的雞胚,3.細胞培養(yǎng) 在一定條件下用離體的活組織或活細胞培養(yǎng)病毒的方法,證實病毒存在的方法：① CPE② 紅細胞吸附及凝集③ 干擾現象④ pH值改變,細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落 如腺病毒等多數病毒,腮腺炎病毒感染細胞,紅細胞吸附（hemadsorptio

6、n）,HA＋紅細胞表面HA受體→細胞吸附,病毒胞膜表面血凝素(HA) ＋相應抗體＋紅細胞→吸附抑制,紅細胞吸附抑制試驗,干擾現象（interference）,風疹病毒＋人胚腎細胞 病毒增殖，CPE(－),?？刹《荆伺吣I細胞 病毒增殖，CPE(＋),,,＋人胚腎細胞,風疹病毒?？刹《?,CPE(-)—風疹病毒(+) ?？刹《?-)CPE(+)—風疹病毒(-) 埃可病毒(+),（二）病毒

7、的鑒定,1.形態(tài)學鑒定 電子顯微鏡2.病毒的血清學鑒定 鑒定病毒種、型、亞型 血凝抑制試驗、免疫標記3.病毒分子生物學鑒定,三、病毒感染的診斷（一）病毒形態(tài)學鑒定,電子顯微鏡：設備、操作復雜，應用受限光學顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒）或包涵體，對一般病毒檢測意義不大,（二）免疫學檢查法檢查病毒抗原 ELISA血凝抑制試驗、中和試驗檢查病毒特異性IgM 風疹病毒、甲型肝炎病毒等（三）檢查病毒核酸核酸雜

8、交技術PCR技術,第二節(jié) 病毒感染的防治原則,,一、人工主動免疫常用生物制品,滅活疫苗、活疫苗；基因工程疫苗；亞單位疫苗；核酸疫苗,二、人工被動免疫常用生物制品,免疫血清血清丙種球蛋白細胞因子等,三、病毒感染的治療,干擾素和干擾素誘生劑中草藥 基因治療劑 治療性疫苗,,,抗病毒化學制劑,反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）,核苷類藥物 碘苷 阿昔洛韋非核苷類反轉錄酶抑制劑 蛋白