血細胞分析儀原理一

1、第三章 血液分析儀檢驗,重點 : 血液分析儀測定的原理、方法,血液分析儀功能：①全血細胞計數(shù)功能。 ②白細胞分類功能。③擴展功能。,血液分析儀優(yōu)勢檢測項目多速度快精度高易操作,§2 檢測原理,檢測原理,,,電學,光學,,電阻抗法,,射頻電導法,激光散射法,分光光度法,,血細胞計數(shù)原理,懸浮在電解質溶液中的血細胞相對于電解質溶液為非導電顆粒，其電阻比溶液大。利用兩者導電性能的差異，當體積大小不同的血細胞通過計數(shù)小

2、孔時，可引起小孔內，外電流或內電壓的變化，形成與血細胞數(shù)量相當，體積大小相應的脈沖電壓，從而間接區(qū)分血細胞群，并分別計數(shù)即電阻抗原理（庫爾特原理）,一、電阻抗法,血細胞計數(shù)原理即庫爾特原理（Coulter principle):根據血細胞非傳導的性質，以電解質溶液中懸浮的血細胞在通過計數(shù)小孔時引起的電阻變化進行檢測為基礎，進行血細胞計數(shù)和體積測定。,小孔管是電阻抗法細胞計數(shù)的一個重要組成部分。檢測期間，當電流接通后，位于小孔兩側的電極產

3、生穩(wěn)定的電流。如果供給的阻抗也是穩(wěn)定的，則小孔的電壓是不變的。,當有一個細胞通過小孔時，由于電阻增加，于瞬間引起電壓變化——通過脈沖。細胞體積越大，脈沖振幅越高；細胞數(shù)量越多，脈沖數(shù)量也越多。,脈沖信號經過下列步驟，得出細胞計數(shù)結果：放大 由于血細胞通過微孔時產生的脈沖信號微弱，必須通過放大器將訊號放大。2. 閾值調節(jié) 在一定范圍內調節(jié)參考電平的大小，使計數(shù)結果盡可能符合實際。,3. 甄別 利用甄別器根據閾值調節(jié)器提供的參考

4、電平，將低于參考電平的假訊號（細胞碎片，雜質微粒）去掉。4. 整形 通過整形器作用，將脈沖訊號波形修整成一致標準的平頂波，才能觸發(fā)電路,5 計數(shù) 血細胞的脈沖信號 放大 甄別 整形后，送入計數(shù)系統(tǒng)，得出計數(shù)結果。 電阻抗法可準確測量出細胞（或類似顆粒）的大小，是三分群血液分析儀的主要應用原理，并與光學檢測原理組合應用于五分類血液分析儀中。,,,,,,,三分群血液分析儀基本組成,① 信號

5、發(fā)生器各種微粒通過檢測小孔產生電阻抗脈沖信號的檢測源。②放大器將血細胞微弱脈沖信號放大以觸發(fā)電路系統(tǒng)。③閾值調節(jié)器調節(jié)能區(qū)分不同群細胞合適的信號電平。,④甄別器去除非參考電平的各種假信號以提高計數(shù)的準確性。⑤整形器將不一致的脈沖波形信號調整為標準的波形后觸發(fā)計數(shù)電路系統(tǒng)。⑥計數(shù)系統(tǒng) 將整形后的血細胞脈沖信號顯示為不同類群的細胞數(shù)。,二、激光散射法,激光散射法應用了流式細胞術(flow cytometry, FCM) 檢

6、測原理。流式細胞術檢測原理：細胞通過激光束被照射時，產生與細胞特征相應的各種角度的散射光。對經信號檢測器接收的散射光信息進行綜合分析，即可準確區(qū)分正常類型的細胞。,,,,半導體激光的流式細胞術,側向熒光（RNA/DNA含量）,激光（波長633nm）,側向散射（細胞內部結構，如核的大?。?,前向散射光 （細胞大?。?低角度散射光（前向散射光）：反映細胞的數(shù)量和表面體積大小。高角度散射光（側向散射光）：反映細胞的內部顆粒、細胞核

7、等復雜性。,激光散射法在區(qū)別體積相同而類型不同的細胞特征時，比電阻抗法分群更加準確。故激光散射法已成為現(xiàn)代五分類血液分析儀的主要檢測原理之一。,流式細胞儀的技術特點,流式細胞儀在設計上采用了許多獨特的技術，比如液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、信號測量和細胞分選方面都有自己的技術特點。著重講述液流系統(tǒng)——鞘流原理。,,,通常把標本流的流速控制在10m/s以內，就能保持標本流處于穩(wěn)流狀態(tài)。外面包被有高速流動的鞘液，實現(xiàn)標本與鞘液穩(wěn)定的同軸流動狀態(tài)。

8、同時利用液流聚焦原理，使標本流直徑變小，通常只有10～20μm，避免細胞多個重疊進入檢測區(qū)。,激光散射法系統(tǒng)基本組成,1、光源氣體（氦－氖）激光或固體（半導體）激光（單色光）；鎢光源（多色光）。2、鞘流維持顆粒于液流中央，順序、單個、恒速向前流動，即流體動力學聚焦。,3、細胞懸液被檢測細胞（顆粒）的懸液，由氣壓導入流動池。4、光檢測器接受來自各種角度的散射光或吸收光信號，并轉換成相應特征的電信號,三、射頻電導法,射頻（r

9、adio frequency, RF) 指射頻電流，是每秒變化大于10 000次的高頻交流電磁波。高頻電流能通過細胞壁。 用高頻電磁探針滲入細胞膜脂質可測定細胞的導電性，提供細胞內部化學成分、細胞核和細胞質、顆粒成分等特征信息。,,,四、分光光度法,Lambert-Beer定律：A=lg(I0 / I)A:吸光度，或稱光密度；I0：單色入射光強度； I ：透過光強度分光光度法儀器的組成：單色光源、檢測池和比色容器、光檢測器。,分

10、光光度法是所有類型的血細胞分析儀檢測Hb 的原理：被稀釋的血液加入溶血劑后，紅細胞溶解，釋放血紅蛋白，后者與溶血劑結合形成Hb衍生物，在特定波長（530～550nm）下比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成比例。,,血紅蛋白,,血紅蛋白衍生物,,吸光度,,Hb濃度,溶血劑,,,λ＝540nm,,,,,血紅蛋白測定的溶血劑,溶血劑,,,含氰化物的溶血劑,不含氰化物的溶血劑,分群,經溶血素處理脫水后，血細胞體積大小發(fā)生了變化！?。〉谝蝗海?/p>