實驗蛙骨骼肌及心肌收縮lliu

1、刺激強度、頻率與骨骼肌收縮的關系,心肌收縮記錄與心肌特性郵箱：animalpe@163.com密碼：123456,實驗二,實驗目的實驗原理實驗材料實驗內容注意事項,基本內容,實驗目的,1.坐骨神經腓腸肌標本的制備2.觀察刺激強度與肌肉收縮反應的關系。掌握閾刺激，閾下刺激，閾上刺激，最大刺激的概念。3.觀察用不同頻率的最大刺激刺激坐骨神經對腓腸肌收縮形式的影響，了解和掌握單收縮、復合收縮、強直收縮特征和形成的基本原理。4

2、.觀察心肌收縮的特點并與骨骼肌比較。,實驗原理,1. 閾下刺激 閾強度 閾上刺激 最大刺激,2. 單收縮 不完全強直收縮-描記曲線為鋸齒形 完全強直收縮。,3.心肌-具有較長的不應期 期前收縮 代償間歇,蟾蜍、蛙板、手術剪、敷料鑷、刺針、絲線、玻璃分針、燒杯、鋅銅弓、任氏液、滴管、RM6240信號采集系統(tǒng)、刺激電極。,實驗材料,一．坐骨神經腓腸肌標本制備（第21頁）,①破壞中樞神經系統(tǒng)：將探針自枕骨

3、大孔(枕骨大孔定位：以脊柱正中線為縱線，兩側眼后毒腺的連線為橫線，兩線交匯的凹陷處即為枕骨大孔)插入，先左右橫斷脊髓，再向前攪毀腦，然后再將探針撤回，反向插入脊椎管破壞脊髓。檢查蟾蜍四肢全身肌肉完全松馳。,實驗內容,②剪斷脊柱：用粗剪刀自胸部剪斷脊柱。 ③剪除前肢及內臟④去皮膚,一．坐骨神經腓腸肌標本制備,⑤分離左右下肢：用粗剪刀沿脊柱中線把標本分為左右兩半。注意勿損傷神經。 ⑥分離坐骨神經：大腿背面股二頭肌和半膜肌的夾縫中分離出

4、坐骨神經。 ⑦分離肌肉：分離腓腸肌的跟腱，用線結緊，自跟腱的附著點剪斷。提起跟腱將腓腸肌剝離出來，并將小腿其余部分剪掉，保留一小段(約1.5cm)股骨，,一．坐骨神經腓腸肌標本制備,一．坐骨神經腓腸肌標本制備,二.刺激強度對肌肉收縮的影響,1.標本與儀器的連接①股骨斷端固定于肌槽的插孔中，神經干搭在刺激電極上，腓腸肌肌腱上的線與換能器相連，換能器與RM6240相連。 ②點擊“實驗”菜單，選擇“刺激強度對骨骼肌收縮的影響”，儀器參數

5、：通道模式為張力，采樣頻率400Hz-1kHz，掃描速度1s/div，靈敏度10-30g，時間常數：直流，濾波頻率100Hz。,,1.標本與儀器的連接,2.觀察項目：,①刺激方式單刺激，刺激幅度0.1-3V可調，刺激波寬0.1ms。②記錄閾刺激和最大刺激值。③測量每一刺激強度所對應的肌肉收縮張力；測量最大刺激時肌肉的收縮期和舒張期時間。,三.刺激頻率對肌肉收縮的影響,1.點擊“實驗”菜單，選擇“刺激頻率對骨骼肌收縮的影響”，儀器參數

6、：通道模式為張力，采樣頻率400Hz-1kHz，掃描速度1s/div，靈敏度10-30g，時間常數：直流，濾波頻率100Hz。2.系統(tǒng)采用頻率遞增，刺激幅度：最大刺激強度，波寬0.1ms，采用自動頻率方式，起始頻率1Hz，結束頻率30Hz，步長1Hz，串間隔大于5s。刺激頻率按1Hz，2Hz，3Hz，4Hz，5Hz…30Hz逐漸增加，連續(xù)記錄不同頻率時的肌肉收縮曲線。3.觀察測量各刺激頻率所對應的肌肉收縮最大張力。,四.蛙心收縮記錄

7、及心肌特性（39頁）,1.破壞蟾蜍腦和脊髓，暴露心臟，打開心包膜。 用帶有絲線的蛙心夾夾住心尖，將絲線連在張力換能器上，再將換能器固定于鐵架臺上，調整絲線高度，并將絲線拉緊。將刺激電極安放在心室外壁，使之既不影響心搏又能同心室接觸良好。2.張力換能器接RM6240系統(tǒng)第一通道（也可選擇其它通道），刺激電極與RM6240刺激輸出相連，作刺激標記。,3. 點擊“實驗”菜單，選擇“期前收縮-代償間歇”，系統(tǒng)進入實驗信號記錄狀態(tài)。儀器參數

8、：第一通道，時間常數：直流。濾波頻率：10Hz，靈敏度3g，采樣頻率400Hz，掃描速度1s/div，單刺激模式，閾上刺激強度2-5V，刺激波寬5ms。,四.蛙心收縮記錄及心肌特性,儀器連接,在制備標本時，避免過度牽拉神經，避免用手或金屬器械觸碰神經干。避免動物皮膚分泌物（蟾酥、血液等）污染神經和肌肉；不要用水沖洗，以免影響組織機能。制備標本時，要隨時用任氏液潤濕神經和肌肉，防止干燥。分離神經時，要把周圍結締組織剝離干凈。實驗要

9、迅速，以免時間過長影響標本活性,◆ 注意事項,◆ 注意事項,肌肉與換能器的連接松緊適當。給予刺激時，在按刺激器手動開關的同時，按下記錄儀的“標記”，記錄刺激標記，用于計算肌肉收縮的潛伏期。每改變一次刺激頻率后，應休息0.5-1 min, 每次刺激不要超過3-4 秒，以免標本疲勞。實驗過程中應常用任氏液潤濕標本，以免影響神經和肌肉活性。,NaCl 6.5 g KCl 0.14 g CaCl2