科研項(xiàng)目標(biāo)書寫作講座副本

1、腫瘤免疫治療新技術(shù)研究中心,,一. NSFC資助的項(xiàng)目二.面上項(xiàng)目三.申請注意事項(xiàng)四.申請書的寫作要求五.申請書的撰寫六.申請書各部分之間的關(guān)系七.基金申報(bào)相關(guān)規(guī)定及要求,報(bào)告提綱,第一部分 NSFC資助的項(xiàng)目,,研究項(xiàng)目板塊,人才資助體系,面上項(xiàng)目,重點(diǎn)項(xiàng)目,重大項(xiàng)目,國際合作與交流項(xiàng)目,,,國家杰出青年科學(xué)基金項(xiàng)目,海外及港澳學(xué)者合作研究基金項(xiàng)目,創(chuàng)新研究群體項(xiàng)目,優(yōu)秀青年科學(xué)基金項(xiàng)目,青年科學(xué)基金,自由申請項(xiàng)目

2、青年科學(xué)基金項(xiàng)目 地區(qū)科學(xué)基金,重大研究計(jì)劃項(xiàng)目,,,,,,,,,,,,國家自然科學(xué)基金,,NSFC資助的項(xiàng)目,面上項(xiàng)目的類型,自由申請項(xiàng)目(A類) ：允許申請人的學(xué)術(shù)思想自由，選題自由；青年科學(xué)基金(C類)：申請人的年齡需在35周歲以下（指申請當(dāng)年1月1日未滿36周歲）；地區(qū)基金(D類)：面向老、邊、少地區(qū)的研究單位。在同等水平的情況下，老、邊、少地區(qū)的項(xiàng)目有可能優(yōu)先送審。,第二部分 面上項(xiàng)目,面上項(xiàng)目,面上項(xiàng)目也

3、叫一般項(xiàng)目，照顧的面比較大是國家自然科學(xué)基金研究項(xiàng)目系列中的主要部分支持從事基礎(chǔ)研究的科學(xué)技術(shù)人員在國家自然科學(xué)基金資助范圍內(nèi)自主選題開展創(chuàng)新性的科學(xué)研究，促進(jìn)各學(xué)科均衡、協(xié)調(diào)和可持續(xù)發(fā)展。面上項(xiàng)目是科學(xué)基金最基本的資助項(xiàng)目類別，其經(jīng)費(fèi)額約占科學(xué)基金總額的60%。面上項(xiàng)目包括自由申請項(xiàng)目、青年科學(xué)基金項(xiàng)目和地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目。,2016年面上項(xiàng)目資助情況,,,面上項(xiàng)目申請人的條件,面上項(xiàng)目的要求,生命科學(xué)部,生命科學(xué)一處：微生物

4、學(xué)、植物學(xué)生命科學(xué)二處：生態(tài)學(xué)、林學(xué)生命科學(xué)三處：生物物理和生物化學(xué)與分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物力學(xué)與組織工程學(xué)生命科學(xué)四處：神經(jīng)學(xué)、生理學(xué)與整合生物學(xué)、心理學(xué)生命科學(xué)五處：遺傳學(xué)與生物信息學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)與生殖生物學(xué)生命科學(xué)六處：農(nóng)學(xué)基礎(chǔ)與作物學(xué)、食品科學(xué)生命科學(xué)七處：植物保護(hù)學(xué)、園藝學(xué)與植物營養(yǎng)學(xué)生命科學(xué)八處：動(dòng)物學(xué)、畜牧學(xué)與草地科學(xué)、獸醫(yī)學(xué)、水產(chǎn)科學(xué),生命科學(xué)一處：微生物學(xué)科,生命科學(xué)三處：生物物理、生物化學(xué)

5、與分子生物學(xué),生命科學(xué)三處：免疫學(xué),生命科學(xué)三處：生物力學(xué)與組織工程學(xué),生命科學(xué)四處：神經(jīng)學(xué),生命科學(xué)四處：生理學(xué)與整合生物學(xué),生命科學(xué)四處：心理學(xué),生命科學(xué)五處：遺傳學(xué)與生物信息學(xué),生命科學(xué)五處：細(xì)胞生物學(xué),生命科學(xué)五處：發(fā)育生物學(xué)與生殖生物學(xué),生命科學(xué)八處：動(dòng)物學(xué),,生命科學(xué)八處：獸醫(yī)學(xué),醫(yī)學(xué)科學(xué)部（基礎(chǔ)和臨床研究）,醫(yī)學(xué)科學(xué)一處：呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)醫(yī)學(xué)科學(xué)二處：消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、眼科學(xué)、耳鼻咽喉頭頸科學(xué)、

6、口腔顱額面科學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)三處：神經(jīng)系統(tǒng)疾病、精神疾病、老年醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)四處：生殖系統(tǒng)、圍生醫(yī)學(xué)和新生兒、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)五處：影像醫(yī)學(xué)與生物醫(yī)學(xué)工程、特種醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)六處：運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)、急危重癥-創(chuàng)傷-燒傷-整形、康復(fù)醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)病原生物與感染、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)七處：腫瘤學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)八處：皮膚及其附屬器、放射醫(yī)學(xué)、地方病學(xué)、職業(yè)病學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)九處：藥物學(xué)、藥理學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)十處：中醫(yī)學(xué)、中藥學(xué)、中西醫(yī)結(jié)合領(lǐng)域,第三部

7、分 申請注意事項(xiàng),（1）申請者不具備申請資格或違反了自然科學(xué)基金委的有關(guān)規(guī)定（2）申請手續(xù)不完備或申請書不符合要求（3）申請項(xiàng)目主要研究內(nèi)容不屬于申報(bào)學(xué)科的資助范圍（4）申請書紙質(zhì)與電子版內(nèi)容不一致（5）其它,面上項(xiàng)目 (自由、青年、地區(qū)）形式審查不合格原因,A、紙質(zhì)申請書上沒有項(xiàng)目組成員簽名B、紙質(zhì)申請書缺頁C、單位蓋章為非注冊章D、合作單位未蓋章或蓋的不是注冊（法人）章E、中級無博士學(xué)位人員無專家推薦 （初級無

8、博士學(xué)位不得做負(fù)責(zé)人申請）F、在職研究生申報(bào)項(xiàng)目需導(dǎo)師同意函G、項(xiàng)目被查重（已獲得青年基金的再申請青年）H、申請金額過高（平均強(qiáng)度四倍）,較容易犯的錯(cuò)誤有：,生命科學(xué)五處面上項(xiàng)目初篩不合格原因,第四部分 申請書寫作要求,一、申請書中的注意事項(xiàng),基金項(xiàng)目的評審只是評價(jià)一份申請書的質(zhì)量，而不完全是評價(jià)申請項(xiàng)目的實(shí)際水平和學(xué)術(shù)水平。,二、項(xiàng)目的寫作要求,1、表達(dá)能力：告訴評議人您是如何思考問題的2、歸納總結(jié)能力：從新的角度和高度對所

9、研究的問題提出新的觀點(diǎn)3、區(qū)分問題主次的能力4、對研究中所需技術(shù)的掌握能力5、對申請書研究內(nèi)容準(zhǔn)確而又令人信服的安排能力,所有這些方面便反映出申請人的科研能力,三、四個(gè)重要方面的信息,你為什么要做？即研究意義和立論依據(jù) 你想做什么？即研究內(nèi)容、研究目標(biāo) 你如何去做？即研究方案 你以前做過什么（為什么你能做）？即研究基礎(chǔ),四、立項(xiàng)依據(jù)的要求,立項(xiàng)目的要明確，申請理由要充分，立項(xiàng)依據(jù)既不要太科普，又要把關(guān)鍵問題交待清楚，能

10、引起評審人的興趣，愿意繼續(xù)讀完您的申請。初審專家關(guān)注問題關(guān)鍵推斷不成立：例如：本項(xiàng)目立項(xiàng)依據(jù)不充分，且對信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的概念尚不十分清楚，僅分析未磷酸化的信號通路蛋白不能判斷通路運(yùn)行狀態(tài) 關(guān)鍵推斷缺乏依據(jù)：例如：立論依據(jù)中對××誘導(dǎo)××的效應(yīng)與其特異的××現(xiàn)象的關(guān)系未闡述清楚。×× 在××中的作用意義的論據(jù)也欠充分,四、立項(xiàng)依據(jù)

11、寫作（1）,（l）既要介紹國外動(dòng)態(tài)，也要介紹國內(nèi)研究情況，避免評議人會(huì)認(rèn)為申請人對國內(nèi)研究情況不了解，就以“不了解國內(nèi)情況”為由，不同意資助該項(xiàng)目的申請。（2）國內(nèi)情況應(yīng)包括申請者自己的意見、工作，以使評議人比較順暢地了解申請人的思路。,（3）必須闡明申請人要從事本項(xiàng)研究的理由究竟是您在前期工作中發(fā)現(xiàn)什么問題，還是別人的工作中存在什么問題，或者您對哪個(gè)科學(xué)問題有什么特殊想法等等（4）堅(jiān)持“有所為，有所不為”的基本國策，填補(bǔ)空白不是

12、立項(xiàng)依據(jù)科學(xué)基金是要使我國的基礎(chǔ)研究在世界上占有一席之地，而不是跟蹤或填補(bǔ)空白。（5）主要參考文獻(xiàn)，包括國內(nèi)、外的關(guān)鍵性研究工作都要有所顯示，注意時(shí)間性和篇數(shù)。,四、立項(xiàng)依據(jù)寫作（2）,五、研究方案,研究目標(biāo)、內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題研究目標(biāo)不是簡單地去做一件具體的事，而是要研究和解決其中的科學(xué)問題和學(xué)術(shù)性問題。泛泛地講探索什么規(guī)律，而不能很好地論證要了解某個(gè)規(guī)律意義，那就難以得到支持。要從學(xué)術(shù)角度提出可行性分析突出申請人學(xué)術(shù)

13、思路方面的好想法，闡明你的設(shè)計(jì)方案、研究方法、技術(shù)路線能否實(shí)現(xiàn)預(yù)期的研究目標(biāo)。,研究隊(duì)伍、研究條件和學(xué)術(shù)思想方面的綜合優(yōu)勢,研究內(nèi)容過大或過小： 研究內(nèi)容充實(shí)，設(shè)計(jì)細(xì)致，但主攻重點(diǎn)不突出 該研究計(jì)劃過于龐大研究內(nèi)容不屬于資助范圍： 申請側(cè)重于技術(shù)和應(yīng)用研究，科學(xué)意義不明確。研究內(nèi)容安全性有疑問： 在上海這樣人口高度密集的地區(qū)進(jìn)行飼養(yǎng)繁殖（該類昆蟲），本身就有很大風(fēng)險(xiǎn)。,

14、研究內(nèi)容,但本課題將研究內(nèi)容、研究目標(biāo)及擬解決的關(guān)鍵問題混淆項(xiàng)目執(zhí)行期內(nèi)無法完成任務(wù)： 但是，ⅹⅹ質(zhì)量的正向演變和ⅹⅹ響應(yīng)是一個(gè)十分緩慢的過程研究內(nèi)容無法實(shí)現(xiàn)研究目標(biāo)： 通過標(biāo)書的閱讀，難以判斷通過本研究能達(dá)到"作用機(jī)制的研究"；題目與研究目標(biāo)、擬解決關(guān)鍵問題不完全一致,研究方案部分表述不清：,關(guān)注實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性： 但實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)欠合理，很難實(shí)現(xiàn)預(yù)期目標(biāo)，試驗(yàn)的重現(xiàn)性難以保證取材可能性太?。?

15、 從自愿患者取10ml骨髓，很困難對所用方法了解不夠： 也說明申請人沒有芯片研究的經(jīng)歷，沒有理解和掌握該技術(shù)。本項(xiàng)目科學(xué)性不強(qiáng),初審專家關(guān)注的問題－－研究方法與技術(shù)路線,六、本項(xiàng)目的創(chuàng)新之處,(1) 創(chuàng)新之處：指申請人要開展的研究項(xiàng)目的特色和新穎的學(xué)術(shù)思想，而不是泛指的一個(gè)新領(lǐng)域的特色；研究條件的特色并不能完全表明申請人的研究特色和學(xué)術(shù)思想新穎性。學(xué)術(shù)思想可以有一點(diǎn)新穎性，或者可以把其它領(lǐng)域的好思想借鑒到你的研究課題里

16、。創(chuàng)新性不明顯約占異議比例的50%,(2) 不要泛泛地談學(xué)科交叉基金委鼓勵(lì)學(xué)科交叉，但不等于說，申請項(xiàng)目屬多學(xué)科交叉，就算有特色、有創(chuàng)新，就該給予資助。“學(xué)科交叉必須對相關(guān)學(xué)科的發(fā)展都有促進(jìn)作用” 如果你的申請項(xiàng)目屬于學(xué)科交叉項(xiàng)目，必須闡明交叉點(diǎn)在哪兒？(3) 填補(bǔ)國內(nèi)外空白不是創(chuàng)新和特色目前，基礎(chǔ)研究可以有所為的，首先應(yīng)該關(guān)注的是國家國民經(jīng)濟(jì)急需領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和國內(nèi)已經(jīng)有一定研究基礎(chǔ)，有可能在世界上占領(lǐng)一席之地的研究領(lǐng)域的

17、基礎(chǔ)研究兩方面。,專利,正確理解專利的地位專利是不是成果？當(dāng)然，你的基礎(chǔ)研究成果推廣應(yīng)用了，申請若干項(xiàng)專利，基金委還是承認(rèn)你的，但不能把專利作為基金的主要成果。專利只是一種知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)方法，難以判斷基金項(xiàng)目的研究水平，可以作為結(jié)題時(shí)的輔助成果，申請時(shí)不必過分強(qiáng)調(diào)。,創(chuàng)新性部分-初審專家關(guān)注的問題：,無明顯的創(chuàng)新性，評議人認(rèn)為"填補(bǔ)國內(nèi)空白"不能作為創(chuàng)新。 本項(xiàng)目的創(chuàng)新性不強(qiáng)，僅為動(dòng)物模型的一些指標(biāo)

18、的觀察，評議人認(rèn)為難以達(dá)到研究目的。 國內(nèi)外對于×××方面已經(jīng)有比較多的報(bào)道 第二個(gè)問題已被×××研究組解答（評審人均為專家） 該研究的創(chuàng)新性僅在于在此材料中尚無此方面的研究。,七、研究基礎(chǔ),（1）與本項(xiàng)目有關(guān)的工作積累和成績應(yīng)該是申請人以及合作者的，而不是你所在的單位、研究集體或者導(dǎo)師的工作和成績。對于剛畢業(yè)的研究生，作為基

19、金委和評審專家不會(huì)強(qiáng)求他們在新的研究領(lǐng)域有很多積累，但必須詳盡地介紹他們自己過去的工作，讓評審專家能夠判斷他們的研究能力。,研究基礎(chǔ),（3）申請人和主要成員的研究背景情況都要介紹不少申請中只介紹申請者的情況，不符合申請書的要求。申請人和主要成員的背景情況介紹要具體，必須符合申請書的要求，有關(guān)論著應(yīng)注明作者位置、論文題目、發(fā)表的刊物以及發(fā)表時(shí)間，獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)應(yīng)注明獲獎(jiǎng)人的名次等等。有一半人沒有按項(xiàng)目指南要求填寫。原因可能有兩種，不是

20、沒有讀過項(xiàng)目指南，就是沒有相應(yīng)的業(yè)績來填寫。,從推論做推論： 第一步工作就可能達(dá)不到預(yù)期目標(biāo)，使后續(xù)的實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。建議不予資助。在關(guān)鍵步驟或方法中無工作經(jīng)驗(yàn)： 特別是申請者及課題組成員均沒有細(xì)胞誘導(dǎo)分化研究的工作基礎(chǔ)未準(zhǔn)備好解決關(guān)鍵問題的方法： 對整個(gè)項(xiàng)目的限速步驟，并沒有令人信服的研究設(shè)計(jì)和檢測指標(biāo)，使得整個(gè)項(xiàng)目看起來可行性不夠,初審專家關(guān)注的問題－－研究基礎(chǔ),八、申請者承擔(dān)國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目情況,

21、其中進(jìn)展或完成情況一欄，應(yīng)填寫詳細(xì)一些不要簡單地填寫“已完成”、“順利進(jìn)行”。最好能注明獲得什么獎(jiǎng)勵(lì)，發(fā)表多少論文，引用情況如何，培養(yǎng)了幾名研究生等等。讓評議人能一目了然。前一結(jié)題項(xiàng)目完成情況；三篇主要論文首頁必須反映是基金資助項(xiàng)目，否則，應(yīng)附上能反映基金資助的那一頁，如：致謝或英文刊物中的Acknowledgment。,,用途,,項(xiàng)目類型,,比例,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,面上,,<=15%,,,,,,,,,

22、,,,,,,,重大、重點(diǎn),,<=10%,,,,,,,,,,,,,,國際合作與,交流費(fèi),,外國專家來訪和,項(xiàng)目組成員出訪,,杰出青年,,<=,20,%,,,,,,,,,,,,,,面上,,<= 15%（不封頂）,,,,,,,,,,,,,,,,重大、重點(diǎn),,<= 10%,,,,,,,,,,,,,,勞務(wù)費(fèi),,參加項(xiàng)目的研究,生、博士后,,杰出青年,,<=,20,%,,,,,,,,,,,,,,面上,,,,,,,,,,

23、,,,,,,重大、重點(diǎn),,,,,,,,,,,,,管理費(fèi),,依托單位為組織和支,持項(xiàng)目而支出的費(fèi)用,,杰出青年,,5%,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,九、經(jīng)費(fèi)預(yù)算,間接費(fèi)用,自2015年起，各類項(xiàng)目申請經(jīng)費(fèi)分為直接費(fèi)用和間接費(fèi)用兩部分。直接費(fèi)用包括設(shè)備費(fèi)、材料費(fèi)、測試化驗(yàn)加工費(fèi)、燃料動(dòng)力費(fèi)、差旅費(fèi)、會(huì)議費(fèi)、國際合作與交流費(fèi)、出版/文獻(xiàn)/信息傳播/知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)費(fèi)、勞務(wù)費(fèi)、專家咨詢費(fèi)、其他支出。間接費(fèi)用是指依托單位在組

24、織實(shí)施項(xiàng)目過程中發(fā)生的無法在直接費(fèi)用中列支的相關(guān)費(fèi)用，主要包括依托單位為項(xiàng)目研究提供的現(xiàn)有儀器設(shè)備及房屋，水、電、氣、暖消耗，有關(guān)管理費(fèi)用的補(bǔ)助支出，以及績效（ 按照直接費(fèi)用扣除設(shè)備購置費(fèi)后的5%核定 ）支出等。間接費(fèi)用計(jì)算：項(xiàng)目直接費(fèi)用扣除設(shè)備購置費(fèi)后，金額在500 萬元及以下部分為20%，金額為500萬元以上至1000 萬元的部分為13%，金額超過1000 萬元的部分為10%。,十、結(jié)語,申請書是寫給別人看的，不僅要你自己認(rèn)為清

25、楚、滿意，而且要讓小同行、大同行、基金管理人員和有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)都能認(rèn)可?！巴庑锌戳擞信d趣，內(nèi)行看了有水平”。,申請書是否滿足以下要求,1、立論依據(jù)是否充分，提出的問題是否屬該研究領(lǐng)域的重要問題；2、研究目的是否明確，研究內(nèi)容是否合適，二者間是否一致；3、有關(guān)的文獻(xiàn)資料是否已經(jīng)全面掌握，是否真正明白其中的問題，是否熟悉該領(lǐng)域的研究進(jìn)展，您提出的問題是否屬于還未解決的問題，是否能為本研究領(lǐng)域增加新的內(nèi)容和新的結(jié)論；4、前期的工作是否能說明

26、你熟悉項(xiàng)目中所采用的研究方法，是否能使評議人相信你勝任此項(xiàng)目的工作；5、研究方案是否可行，是否創(chuàng)新，是否清晰，是否能說服評議人，是否組織合理；6、研究方法是否合適，是否創(chuàng)新，是否可能遇到困難，有何補(bǔ)救措施，方法有何優(yōu)點(diǎn)和不足；7、經(jīng)費(fèi)預(yù)算是否合理。,A、標(biāo)書書寫不規(guī)范 標(biāo)書撰寫不太認(rèn)真，存在關(guān)鍵字錯(cuò)誤，如摘要中的“斑快”（斑塊）,水稻（小麥） 文中有多處錯(cuò)字，說明申請人在書寫和校對時(shí)缺乏嚴(yán)肅認(rèn)真的態(tài)度 此外

27、，項(xiàng)目申請書的科技寫作不夠規(guī)范，如立項(xiàng)依據(jù)部分文中的文獻(xiàn)引用沒有標(biāo)注、文中有的文獻(xiàn)引用在參考文獻(xiàn)目錄中沒有等問題,其他問題（1）,B、論文造假 申請者自我介紹中的論文11(p26)應(yīng)為會(huì)議摘要，并有頁碼錯(cuò)誤。 p2論文2,3應(yīng)為會(huì)議摘要而不是論文C、項(xiàng)目組成員工作時(shí)間問題（不初篩） 主要成員已有2－3項(xiàng)國家自然科學(xué)重點(diǎn)、杰出、面上或973、863項(xiàng)目在研D、同室操戈 本申報(bào)材料與其所在科室另一申報(bào)書內(nèi)

28、容雷同，工作人員重復(fù)，本課題組與之相比,沒有良好的研究基礎(chǔ),其他問題（2）,其他問題（3）-報(bào)送學(xué)科,報(bào)送學(xué)科要準(zhǔn)確，但別把學(xué)科代碼當(dāng)指南代碼1表示投送學(xué)科，代碼2表示相關(guān)學(xué)科，準(zhǔn)確填寫相關(guān)學(xué)科代碼，將會(huì)便于學(xué)科尋找合適的同行評議專家。如果投送學(xué)科完全錯(cuò)了，就相當(dāng)于考大學(xué)時(shí)報(bào)錯(cuò)了志愿，白白申請了。盡管NSFC的指南還不十分理想，但它終究反映了學(xué)科的資助動(dòng)向，有一定的導(dǎo)向作用。申請內(nèi)容涉及多個(gè)學(xué)科，就要比較各相關(guān)學(xué)科的項(xiàng)目指南，

29、看一看研究重點(diǎn)與哪個(gè)學(xué)科更接近？,第五部分 申請書的撰寫,一、摘 要（限400字）包括：研究方法、內(nèi)容、目標(biāo)、科學(xué)意義。,如：采用……方法，進(jìn)行……研究， 闡明……機(jī)制或揭示……規(guī)律， 為……奠定基礎(chǔ)／提供……思路。,作用：畫龍點(diǎn)睛效果：引發(fā)評議專家的興趣，使其產(chǎn)生探個(gè)究竟的好奇心 ——“他到底是怎么做的 ？ ”,采用改良的消減雜交技術(shù)建

30、立老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞差異表達(dá)基因文庫并制備基因芯片，利用此芯片篩選出白內(nèi)障相關(guān)基因。通過基因轉(zhuǎn)染在體和培養(yǎng)的晶狀體上皮細(xì)胞，觀察細(xì)胞的形態(tài)、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶狀體蛋白的變化，研究基因的功能。從晶狀體上皮細(xì)胞的角度闡明老年性白內(nèi)障發(fā)生的分子生物學(xué)機(jī)制，為防治白內(nèi)障提供新思路和理論依據(jù)。,摘要舉例,對基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國際科學(xué)發(fā)展趨勢， 論述科學(xué)意義 對應(yīng)用基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合學(xué)科前沿，圍

31、 繞國民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中的重要科技問題 論述應(yīng)用前景,,,二、立論依據(jù),在立論依據(jù)的闡述中，對研究領(lǐng)域、研究方向、 具體科學(xué)問題的理解 研究領(lǐng)域：白內(nèi)障的研究，包括發(fā)病機(jī)制、預(yù)防、診斷、 治療措施等研究 研究方向：白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制的研究，包括環(huán)境因素、致病

32、 靶點(diǎn)、細(xì)胞水平、分子水平研究等 科學(xué)問題：白內(nèi)障發(fā)病過程中的相關(guān)基因研究，包括致病 基因篩選、功能研究、調(diào)控機(jī)制、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等,,,,,在研究領(lǐng)域?qū)用?從研究方向展開,圍繞某一具體科學(xué)問題（本項(xiàng)目研究目標(biāo)）進(jìn)行歸納分析,提出研究設(shè)想,從研究領(lǐng)域切入,,,,,,,研究意義,國內(nèi)外現(xiàn)狀分析,1、項(xiàng)目的研究意義 存在問題：對科學(xué)意義的闡述不足或

33、夸大 撰寫方法： 從領(lǐng)域入手，提出主要問題，引出熱點(diǎn)研究方向。 圍繞熱點(diǎn)研究方向進(jìn)行簡要分析，找出目前尚未解決的具體科學(xué)問題，以此為切入點(diǎn)提出假設(shè)，闡述如果解決了該問題（研究目標(biāo)），對該領(lǐng)域甚至相關(guān)領(lǐng)域的科學(xué)貢獻(xiàn)（理論意義或應(yīng)用前景）。,,,老年性白內(nèi)障是與年齡相關(guān)的疾病，隨著年齡的增 加，其發(fā)病比率也不斷升高。特別是人類趨向老齡化， 白內(nèi)障的患病人數(shù)還將持續(xù)增加。目

34、前，它已是人類 第一位的致盲疾病。迄今為止, 治療白內(nèi)障唯一有效的 方法是通過手術(shù)摘除混濁的晶狀體并植入人工晶狀體。 雖然手術(shù)后患者可以恢復(fù)良好的視力，但是不可避免的 術(shù)后并發(fā)癥以及手術(shù)設(shè)備、材料耗資巨大，治療白內(nèi)障 所花費(fèi)的資金已成為世界各國包括富裕的發(fā)達(dá)國家嚴(yán)重 的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。最近的調(diào)查表明，如果把老年性白內(nèi)障的 發(fā)病時(shí)間延緩10年，白內(nèi)障手術(shù)的數(shù)量就會(huì)減少45%[1]。 所以，一些學(xué)者

35、認(rèn)為通過預(yù)防白內(nèi)障發(fā)生或延緩其發(fā)展 的途徑征服白內(nèi)障已成為一項(xiàng)全球性的社會(huì)和社會(huì)經(jīng)濟(jì) 問題[2]。,但是目前我們對老年性白內(nèi)障發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識還不十分清楚。多年以來許多學(xué)者的研究結(jié)果證實(shí)晶狀體上皮細(xì)胞在老年性白內(nèi)障發(fā)生中起重要的作用，但對其中進(jìn)一步的基因調(diào)控知之甚少。如果從參與老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞變化的相關(guān)基因入手，研究基因的生物學(xué)功能，有可能抓住引起白內(nèi)障發(fā)生、發(fā)展的主要環(huán)節(jié)。據(jù)此，本研究擬利用改良的消減雜交技術(shù)和基因

36、芯片技術(shù)準(zhǔn)確、全面、快速的特點(diǎn)，以晶狀體上皮細(xì)胞為研究對象，一次性篩選出老年性白內(nèi)障全部有差異表達(dá)的基因，從中再篩選出與白內(nèi)障相關(guān)基因，并著重對其功能進(jìn)行研究，從基因水平闡明白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制，為防治白內(nèi)障提供新思路和理論依據(jù)。,2、國內(nèi)外現(xiàn)狀分析（與綜述的區(qū)別） 存在問題： A、低水平重復(fù)：不了解最新進(jìn)展，對國內(nèi)外現(xiàn) 狀缺乏真正了解，提出的問題別人已解決。 B、文獻(xiàn)復(fù)習(xí)不全：

37、檢索文獻(xiàn)方法不當(dāng)、選擇關(guān)鍵詞 不妥，甚至人為縮小檢索范圍。 C、總結(jié)表達(dá)不夠：對國內(nèi)外現(xiàn)狀缺乏歸納分析， 只是簡單羅列，缺乏邏輯性和針對性。 D 、對方法原理理解不夠：對研究方法不熟悉，簡 單移植或夸大其作用，缺乏實(shí)際應(yīng)用的可行性。,,撰寫方法：要緊緊圍繞本次申請項(xiàng)目的主題。 A、從領(lǐng)域切入，簡要論述國內(nèi)外研究成果，并引

38、 出當(dāng)前的熱點(diǎn)研究方向。 B、從研究方向展開，較詳細(xì)地分析國內(nèi)外的研究 進(jìn)展，闡明在該方向上存在的問題。 C、圍繞存在的問題，結(jié)合國內(nèi)外以往的研究結(jié)果、 當(dāng)前的現(xiàn)狀及今后的發(fā)展趨勢，詳細(xì)論述和分 析這些問題產(chǎn)生的原因，提出該方面的空白點(diǎn)、 未知數(shù)、以及研究的難點(diǎn)、焦點(diǎn)，從而為自己 申請項(xiàng)目確立研究目標(biāo)奠定充分的立論基礎(chǔ)。,,D、對

39、擬采用的技術(shù)方法進(jìn)行介紹和分析。 成熟的方法重點(diǎn)介紹可以應(yīng)用于本研究的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 新方法在詳細(xì)介紹其原理的基礎(chǔ)上，闡明可以應(yīng)用于本研究的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 需特別注意的問題：必須對所運(yùn)用的技術(shù)方法的原理、流程尤其是在實(shí)際運(yùn)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚，絕不能是一種簡單的移植。E、提出本項(xiàng)目的研究設(shè)想。,,,,,防治白內(nèi)障必須針對其發(fā)病的主要環(huán)節(jié)。多年以來，國內(nèi)外學(xué)

40、者從不同的角度探討白內(nèi)障的發(fā)生機(jī)理。就致病的環(huán)境因素講，氧化因子、紫外線輻射、晶狀體周圍環(huán)境中離子濃度改變及一些生長因子、細(xì)胞因子的改變均與老年性白內(nèi)障的發(fā)生有關(guān)。就研究的部位分，晶狀體中皮質(zhì)與核的蛋白質(zhì)改變及晶狀體纖維的改變與白內(nèi)障的形成有關(guān)，而位于晶狀體前囊膜下單層的晶狀體上皮細(xì)胞在白內(nèi)障的形成中的變化更引人關(guān)注。,因?yàn)榫铙w上皮細(xì)胞是晶狀體中唯一有分裂活性、數(shù)量相對穩(wěn)定的細(xì)胞，它們分裂、分化出晶狀體纖維細(xì)胞、產(chǎn)生晶體蛋白，終生不停

41、息，形成了晶狀體均一、對稱的結(jié)構(gòu)，對維持晶狀體的透明起重要作用。不僅如此，晶狀體上皮細(xì)胞還是晶狀體中受外來刺激影響較早的部位，已有研究證實(shí)老年性白內(nèi)障的晶狀體上皮細(xì)胞還發(fā)生退行性變、細(xì)胞膜通透性增加、細(xì)胞內(nèi)酶活性改變、細(xì)胞數(shù)量減少、凋亡細(xì)胞增多等改變，與單純老化的晶狀體之間存在差異[3-5] 。,體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)多種因素(H2O2、UV-B、晶狀體蛋白的自身抗體)誘發(fā)的白內(nèi)障模型中晶狀體上皮的損傷是晶狀體混濁的主要環(huán)節(jié)[6-8]。因此，從

42、晶狀體上皮細(xì)胞的變化入手探討白內(nèi)障的成因，有可能抓住揭示白內(nèi)障發(fā)病機(jī)理的主要環(huán)節(jié)。而晶狀體上皮細(xì)胞變化的基因調(diào)控機(jī)制是問題的關(guān)鍵所在，也是有待我們深入研究的問題。,白內(nèi)障的形成與晶狀體的老化密不可分，是晶狀體老化的極端表現(xiàn)。晶狀體的老化是多種因素相互作用的結(jié)果，包括基因的和非基因的隨機(jī)變化的不斷積累，也有程序性的、非隨機(jī)性的組織特異性多種基因表達(dá)的改變。目前，國內(nèi)外對白內(nèi)障相關(guān)基因的研究主要以下三方面：,一是對體外培養(yǎng)的晶狀體白內(nèi)障模型

43、及上皮細(xì)胞的研究。UV-B輻射作用誘導(dǎo)的白內(nèi)障中晶狀體上皮細(xì)胞是主要的靶細(xì)胞，其Na-K-ATP酶的活性增加，蛋白質(zhì)的合成和分泌增加；上皮細(xì)胞的凋亡增加，其中有c-fos基因的表達(dá)增加；還有組蛋白H4、H3 的低表達(dá)`和蛋白酶C、β-肌動(dòng)蛋白、γ-肌動(dòng)蛋白基因的高表達(dá)[9-12]。Carper等[13]利用RT-PCR-DD(reverse transcription-polymerase chain reaction differe

44、ntial display)技術(shù)研究H2O2誘導(dǎo)的晶體上皮細(xì)胞的基因差異性表達(dá)結(jié)果顯示NADH脫氫酶4亞基、細(xì)胞色素b、谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)減少以及細(xì)胞因子的核蛋白、替代拼接因子2 （alternative splicing factor）、β-三羥基異丁酰輔酶A水解酶基因表達(dá)的增加。,二是利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究。波形纖維蛋白基因（vimentin）、雜交的Ⅲ型中間纖維蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠表現(xiàn)出白內(nèi)障，而且有隨小鼠年齡增加白內(nèi)障加重的趨

45、勢。晶狀體改變的共同特點(diǎn)是晶狀體纖維細(xì)胞分化受抑制[14,15]。Gong等[16]報(bào)告晶狀體的細(xì)胞膜蛋白連接蛋白α3（α3 Connexin）基因敲除小鼠（knockout mouse）在晶狀體形成的早期及纖維細(xì)胞分化早期不受影響，其后出現(xiàn)與晶狀體蛋白溶解有關(guān)的核性白內(nèi)障。 雖然體外實(shí)驗(yàn)和白內(nèi)障轉(zhuǎn)基因小鼠都提示我們一些基因的變化與白內(nèi)障有關(guān)，但是，這些變化的基因是否與老年性白內(nèi)障形成有關(guān)，目前尚缺乏進(jìn)一步的報(bào)告。

46、,三是對人老年性白內(nèi)障晶體上皮的研究。Lee[17]利用RT-PCR技術(shù)研究顯示前極性白內(nèi)障與核性白內(nèi)障上皮細(xì)胞中纖維連接蛋白、I型膠原纖維、α-平滑肌蛋白、TGF-β1、TGF-β2、TGF-βⅡ型受體、結(jié)締組織生長因子的基因表達(dá)有差異。Kantorow等[18]利用RT-PCR-DD研究老年性白內(nèi)障與正常晶狀體上皮的基因差異性表達(dá)的初步結(jié)果是老年性白內(nèi)障有三個(gè)高表達(dá)基因和12個(gè)低表達(dá)的基因。但就DD-PCR技術(shù)來講，在實(shí)驗(yàn)中難以解決

47、假陰性、假陽性以及克隆全長cDNA的問題。,上述三方面的研究均取得了不同程度的研究結(jié)果，但由于當(dāng)時(shí)技術(shù)條件的限制都未能全面闡明與白內(nèi)障相關(guān)的基因及其功能。 尋找白內(nèi)障時(shí)晶狀體上皮細(xì)胞與正常晶狀體上皮細(xì)胞間差異表達(dá)的基因有可能揭示白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)理。,尋找差異表達(dá)基因的經(jīng)典方法是消減雜交技術(shù)（subtractive hybridization, SH），它是……，但是實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜。 經(jīng)過改進(jìn)后的抑制性

48、消減雜交（suppression subtractive hybridization ,SSH是Diatchenko等1996年建立的方法）……簡化了實(shí)驗(yàn)操作，但仍然問題很多。 我校生化教研室建立了改良消減雜交技術(shù)[19，20]，其特點(diǎn)是：簡便易行，能夠獲得目的細(xì)胞特異表達(dá)的全長基因，對低豐度基因也能有效分離。,該方法的建立者已利用這一技術(shù)從脂多糖刺激前后的人牙髓細(xì)胞的差異表達(dá)的基因中克隆到脂多糖刺激后特異表達(dá)的基因

49、，其中5個(gè)為新基因。同理，利用此方法也能快速、有效地獲得白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞與正常晶狀體上皮細(xì)胞間差異表達(dá)的基因，并克隆到全長cDNA，為進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)和功能研究打下基礎(chǔ)。,基因芯片技術(shù)的出現(xiàn)，使檢測差異表達(dá)基因和未知DNA分子變得更快捷、準(zhǔn)確、高效?；蛐酒窃?996年被提出并開始研制的，該技術(shù)是將成千上萬的DNA探針集中到1厘米見方的基片上，利用堿基互補(bǔ)原理，DNA探針中的已知堿基序列與被測定的未知DNA分子雜交后由標(biāo)記分子標(biāo)記雜交

50、體，經(jīng)自動(dòng)閱讀設(shè)備分析雜交結(jié)果，從而對檢測基因進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析，確定未知DNA分子。,由于目前尚沒有針對白內(nèi)障研究的現(xiàn)成基因芯片，根據(jù)本研究的需要，我們將篩選到的差異表達(dá)的所有基因建立cDNA文庫，再利用基因芯片技術(shù)制備成基因芯片，以此檢測多個(gè)樣本中白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞與正常晶狀體上皮細(xì)胞間差異表達(dá)的基因，從中進(jìn)一步篩選出白內(nèi)障特異的基因，它們中可能有已知基因，也可能有未知基因。通過以上兩種技術(shù)的有機(jī)結(jié)合，我們能更快捷、有效、準(zhǔn)

51、確地得到白內(nèi)障相關(guān)基因。,綜上所述，分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展為研究白內(nèi)障發(fā)生過程中的功能基因及特異調(diào)控基因提供了有利武器。本項(xiàng)目從晶狀體上皮細(xì)胞入手，利用改良的消減雜交技術(shù)和基因芯片技術(shù)系統(tǒng)研究與白內(nèi)障相關(guān)的基因，并采用對體外培養(yǎng)細(xì)胞和在體晶狀體上皮細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染，探討它們在晶狀體上皮細(xì)胞變化和白內(nèi)障形成中的作用，可望闡明白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞變化的分子生物學(xué)機(jī)制，為防治白內(nèi)障提供新的思路和理論依據(jù)。,3、參考文獻(xiàn) A、文獻(xiàn)類別要全：

52、以英文文獻(xiàn)為主，同時(shí)也要引用 中文文獻(xiàn)--- 國內(nèi)同行中知名專家的文獻(xiàn)。 B、引文信息要全：文章題目、作者姓名、具體出處 （包括期刊名、年份、卷期、頁碼等）。 C、文獻(xiàn)年代要新：主要是近五年的文獻(xiàn)，最好能有 2017年的最新文獻(xiàn)。,三、研究方案,1、研究目標(biāo) 撰寫要求： 有限目標(biāo)，與研究內(nèi)容相呼應(yīng),如：明確……關(guān)系，揭示……規(guī)律，

53、 闡明……原理（機(jī)制），建立……方法等,,舉例：篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確部分基因在白內(nèi)障形成中的作用，從晶狀體上皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機(jī)理，為防治白內(nèi)障提供線索。,2、研究內(nèi)容： 存在問題：內(nèi)容過多，一個(gè)研究周期難以完成 內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo) 撰寫要求：內(nèi)容要適當(dāng)—確保研究周期內(nèi)完成 為目標(biāo)

54、服務(wù)—與目標(biāo)相輔相成 要重點(diǎn)闡述—注意與技術(shù)路線區(qū)別,,,舉例： （1）篩選白內(nèi)障相關(guān)基因：采用改良的消減雜交技術(shù)，獲得人老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞和正常晶狀體上皮細(xì)胞差異表達(dá)的基因片段，建立cDNA文庫。制備差異表達(dá)基因的基因芯片，利用基因芯片技術(shù)從多個(gè)標(biāo)本的老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中篩選出白內(nèi)障相關(guān)基因。,（2）研究白內(nèi)障相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)：…… （3）研究白內(nèi)

55、障相關(guān)基因在晶狀體上皮細(xì)胞變化中的作用：…… 觀察指標(biāo)如下： ①存活細(xì)胞數(shù)；②光鏡、透射電鏡下細(xì)胞形態(tài)的變化；③細(xì)胞凋亡檢測：用原位末端標(biāo)記和連接酶介導(dǎo)PCR方法，從形態(tài)和DNA水平分析細(xì)胞凋亡；④細(xì)胞增殖的檢測：……；⑤細(xì)胞骨架蛋白的檢測：……；⑥晶狀體蛋白的檢測：,3、擬解決的關(guān)鍵問題： 存在問題：抓不住關(guān)鍵問題或抓得不準(zhǔn)。 什么是關(guān)鍵問題 ？

56、 --研究過程中對達(dá)預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究 內(nèi)容或因素。 --為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。 撰寫要求：找出關(guān)鍵問題，提出解決辦法。,,,,舉例： （1）建立差異表達(dá)的cDNA文庫： 建立差異cDNA文庫是篩選老年性白內(nèi)障相關(guān)基因的前提。為使差異cDNA文庫具有代表性，我們采取以下解決方案：

57、 ①選擇各種類型老年性白內(nèi)障晶狀體的前囊膜、取足夠大量的標(biāo)本（擬取50例標(biāo)本）作為建庫的mRNA的來源。 ②利用改良的消減雜交技術(shù)可快速、有效地獲得差異表達(dá)的完整cDNA片段。此技術(shù)是本課題組成員主要的研究成果，在應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)中已積累了較豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。,（2）制備基因芯片： 制備用于本研究的芯片是篩選老年性白內(nèi)障相關(guān)基因的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。制備基因芯片的關(guān)鍵是在 1平方厘米的基片上放上成百上千的不同基

58、因探針而不使它們發(fā)生任何混淆。在制作基因芯片時(shí)做到：①嚴(yán)格按操作程序進(jìn)行；②在標(biāo)本的處理及RNA提取時(shí)避免污染，否則即會(huì)造成嚴(yán)重的損失。只要嚴(yán)格按操作程序進(jìn)行操作就可以避免發(fā)生差錯(cuò)。,（3）在體基因轉(zhuǎn)染： 在體基因轉(zhuǎn)染是進(jìn)行白內(nèi)障相關(guān)基因功能研究的關(guān)鍵。在體的晶狀體上皮細(xì)胞大部分處在靜息狀態(tài)，只有位于赤道前區(qū)的少量細(xì)胞具有分裂活性，而且晶狀體表面有一層膠原性質(zhì)的囊膜包裹。在體晶狀體的基因轉(zhuǎn)染的關(guān)鍵是如何使大量分裂后細(xì)胞轉(zhuǎn)

59、染，如何使病毒穿過晶狀體的囊膜，針對以上問題我們擬采取下列方法解決：①選用反轉(zhuǎn)錄病毒的慢病毒載體（ lentiviral vector ），它克服了一般反轉(zhuǎn)錄病毒只能轉(zhuǎn)染有分裂能力細(xì)胞的局限性，對分裂后細(xì)胞也能有效的轉(zhuǎn)染。這對在體晶狀體的基因轉(zhuǎn)染有很大的優(yōu)越性。②采用直徑1-2μm玻璃微管在顯微鏡下將病毒載體注入晶狀體的前囊膜下，既不破壞晶狀體的完整性，又可使病毒接觸到囊膜下的上皮細(xì)胞。,4、研究方法 存在問題：

60、 過于簡單：在方案中只有方法名稱而無具體步驟。 過于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法。 撰寫要求：以研究項(xiàng)目的需求為前提，盡量采用最適合的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。,,,5、技術(shù)路線 存在問題： 不清楚，不詳細(xì)，不可行。 撰寫要求： 清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。 撰寫方法： —以時(shí)間順序?yàn)橹骶€設(shè)計(jì)技術(shù)路線 —

61、以研究內(nèi)容為主線設(shè)計(jì)技術(shù)路線 —分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。 —詳細(xì)地寫清楚每個(gè)具體步驟。,,,,（1）人晶狀體上皮細(xì)胞的獲得：老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞取自白內(nèi)障患者手術(shù)中取出的前囊膜（晶狀體上皮細(xì)胞緊貼于前囊膜），直徑約5mm。正常晶狀體上皮細(xì)胞取自角膜移植供體眼的晶狀體，在顯微鏡下撕下前囊膜，直徑約8mm。按文獻(xiàn)提供的方法去除晶狀體纖維細(xì)胞，仔細(xì)清洗以去除血細(xì)胞污染。 （2）建立差異cDNA文庫：從50例白內(nèi)障

62、手術(shù)患者的前囊膜上取下的晶狀體上皮細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組，從25例正常晶狀體前囊膜上取下的晶狀體上皮細(xì)胞作為對照組，利用改良的消減雜交技術(shù)[19，20]，獲得差異表達(dá)的cDNA，并建立文庫。主要的實(shí)驗(yàn)流程如下：,正常晶狀體上皮細(xì)胞 白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞 Promega PolyATtract® System 1000 mRNA分離 m

63、RNA分離oligo-dT18反轉(zhuǎn)錄 ntech Cap-finder方法反轉(zhuǎn)錄 cDNA Biotin-21-dUTP pending-cDNA 隨機(jī)引物PCR

64、 雜交 Sephacryl S-400柱,,,,,,,,,,,,除鹽及小片段 鏈親和素-生物素磁性分離 除去雜交體及過量正常晶狀體上皮細(xì)胞cDNA “長距離”PCR

65、 目的cDNA的特異擴(kuò)增 克隆、鑒定、轉(zhuǎn)化 建立差異基因文庫,,,,,（3）制備基因芯片篩選白內(nèi)障相關(guān)基因： ① 基因芯片的制備： ……… ②白內(nèi)障相關(guān)基因的篩選：…… （4）白內(nèi)障相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)分析： ① 序列測定：... ... ② 序列的計(jì)算機(jī)

66、分析： ... ... ③ 獲得全長基因： ... ... （5）基因轉(zhuǎn)染： ① 培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染：…… ② 在體晶狀體的轉(zhuǎn)染：……,6、可行性分析 對實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的分析 理論分析 研究手段方法分析 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 對相關(guān)條件的分析 所用特殊實(shí)驗(yàn)材料（試劑）的分

67、析 對所具備的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行分析 對項(xiàng)目組成員搭配及其運(yùn)用技術(shù)方法的能力分析,,,(1)關(guān)于建立差異cDNA文庫： 老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞與正常晶狀體上皮細(xì)胞是處在不同狀態(tài)下的細(xì)胞，細(xì)胞基因表達(dá)的改變 是細(xì)胞蛋白功能等改變的基礎(chǔ)。尋找這些有差異的基 因是探索細(xì)胞功能、狀態(tài)變化原因的突破口。利用的 消減雜交技術(shù)是篩選差異表達(dá)基因的有效方法。改良 的消減雜交技術(shù)

68、是我們研究組成員建立的方法，應(yīng)用 此方法已經(jīng)從脂多糖刺激前后的人牙髓細(xì)胞的差異表 達(dá)的基因中克隆到脂多糖刺激后特異表達(dá)的基因，其 中 5個(gè)為新基因，這一研究成果進(jìn)一步證實(shí)了該方法 的可操作性，而且我們在運(yùn)用此方法過程中也積累了 較豐富的經(jīng)驗(yàn)，因此，本研究利用這一方法從兩種狀 態(tài)的晶狀體上皮細(xì)胞中篩選差異表達(dá)的基因并建立 cDNA文庫是可行的。,7、創(chuàng)新性 存在問題： 對創(chuàng)新點(diǎn)提煉不夠

69、 把運(yùn)用新技術(shù)、新方法理解為創(chuàng)新 與研究目標(biāo)、研究內(nèi)容相混淆 對創(chuàng)新的理解： 原始創(chuàng)新：填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論 發(fā)明創(chuàng)造新技術(shù)、新方法 跟蹤創(chuàng)新：補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論 修改、完善現(xiàn)有技術(shù)方法（1＋1＞2） 提煉方法：用逆向思維方法提