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1、細胞信號通路檢測(一)總蛋白提取,病理生理學教研室,背景知識,背景知識,蛋白質(zhì)表達水平和細胞內(nèi)定位研究,信號蛋白分子表達水平及分子量檢測Western Blot analysis信號蛋白分子在細胞內(nèi)定位研究IMMUNOHISTOCHEMISTRY/IMMUNOCYTOCHEMISRYIMMUNOFLUORESCENCE (IF)GREEN FLUORESCENT PROTEIN (GFP, LIVE CELLS),實驗方法
2、、流程,細胞培養(yǎng)細胞總蛋白提取(本次實驗內(nèi)容)WB 檢測信號通路相關(guān)蛋白表達,實驗材料,HepG2肝癌細胞,細胞培養(yǎng)皿,細胞刮,RIPA裂解液,PBS,低溫離心機,冰盒,EP管,移液器,操作步驟,棄去細胞培養(yǎng)基,4℃預冷的PBS清洗細胞1次留適量PBS(一般為1ml,大皿可酌情增加)刮取細胞,12000rpm 4℃離心2min,去除上清液。向細胞沉淀中加入適量RIPA蛋白裂解液(含有蛋白酶抑制劑)輕吹充分混勻,放置冰上裂解30m
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