畢業(yè)論文李龍鳳何鵬劉剛

1、12011屆本科畢業(yè)生畢業(yè)論文題目題目：732732型陽離子交換樹脂提取溶菌酶方法初探型陽離子交換樹脂提取溶菌酶方法初探作者姓名：何鵬李龍鳳劉剛指導(dǎo)教師：劉秀麗（講師）學(xué)科專業(yè)：生物技術(shù)院系:生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院提交日期：2011060231引言在環(huán)境污染日趨嚴(yán)重，大力倡導(dǎo)綠色食品的今天，溶菌酶作為一種天然蛋白，能在胃腸道內(nèi)作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被消化吸收，且對(duì)人體無害是一種安全性很高的食品保鮮劑、營(yíng)養(yǎng)保健品、藥品，因?yàn)樗梢运饧?xì)菌細(xì)胞壁的β1，

2、4糖苷鍵，從而破壞肽聚糖支架而得名[1]。溶菌酶作為一種堿性球蛋白，其化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定，PH在1.211.3范圍內(nèi)劇烈變化時(shí)，其結(jié)構(gòu)幾乎無改變。耐熱性極高，100OC處理1min任然保持原酶活性。溶菌酶對(duì)變性劑相對(duì)不敏感，但吡啶、十二烷基磺酸鈉對(duì)酶有抑制作用，氧化劑能使酶鈍化。溶菌酶在醫(yī)藥上用途非常廣泛，它可與血液中的病毒結(jié)合防治流感有利于膿汁痰液的排出，能清除壞死組織，增強(qiáng)抗生素的藥效，臨床上還應(yīng)用于五官科多種粘膜疾病。此外，日本還用

3、固定化溶菌酶技術(shù)處理廢水取得了很好效果[2]。正因?yàn)槿芫溉找婢咝碌墓δ埽藗儗?duì)它的研究也經(jīng)久不衰。關(guān)于溶菌酶的分離和純化方法主要有結(jié)晶法離子交換法和色譜法等。親和色譜法分離溶菌酶也是一種有效手段[3]，由于其分離具有較高的選擇性，可以從蛋清中分離溶菌酶，但由于親和柱造價(jià)高，制作困難等缺點(diǎn)使其應(yīng)用受到限制。離子交換法是制備高純度溶菌酶最常用的方法[4]。由于該方法無需加熱，溶菌酶不易變性失活，制備得到活性較高的溶菌酶。此外，離子交換法還

4、具有簡(jiǎn)便，高效，成本低，可以自動(dòng)化連續(xù)操作等優(yōu)點(diǎn)，提純后的蛋清不受破壞[5]。離子交換法提純?nèi)芫甘歉鶕?jù)溶菌酶和離子交換樹脂的基團(tuán)之間的離子交換而進(jìn)行的，由于溶菌酶是一種堿性蛋白質(zhì)，故可采用陽離子交換樹脂。目前國(guó)內(nèi)外可采用的離子交換樹脂主要有724型陽離子交換樹脂，大孔離子交換樹脂，CM纖維素等[6]。本實(shí)驗(yàn)主要是利用732型陽離子交換樹脂對(duì)蛋清中的溶菌酶進(jìn)行分離純化。2實(shí)驗(yàn)部分2.1主要儀器及藥品主要儀器：電熱恒溫水浴鍋（HHS112

5、B）離心機(jī)(LXG6401)電子天平核酸蛋白檢測(cè)儀（HD2001BC）自動(dòng)部分收集器（BSZ160）電腦恒流泵（DHLA）層析譜采集分析儀（HDA）Sartoius離心機(jī)電泳儀（DYY2C）電泳槽（Bioradprotean美國(guó)伯樂公司）恒溫振蕩器（SHAB）722分光光度計(jì)直冷式冷凍冷藏冰箱移液管（10mL）、移液槍。主要試劑：雞蛋清732陽離子交換樹脂PBS(pH8.0)考馬斯亮藍(lán)小牛純血清蛋白、枯草芽孢桿菌液、丙烯酰胺、bis、A