家畜繁殖學-第六章-人工授精

1、第六章 人工授精,Chapter 6 Artificial Insemination,本章內容,第一節(jié) 概述 Section 1 Introduction第二節(jié) 采精 Section 2 Semen collection第三節(jié) 精液品質檢查 Section 3 Semen quality examination 第四節(jié) 精液的稀釋 Section 4 Se

2、men extend and extenders第五節(jié) 精液保存 Section 5 Semen storage第六節(jié) 輸精 Section 6 Insemination,第一節(jié) 概 述,一、概念二、意義三、AI發(fā)展概況,一、AI 概念 利用器械采集公畜的精液，經檢查和處理后，再用器械將精液輸入到母畜生殖道的適當部位，使之妊娠，以此來代替公母畜自然交配一種科學配種方法。,,二、人工授精的優(yōu)越性

3、,提高了優(yōu)良種公畜的配種效能和種用價值，降低了飼養(yǎng)管理費用；,加速家畜品種改良，促進育種工作；,防止各種疾病，特別是生殖道傳染病的傳播；,有利于提高母畜的受胎率；,克服地域限制和雜交改良的大小懸殊困難；,優(yōu)越性,為開展胚胎移植、同期發(fā)情等繁殖技術研究提供了有效手段。,,三、人工授精的局限性,通過人工授精可能使不良公畜的影響范圍更大；,必須投入一定資金，進行房舍建設和設備購置；,必須進行人員的技術培訓， 不良的操作會造成更嚴重的問題。,

4、四、AI的發(fā)展簡況,我國人工授精技術發(fā)展史,,,,,1935年,60-70年代,70-80年代初,在江蘇句容馬場試驗成功；,在北方開展馬、綿羊人工授精，推動馬、細毛羊品種育種；,60年代開展牛人工授精，70年代冷凍精液；,豬人工授精，尤江蘇好，并建立良種推廣站。,50年代,第二節(jié) 采 精,一、采精前的準備 Preparations二、采精方法 Collecting methods三、采精頻率

5、 Frequency of semen collection,第三節(jié) 精液品質檢查,檢查的目的檢查精液品質的優(yōu)劣，判定種公畜的配種能力 檢查公畜的繁殖問題 確定精液可稀釋的倍數(shù) 檢查精液的處理方法是否正確采精時精液是否受到污染和采精技術好壞程度的工作。,內容： 外觀檢查 顯微鏡檢查（精子活率、密度、形態(tài)） 微生物檢查 精子代謝能力檢查

6、 其他檢查（受胎效果）,一、精液外觀性狀檢查法（一）精液量(ml) 奶牛：5-10；肉牛：4-8； 綿羊：0.8-1.2 ； 豬：150-300；山羊：0.5-1.5；馬：30-100,（二）顏色與氣味 一般為乳白色或灰白色。氣味略有腥味。,(三)云霧狀 濃份精液因精子密度大、活力強，使精液翻騰呈現(xiàn)旋渦云霧狀。（四）pH值 牛、羊精液pH值為6.5-6.9, 豬、馬為

7、7.4-7.5。一般同種精液pH值較低的品質較好。（五）雜質 如被毛、脫落上皮、炎性分泌物、灰塵、纖絲。,二、精子活率檢查精子活率：在顯微鏡下觀察，在一個視野內向直線前進運動的精子占全部精子總數(shù)的百分率。?一般在37-38°C溫度下進行評定，牛、羊精液尚需用生理鹽水作稀釋后才能評定。 ?活力一般用0-1.0的10級評分，一般新鮮采精液活率應該為0.7~0.8左右。,三、精子密度的檢

8、查精子密度：是指單位體積（ml）精液內所含有的精子數(shù)。,(一）目測法：在低倍顯微鏡下根據(jù)精子之間的距離來定，分為密、中和稀三等。,（二）血細胞計數(shù)法： 精子數(shù)量/ml=5×5×10×1000×稀釋倍數(shù),,（三）光電比色法：是根據(jù)精子的透光性而測定精子數(shù)的方法。透光性越高，則精子數(shù)越少，透光性越差，則精子數(shù)越多。現(xiàn)在甚至可與計算機聯(lián)接，立即知道被測精液的活率和密度。,（四）流式細胞

9、儀,四、精子的形態(tài)檢查1、精子畸形率：頭部、頸部、尾部，觀察200個精子，求出比例。用于輸精的精子畸形率不得超過20%。 頭部：巨大，細小，缺失，雙頭，輪 廓不明顯，皺縮 頸部：臌大，纖細，彎曲，不全，原 生質滴 尾部：屈折，帶原生質滴，雙尾，折 斷，纖細,畸形精子類型圖,雙頭和雙尾精子,頂體與精子受精能力直接有關，牛超過

10、 14%，豬超過4.3%時會直接影響受胎率。,2、精子頂體異常率,精子頂體異常圖,五、精子代謝能力檢查（一）精子生存時間和生存指數(shù) 精子生存時間：指精子在體外一定條件下（稀釋液、稀釋倍數(shù)、保存溫度和方法等）的總生存時間。具體算法：所有間隔時間累加后減去最后兩次間隔時間的一半即為精子的存活時間。精子生存指數(shù)：相鄰兩次檢查的間隔時間與平均活力的積之和。?是精子存活時間與精子活率下降變化的一項綜合指標。?精子生

11、存時間越長，則生存指數(shù)越大，說明精子生活力越強，品質越好。,生存時間：48-8/2=44h,生存指數(shù)： h×平均活率=16.8,（二）美藍褪色試驗 美藍是氧化還原劑，氧化呈藍色，還原呈無色，精子在美藍溶液中，呼吸時氧化脫氫，美藍獲得H+后便使藍色還原為無色。因此，根據(jù)美藍褪色時間可測知精液中存活精子數(shù)量多少，判定精子的活率和密度高低。 （三）精液果糖分解測定 精液果糖分解能

12、力與精子活力密切相關，因此測定一億精子每小時消耗果糖的mg數(shù)來表示 精子的果糖分解能力，甚至反映精子活率和密度的高低。,第四節(jié) 精液的稀釋 Section 4 Semen dilution,一、精液稀釋的目的 Aims of semen dilution二、稀釋液的成分及作用 Composition of extenders (diluents)三、稀釋液的種類和配制 T

13、ypes and make-up of extenders (diluents)四、精液稀釋方法和稀釋倍數(shù) Methods and multiple of semen dilution,一、精液稀釋目的1、精液稀釋定義：往精液中加入適宜于精子體外存活，保持其受精能力的溶液。2、精液稀釋目的（1）擴大精液量—增加可配母畜頭數(shù)；（2）延長存活時間；（3）便于運輸和保存。,,二、精液稀釋液的成分及作用,,,擴

14、大容量用。如生理鹽水、等滲葡萄糖等。,,,提供精子營養(yǎng)、能量。如糖類、卵黃、奶類。,,,有激素類、酶類、維生素類。,營養(yǎng)物質,其它添加劑,稀釋劑,,,,,,,保護劑,保護精子免受外界影響。如甘油、抗菌劑。,三、稀釋液的種類和配置（一）稀釋液的種類 1、現(xiàn)用稀釋液 奶類和等滲糖類為主。 2、常溫保存稀釋液 用于常溫保存精液，pH較低。 3、低溫保存稀釋液 用于低溫保存精液，含有卵黃和

15、奶類等抗冷休克物質。 4、冷凍保存稀釋液 用于冷凍保存精液，含抗凍物質如甘油DMSO 。,,（二）稀釋液的配制方法,用具先清洗、消毒、干燥,先配制基礎液,水浴消毒,準確稱取藥品、量取定量的蒸餾水,冷卻后按比例加入抗生素、卵黃、甘油,溶解過濾,冷 卻,,,,,,,,四、稀釋方法和稀釋倍數(shù),立即稀釋 精液經檢查合格后應立即進行稀釋，越快越好 等溫稀釋 稀釋時，稀釋液的溫度和精液的溫度必須調整一致，以30-35℃為宜；

16、緩慢稀釋 稀釋時，將稀釋液沿精液瓶或玻璃棒緩慢倒入，同時搖動精液瓶稀釋； 分次稀釋 若作高倍稀釋，應先低倍后高倍，分次進行稀釋； 稀釋后立即鏡檢，活力應和稀釋前一樣； 稀釋后精液立即進行分裝（一般按一頭母畜的輸精量）保存。,（一）稀釋方法,（二）稀釋倍數(shù) 確定精液稀釋倍數(shù)應依據(jù)精液的密度、活率及有效精子數(shù)。,家畜精液的稀釋倍數(shù),稀釋倍數(shù)的計算,原精液的有效精子數(shù) 密度×使用前精液活力 稀釋后要達到的有效精

17、子數(shù) 每劑量要求的有效精子數(shù)÷劑量 計算稀釋倍數(shù) 原精液的有效精子數(shù)÷稀釋后要達到的有效精子數(shù) 精液分裝數(shù)的計算 原精液量×稀釋倍數(shù)÷劑量,現(xiàn)行的精液保存方式有三種：常溫保存（15-25 ℃）低溫保存（0-5 ℃）冷凍保存（-79 ℃或-196 ℃）,第五節(jié) 精液的保存Section 5 Semen Storage,,,,,液態(tài)保存,,固態(tài)保存,一、常溫保存（15-

18、25 ℃），變溫保存1、原理：是利用一定范圍的酸性環(huán)境，抑制精子的活動，使精子保持可逆的靜止狀態(tài)而不喪失受精力。2、稀釋液：（1）能量物：如葡萄糖 ；（2）緩沖體系：如檸檬酸鈉、碳酸氫鈉 ；（3）抗生素：如青、鏈霉素等。3、方法：隔水降溫。 天熱時，盡可能降低保存溫度如放入水井、水缸； 天冷時，放在有暖氣的室內。,適合豬精液保存（15～17℃）,二、低溫保存（0-5 ℃）1、原理：利用較低的溫度來減弱精子的活動

19、和代謝，從而延長精子的生命。2、低溫保存稀釋液： 除室溫保存液應具有的成分外（不充CO2），在牛用的稀釋液還需用加卵黃或牛奶。,為何要添加？,3、保存前的處理（1）稀釋分裝：低溫保存的精液通常用玻璃或塑料瓶分裝，瓶內盡量不留空氣，然后封口;（2）降溫處理：通常按0.2℃/min降至保存溫度;（3）保存方法：牛羊精液置于0~5 ℃，豬精液須特殊改造的冰箱或用泡沫盒內放冰塊，精液用一塊泡沫墊在上面；（看后圖）（4）低溫保存精液的利

20、用：低溫保存的精液在使用前應該用水浴升溫至30℃。4、液態(tài)精液的運輸（1）包裝好、做好標記（種類、品種、畜號、時間）；（2）運輸中避光、防震并保持溫度。,三、精液冷凍保存(-79 ℃或-196 ℃) 定義：是利用液態(tài)氮（-196 ℃）或干冰（-79℃） ，作為冷源，將精子和精液冷凍成固體，并在液態(tài)氮或干冰中作超低溫永久保存。 意義： （１）提高優(yōu)良種公畜的配種效能； （２）便于冷凍精

21、液的自動化生產； （３）便于引種；　 （４）加快改良和育種； （５）推進繁殖新技術的應用； （６）建立動物基因庫。,（一）精液冷凍保存原理 目前關于精液冷凍的原理普遍傾向于玻璃化學說。原理：利用超低溫使精液和精子快速冷凍，快速越過形成冰晶的溫度范圍（0~-60 ℃）、精液或精子中的水分不形成冰晶，而是形成玻璃化。 同時在抗凍劑的存在下使精子免受凍傷，在溫度上升至體溫精液解凍

22、后精子能夠保持完整的形態(tài)結構、功能和受精能力。,液態(tài)→固態(tài),結晶態(tài)：緩慢降溫形成。水分子有序形成冰晶對精子有害：機械和滲透壓損傷。玻璃態(tài)：快速降溫形成。水分子無序形成玻璃樣的超微粒結晶，對精子無害。,（0～-60℃ ）（ -15～-25℃）,,（ -60～-250 ℃ ）,,,1、冷凍時細胞的損傷冰晶：在0～-60℃低溫區(qū)，緩慢降溫條件下形成的，降溫越慢，冰晶越大，-15～-25℃對精子危害最大。冰晶的形成對精子造成

23、的機械損傷和滲透壓損傷是引起精子死亡的主要物理因素。玻璃化：在-60～-250 ℃超低溫區(qū)，從冰晶化區(qū)域內開始，就快速降溫，迅速越過冰晶化進入玻璃化階段，此階段對精子無害。2、添加冷凍保護劑（甘油，DMSO等） 作用：增強精子抗凍能力，并對防止冰晶發(fā)生起到重要作用。,（二）精液冷凍保存稀釋液除與精液低溫保存液相同外，尚需用加抗凍劑。 1、牛用：主要有卵黃-檸檬酸鈉-甘油液，卵黃-糖類-甘油液，奶類-甘油液等3種。甘油濃度

24、以5%-7%為宜。 2、豬用：一般采用以葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘油為主要成分的稀釋液，甘油濃度以1%-3%為宜。,（三）冷凍精液的生產程序,一、輸精前的準備 Preparations二、輸精的基本要求 Requirements三、輸精方法 Methods四、影響人工授精受胎率的因素 Factors influencing the fertility by AI,第六節(jié) 輸 精 Section6

25、Insemination,,一、輸精前的準備,,,,輸精器械的準備,1,,精液的準備,2,,母畜的準備,,輸精人員準備,,,,2,3,4,二 、輸精要求,,三、輸精技術,,,,（一）牛的輸精方法,,牛的輸精的注意事項,輸精器插入陰道時，應向前上方，避免插入尿道。當遇到阻力時，切忌用蠻力。 握輸精管的手應靠住母牛陰戶,使母牛騷動時能一起移動,避免折斷輸精管或損傷生殖道. 輸精器插入子宮頸管時，推進力量要適當，以免損傷子宮頸、子宮體粘膜

26、。 如果輸精器后端為膠頭，將精液壓子宮內后，不要松開膠頭，以免精液流回輸精器內。,,牛的輸精的注意事項,輸精器插入陰道時，應向前上方，避免插入尿道。當遇到阻力時，切忌用蠻力。 握輸精管的手應靠住母牛陰戶,使母牛騷動時能一起移動,避免折斷輸精管或損傷生殖道. 輸精器插入子宮頸管時，推進力量要適當，以免損傷子宮頸、子宮體粘膜。 如果輸精器后端為膠頭，將精液壓子宮內后，不要松開膠頭，以免精液流回輸精器內。,,（二）豬的輸精技術,用種公

27、豬試情的 --后備母豬發(fā)現(xiàn)發(fā)情（有壓背反應），24h后作第一次輸精，間隔12h第二次輸精； --經產母豬發(fā)現(xiàn)發(fā)情12h后第一次輸精，12h后第二次輸精。地方品種均推遲6h； 無種公豬試情的 --后備豬壓背反應后6-12h，經產豬立即輸精，地方品種均推遲6h。,,,母豬的適時配種,作好配種準備：母豬后臀部用溫水沖洗干凈，然后用1%新潔而滅溶液消毒一遍。配種所用公豬尿道出口部也要進行消毒，防止陰道炎與子宮炎的

28、發(fā)生。 在檢查到母豬穩(wěn)定發(fā)情（接受壓背測試）后12～18h開始配種，間隔12h再配一次。 后備母豬與經產母豬發(fā)情到排卵的時間有所不同，后備母豬為24～38h，經產母豬36～48h，穩(wěn)定發(fā)情時間長短也不一樣，后備母豬為1～2d，經產母豬為2～3d，因此兩者適時配種時間也有所不同。 另外經母豬斷奶后，早期發(fā)情（斷奶后3～4d）和遲發(fā)情（斷奶后5d以上），其發(fā)情與排卵持續(xù)時間也不同，相應的其最適配種時間也應有所不同。,,母豬的輸精,準備

29、好輸精導管，最好用一次性輸精管； 精液存儲在16-20℃的恒溫箱中； 每天一次進行母豬發(fā)情鑒定，出現(xiàn)靜立發(fā)情的當天進行第一次輸精； 輸精時清洗雙手，清潔母豬陰戶、潤洗輸精導管，將輸精導管向上、向前插入陰道并按逆時針方向旋轉直到鎖定。,,母豬的輸精 （續(xù)）,搖動輸精瓶幾次，充分混合精液，剪掉輸精瓶的頂端慢慢地向輸精瓶加壓； 輸精將要持續(xù)5-10min，精液流出陰戶時，要重新鎖定輸精導管； 輸精后立即用清水和去離子水清洗輸精導管；

30、 記錄公母豬耳號； 間隔12-24h后重復輸精。,豬的輸精方法,潤滑輸精管前端,輸精管先朝上再朝前插入，避開尿道口,分開陰門，插入輸精管前端,逆時針旋轉輸精管以鎖住子宮頸,緩慢輸入精液,,,,,母豬自然交配與輸精,母豬輸精示意圖,母豬發(fā)情檢查,輸精操作—擦拭外陰部,輸精器上涂潤滑劑,輸精操作—分開外陰將輸精器前端向下呈45度角向左旋轉插入母豬陰道內,輸精過程,豬的輸精,,一次輸精多次輸精 ----用同一頭公豬精液； 重復輸精與雙

31、重交配 ----用不同公豬精液。,輸精方式,,輸精注意事項,精液的正確保存； 發(fā)情不等于輸精； 假發(fā)情的鑒定； 發(fā)情不明顯母畜的治療； 季節(jié)與受胎率； 輸精部位與受胎率； 嚴格消毒。,,（三）羊的輸精技術,用試情公羊進行發(fā)情鑒定，對接受爬跨的進行標記； 母羊允許公羊爬跨后的6-12h第一次配種； 母羊保定在保定架內或兩將其倒提，前肢著地； 消毒外陰部，開膣器上涂以石蠟油。,,羊輸精操作,開膣器側扁方向與陰道呈同一方向

32、，插入母羊陰道內，向下轉動開膣器，并保持打開狀態(tài)； 準備好的輸精器前端對準子宮頸外口，伸入1cm或更深。將精液緩慢注入后抽出； 注意：開膣器應保持開張狀態(tài)，以免夾傷陰道粘膜。如果無法找到子宮頸口，應撥動粘液，使子宮頸口暴露。如果仍無法確認，可將精液注入顏色較深的區(qū)域。,www.themegallery.com,,,羊的輸精,（四）家禽的人工授精,家禽精子結構,家禽精子由很長的頭部（長1.25µm），頭的前端有尖形的頂體（1

33、.75µm），有一短的中段（4µm）連接著一個很長的尾部（80µm）。,,家禽精子特性,受精部位在漏斗部。 由于睪丸的環(huán)境溫度及母禽生殖道的特殊構造，精子存活時間比家畜長得多，如公雞精子最長存活35d，火雞達70d。 雞交配后3-5d受精率有所下降，一周內尚可，人工授精后則較長，可以10-14d。 一般種雞放入母雞群后要經10-14d才能獲得較高的受精率。,,按摩采精法,一般由二人操作，保定員保定公雞

34、的腿和翅膀，使公雞尾部朝向采精員，呈自然交配姿勢。 采精員用手從雞翼根沿體軀兩側滑動按摩，引起公雞性欲。 采精員右手中指和無名指之間夾著集精管。 按摩數(shù)次后，立即以左手掌將尾羽撥向背部，同時右手掌緊貼公雞腹部柔軟處，拇指與食指分開，于恥骨下緣抖動觸摩數(shù)次，當泄殖腔外翻露出退化交配器時，左手拇指與食指立刻捏住泄殖腔上緣，輕輕壓擠，公雞立刻射精，右手迅速用集精杯接取精液。 采集到的精液置于水溫20-30℃的保溫瓶內以備輸精,,雞的輸

35、精,輸精時間：每天大部分母禽產完蛋后，雞、火雞下午16時；鵝鴨上午10時進行。 輸精部位：母雞、火雞淺部陰道1-2cm處輸精（或3-4cm），鴨鵝深部陰道4-6cm處輸精，由2-3人操作。 輸精量與次數(shù)：雞每周一次，原精0.025-0.03ml（含精子0.5-1億）；火雞原精0.015-0.023ml（含1-2億），間隔10-12d；鵝、鴨0.8-1億，間隔5-7d。,,雞的輸精方法,輸精方法：助手左手握住雙翅，提起母雞，令雞頭朝上

36、，肛門朝下，右手掌置于母雞恥骨下，在腹部柔軟處施以一定的壓力使泄殖腔開張，輸卵管口翻出。此時母雞如有糞便即排出，然后將母雞泄殖腔朝向輸精員。 母雞輸卵管開口于泄殖腔內左側上方。 輸精員將輸精管插入輸卵管1cm左右處，注入精液后，輸精器向后拉，同時解除對母雞腹部的壓力。,1、精液品質 2、母畜體況和繁殖機能 3、適時輸精 4、技術水平,四、影響人工授精受胎率的因素,,,,,,,采精場地,采精要有固定的場地，以便雄性動

37、物建立起鞏固的條件反射。 采精場地應該寬敞、平坦、安靜、清潔，場內設有采精架以保定臺畜，或設立假臺畜，供公畜爬跨進行采精。 采精場應與精液處理室相連,和公畜舍相近。室內采精場的面積一般為10×10米，并附設噴灑消毒和紫外線照射殺菌設備。,Company Logo,公豬采精室,馬采精橫木架及母馬保定,牛用采精架,,臺 畜 的 準 備,臺畜有真、假臺畜之分 真臺畜 指使用與公畜同種的母畜、閹畜或另一頭種公畜作臺畜。

38、 真臺畜應健康、體壯、大小適中、性情溫順。 選發(fā)情的母畜比較理想，經過訓練的公畜也可作臺畜。 假臺畜 即采精臺，是模仿母畜體型高低大小，選用金屬材料或木料做成的一個具有一定支撐力的支架。 臺畜采精前應清洗、消毒，防止污染精液。,臺 畜 的 準 備,豬用假臺畜,,器械及假陰道的準備,采精所需要的器械要事先準備好，力求清潔、干燥、無菌，在使用之前要嚴格消毒， 每次使用后必須洗刷干凈。,,種公畜的調教和準備,利用假臺畜

39、采精，要事先對種公畜進行調教，使其建立條件反射。調教的方法有如下幾種： 外激素法：在假臺畜上涂抹發(fā)情母畜的陰道粘液或尿液； 誘情法：誘使公畜進行爬跨發(fā)情母畜，但不讓交配而把其拉下，待公畜性沖動達到高峰時，令其爬跨假臺畜采精； 旁觀法：讓其目睹另一頭已調教好的公畜爬跨假臺畜，然后再誘其爬跨。,采精前種公畜的準備,包括體表的清潔消毒和誘情（性準備）兩個方面。 采精前應擦拭公畜下腹部，用0.1%高錳酸鉀溶液等洗凈其包皮外并抹干，

40、用生理鹽水清洗包皮腔內積尿和其他殘留物并抹干。 在采精前，需以不同誘情方法使公畜有充分的性興奮和性欲，一般采取讓公畜在臺畜附近停留片刻，進行2-3次假爬跨。,,人 員 的 準 備,采精員應具有熟練的技術，采精時注意人畜的安全； 應有固定的工作服與鞋，并保持整潔； 采精前應剪短指甲，并戴上一次性手套。,,采精方法,,,,,假陰道法,手握法,按摩法,電剌激法,適用于各種家畜和部分小動物,是當前公豬采精普遍應用的方法,主要用于禽

41、類和犬類,主要用于野生動物的采精,,假陰道法,４０～４５度溫水,固定膠圈,外殼,漏斗,集精瓶,,羊用假陰道,牛用假陰道,牛用假陰道,假陰道的準備,,,無破損漏洞：假陰道不得漏水或漏氣。,無菌：凡接觸精液的部分均須經消毒。,適宜溫度：假陰道內腔溫度38-40℃， 集精杯也應保持34-35℃。,適當壓力：借助注入水和空氣來調節(jié) 假陰道的壓力。,適當潤滑度：假陰道前段1/3-1/2處 到外口周圍涂抹潤滑劑。,應具備 五個條件,Comp

42、any Logo,,注溫水,充氣,不太理想的狀態(tài)（但可以用）,牛羊假陰道安裝充氣后理想的狀態(tài),牛假陰道采精法,公牛假陰道采精,公馬假陰道采精法,手 握 法,適用于豬的采精。 采精員要戴上滅菌膠手套，蹲在假臺畜左側，待公豬爬跨臺畜后，當陰莖從包皮內開始伸出時，立即緊握龜頭，待其抽送片刻后，鎖定公豬的龜頭。 待陰莖充分勃起時，順勢牽引向前，就能導致公豬射精另一只手持帶有一次過濾網的的集精杯收集精子濃厚部分的精液，其它稀薄精液及顆粒狀

43、膠凍分泌物排出時可隨時棄掉。,豬手握法采精,集精杯處理與集精,筒握法采精： 用普通的假陰道，但前端末裝集精瓶，當公豬陰莖插入假陰道后，在假陰道漏斗部握住公豬龜頭采精的方法。,,電刺激采精法 通過電極隔直腸壁選擇一定的頻率通電，刺激輸精管壺腹，使公畜陰莖勃起并射出精液。一般在麻醉狀態(tài)下進行。?這一方法一般用于未經采精訓練或膽小不易控制的動物，如各種野生動物和喪失交配能力但種用價值高的公畜。,

44、電刺激采精裝置,,采精員用手經直腸壁找到公畜的精囊腺和輸精管壺腹部，輕柔按摩?？蛇_到使公畜陰莖部分勃起而射精。?該法適用于牛、犬和家禽。,按摩法采精,公牛精囊腺按摩采精,公牛輸精管壺腹部按摩采精法,,定義：指在一定時間內（通常為次／周）采精 的次數(shù)。公牛：每周2-3/次周 豬、馬：因為射精量大，隔日一次.綿、山羊：配種季節(jié)內，每天可采精多次，并連續(xù)數(shù)周?一般在觀察到精子尾部有未脫落的原生質

45、小滴，說明采精頻率過高，此時應減少或停止采精。,采 精 頻 率,采精頻率是以雄性生產精子的能力來決定。 例如： 每克睪丸組織每天產生2500萬精子 1頭公豬的1對睪丸重 1000克 1次射精量為　　　　 250ml 每ml精子數(shù)為　　　 2億 則2500萬×1000克× 7日＝1750億精子/周 每次射精

46、精子數(shù)為250ml ×２＝500億 每周采精次數(shù)為1750億÷500億＝2.5次?采精頻率過低則經濟上不劃算，過高則阻礙公畜的生長發(fā)育和縮短其使用壽命。,正常成年公畜采精頻率及其精液特征,,,保證精液適宜pH值，利于精子的存活。如檸檬酸鹽、Tris、磷酸氫二鉀,延長精子在體外存活時間。如糖類、氨基乙酸,抗冷物質中卵磷脂和乳脂的雙向親和性對保護精子不受或減弱冷打擊。如卵黃、奶類,抗凍劑有提高

47、精液冰點，少量滲入精子可降低冷凍損傷（減少冰晶形成），從而達到抗凍作用。如甘油、乙二醇,抑制精液中和操作中帶入的微生物的繁殖。如青、鏈霉素,緩沖物質,非電解質和弱電解質,防冷休克物質,抗凍物質,抗菌物質,稀釋液的保護劑,,1、酶類：H2O2酶，分解精子代謝過程中產生的H2O2，消除其危害，利于維持精子活率。β-淀粉酶能促進精子獲能，提高受胎率。 2、激素：OT、PG等，促進母畜生殖道的蠕動。 3、維生素：VB1、VB2、V

48、C，利于精子存活。 4、其他：CO2、乙酸、植物汁等，可降低稀釋液的pH值，有助于精子保存。,,,其他添加劑,顆 粒 凍 精 優(yōu) 點,設備簡單，生產容易，適合小規(guī)模生產 體積小、易污染、不易標記、損耗多 要用解凍液解凍 主要在肉牛、羊中應用,,牛細管精液,細管凍精的優(yōu)點,無污染：保存、輸精時不與外界接觸，安全衛(wèi)生； 便于標記：表面可印上各種標記； 劑量準確： 使用方便：解凍時直接投入水浴中解凍，輸精時剪

49、 去一端后用輸精槍輸精。,,冷凍精液的稀釋,分一次與多次稀釋法。 一次稀釋：牛羊精液 多次稀釋（豬精液） 第一次稀釋：根據(jù)計算的稀釋倍數(shù)用不含抗凍劑的稀釋液在室溫下進行等溫稀釋，再放在500毫升的燒杯中與第二液一起緩慢降溫至5-8 ℃； 第二次稀釋：在5-8 ℃平衡后進行等溫稀釋。,,降溫和平衡（1）降溫：指精液采出稀釋后由30℃溫度經1~2h緩慢降至5 ℃ ，以防低溫打擊。（2）平衡：指加含甘油稀釋液對精子

50、作用的時間。?平衡目的：使精子有一段適應低溫的時間，使甘油充分滲透進入精子體內，達到滲透的活性物質平衡，產生抗凍作用。 ?一般將降溫至5 ℃的精液于這一溫度下平衡1-2h或3-5h。,精 液 平 衡,,細管分裝,低溫分裝：在第二次稀釋后進行分裝標記、平衡，最后冷凍；或在平衡結束后分裝。 優(yōu)點：對精子損傷小，解凍后活力好； 缺點：對設備要求高。 常溫分裝：一次稀釋后即進行分裝標記，然后進行精液降溫與平衡。 優(yōu)點：不需要低

51、溫操作臺； 缺點：對精子損害較大。 細管上要對供精者的種畜站、品種、公畜號、生產日期進行標記；,,精液的冷凍,冷 源 干冰（-79 ℃）、液氮（-196 ℃） 冷凍用品 冷凍面：氟板（聚四氟乙烯）、銅紗網、鋁板； 冷凍槽：程序冷凍儀、液氮槽、廣口保溫瓶； 冷凍方法 干冰埋藏法； 液氮熏蒸法；,顆粒凍的冷凍,銅紗網或氟板浸入液氮預冷； 將預冷后冷凍面固定在離液氮面1-3cm高處進行冷凍； 每個凍精顆粒0.

52、1ml。,收集顆粒精液,,,細管凍精的冷凍,程序冷凍儀冷凍 將平衡后的細管凍精放細管架上，置冷凍儀中降溫冷凍。 沒條件的，可將平衡后的細管用毛巾擦干，放入銅紗網上； 將銅紗網降至距液氮面1-2 cm的高度平衡4-5分鐘后沉入液氮中。,冷凍精液的解凍,顆粒凍精的解凍； 細管凍精的解凍；,,,顆粒凍精的解凍,濕解凍：用于牛羊凍精解凍。 方法：用解凍管裝0.5-1ml解凍液，37-40℃水浴后，放入一顆凍精，待2/3溶解即可取出，檢

53、查合格的用于輸精。 干解凍：用于豬凍精解凍。 方法：用一鋁盒，50-60 ℃水浴，均勻倒入一個劑量凍精，待其大部分溶解后取出鋁盒，加入20-30 ml的解凍液，檢查合格的用于輸精。,,,,,顆粒凍精解凍液,一般采用2.9%的檸檬酸鈉作解凍液。 牛羊顆粒凍精也可用VB12注射液作解凍液。 如解凍后要保存則用檸檬酸鈉0.3%，葡萄糖5.0%，EDTA0.1%配方。 豬的凍精解凍液用常溫保存稀釋液BTS。 如果解凍液中加入2mmo

54、l的咖啡因有利于提高受胎率。,,,細管凍精的解凍,將水溫調整到38-40℃； 將提漏提至罐口下3-5cm處，用鑷子夾住細管的超聲波封口端，迅速移入溫水中水??； 迅速搖動細管，凍精由乳白色變透明后即可取出，用手甩動使之全部溶解。,,檢查（1）顆粒精液解凍后取一小滴檢查活力；（2）細管精液可推出一點檢查活力，如平時都按常規(guī)操作亦可不檢。?我國規(guī)定牛凍精解后的活率在0.4，水牛在0.3以上才能用于AI。 解凍后的精液處理

55、 應盡快用于輸精，不能長時間保存，更不能再次冷凍。,,解凍中要注意的事項,解凍時動作要迅速而準確； 存放凍精的提筒離開液氮面太久，不能提出液氮罐頸口； 夾取凍精的鑷子要先預冷。,,冷凍精液品質要求,活力0.3-0.35以上、頂體完整率40%以上； 每劑量中不得檢出細菌1000個，大腸桿菌3個。 顆粒凍精 形狀一致，不連片，大小均勻，體積0.1ml； 無氣泡（在液氮中不漂?。?； 總有效精子數(shù)1200萬個（牛）

56、； 細管凍精 每劑有效精子數(shù)1000萬個（牛）；,,冷凍精液保存與運輸（1）凍精保存 合格的凍精，包裝妥善并做好標記（站名、家畜品種、種畜號、凍精日期、劑型批號、精子活率、數(shù)量等），置入液氮罐內，保存過程中，溫度恒定，精液品質不變，才能達到長期保存的目的。 （2）凍精運輸 專人負責，用液氮容器盛裝，內充滿液氮，有保護外套，小心輕放。裝在車上要安放平穩(wěn)、拴牢，嚴防撞擊和傾倒。切不可斜放、疊放或壓入其他物品。避免暴曬

57、和強烈震動，如長途運輸，要及時補充液氮。,液氮罐結構,1、內外殼體2、內槽3、夾層4、頸管5、罐蓋塞6、提筒,從液氮罐取凍精,,,輸精器械的準備,用品：與精液接觸的用品，必須經過清洗、消毒滅菌，不能有任何不利于精子存活的化學物質殘留。用前最好用稀釋液或生理鹽水沖洗，確保對精液無毒害作用； 輸精器：最好一頭母畜準備一個輸精槍或槍頭，一次性輸精器只能一畜一支； 開膣器：最好一畜一個，用前在消毒劑中浸過，用涼開水沖過后，放入干燥

58、箱中干燥后，放涼使用（冬季應防止過冷）。,,人工授精器械,1： 處羊開膣器   2：成羊羊開膣器    3：牛開膣器   4：細管專用剪    5：羊用輸精槍 （0.25,0.5ml通用型）6： 羊用輸精器 （鮮精）  7：牛用輸精器

59、60;（鮮精）   8：牛用輸精器（凱蘇槍）    9：牛用輸精器（普通型） 10：牛用輸精槍（0.25,0.5ml通用型）11：牛用輸精槍（卡簧槍）12： 全握式牛用輸精槍（日式槍）13：內窺鏡,,輸精器械,豬的輸精管,牛、羊輸精管,各種當前使用的一次性輸精器,各種牛用輸精器實物外觀圖,,,應正確解凍后輸精，活力0.35以上。,精液的準備,,,,,,冷凍

60、保存,,輸精量及有效精子數(shù),,,母畜的準備,,,,,,,,,,,,,,輸精人員準備,操作人員應指甲剪短，銼光； 輸精人員可戴一次性長臂手套操作，也可洗凈雙手即可； 牛輸精時，手臂要伸入到直腸內，應清洗雙手，戴長臂手套醮少量水或石蠟油或肥皂水，也可不戴手套操作。,,,牛的直腸把握輸精法,母牛進行發(fā)情鑒定； 冷凍精液解凍，裝槍； 母牛保定，左手（或右手）伸入直腸，排出宿糞； 外陰清洗并擦干； 左手下壓陰門，將套管連同外膜插入陰道