elisa技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用進展

1、ELISAELISA技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用進展技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用進展武文君，張映，方禮祿?，張鳳(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山西太谷030801)摘要：酶聯(lián)免疫吸附試驗具有操作簡便、快速準(zhǔn)確、特異性高、敏感性強、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)、分析化學(xué)、食品安全監(jiān)測、環(huán)境污染控制、畜牧業(yè)等領(lǐng)域。文章綜述了紹酶聯(lián)免疫吸附試驗在畜牧行業(yè)中的應(yīng)用進展。關(guān)鍵詞：ELISA；畜牧業(yè)；檢測；農(nóng)藥；疾病TheApplicationP

2、rogressofELISAinAnimalHusbryWUWenjunZHANGYingFANGLiluZHANGFeng(CollegeofAnimalScienceVeterinaryMedicineShanxiAgriculturalUniversityTaigu030801ShanxiChina)Abstract:EnzymeLinkedImmunosbentAssayhastheadvantagesoffastsimpleo

3、perationhighlyaccuratespecificstrongsensitivityeasytostardization.ELISAhasbeenwidelyusedinclinicalmedicinebiologicalchemistryanalyticalchemistryfoodsafetymonitingenvironmentpollutioncontrolanimalhusbryetc.Thispaperrecomm

4、endedtheapplicationprogressofELISAinanimalhusbryindustry.Keywds:ELISAanimalhusbrydetectionpesticidesdisease酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)不僅用于測定抗原，還用于測定抗體。Elisa有3種試劑是必需的：固相的抗原(抗體)、酶標(biāo)記的抗原(抗體)和酶作用的底物。依據(jù)試劑的來源、標(biāo)本的性狀及檢測的條件，可將ELISA技術(shù)分為六種類型：雙抗

5、體夾心法，是檢測抗原最常用的方法；雙位點一步法，是在雙抗體夾心法的基礎(chǔ)上改良的一種方法（如基于單克隆抗體的ELISA）；間接法測抗體，是檢測抗體的最常用方法；競爭法，不僅用于測定抗原，也用于測定抗體；捕獲法；應(yīng)用親和素和生物素的ELISA。1ELISA的原理ELISA的三條基本原理：抗原（或抗體）吸附于固相載體表面，并保持抗原（或抗體）的免疫學(xué)活性；抗原（或抗體）能與酶連接形成酶復(fù)合物，這種酶復(fù)合物依然有免疫學(xué)和酶學(xué)活性；酶復(fù)合物與相應(yīng)

6、抗原（或抗體）結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否存在免疫反應(yīng)，并且顏色反應(yīng)的深度與標(biāo)本中相應(yīng)抗原（或抗體）的量成正比例，因此，可依據(jù)底物顯色的程度來判定試驗結(jié)果。ELISA法是一種敏感及特異的方法，與經(jīng)典的分析方法相比，其敏感度更高、更快更方便、經(jīng)濟上更實惠。2ELISA技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用由于ELISA具有快速、敏感高、簡易、易于標(biāo)準(zhǔn)化、特異性強、污染少等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于畜牧帶的小腸致病性結(jié)腸炎耶爾森氏菌[18]。Stell

7、a等從野生布魯氏菌犬收集到抗原，并研發(fā)成用來診斷犬是否受犬布魯氏菌病的感染的間接ELISA[19]。Carmen等用間接ELISA來診斷委內(nèi)瑞拉山羊自然感染的干酪樣淋巴結(jié)炎(CLA)；Seyffert等用間接ELISA檢測到巴西山羊的假結(jié)核棒桿菌的分泌型蛋白抗體，可確定巴西山羊的干酪樣淋巴結(jié)炎的血清流行病學(xué)[2021]。Whitlock等用ELISA和代謝物培養(yǎng)方法來檢測牛的副結(jié)核病病時，發(fā)現(xiàn)ELISA的敏感性比和代謝物培養(yǎng)方法的要高，

8、但ELISA的特異性不如代謝物培養(yǎng)方法，ELISA比代謝物培養(yǎng)方法簡便、快速和經(jīng)濟的優(yōu)點[22]。Catherine等評估商業(yè)化競爭ELISA檢測法國國內(nèi)反芻動物血清的裂谷熱病毒（RVFV）抗體，結(jié)果表明，敏感性和特異性與制造商推薦的物種特異性閾值一致[23]。Paweska等在非洲用基于重組核衣殼的ELISA來檢測非洲水?？沽压葻岵《镜腎gG抗體，其研究結(jié)果將有助于非洲水牛受RVFV感染的血清流行病學(xué)的研究[24]。Liu等研發(fā)出一種

9、診斷反芻動物泰勒蟲病的間接ELISA，其可鑒定泰勒蟲的免疫顯性蛋白[25]。Rossen等用夾心ELISA來測定急性冠脈綜合征的妊娠相關(guān)血漿蛋白的特異性(PAPPA)，但其不能測定粥樣硬化斑塊中的PAPPA[26]。Molina等用ELISA法對在試驗條件下的奶山羊血清中的寄生線蟲抗體的測定作了初步的研究[27]。Dreyfus等用ApxIVELISA來診斷豬血清的胸膜肺炎放線桿菌感染的抗體，臨床效果不錯，特異性和敏感度分別為100%和

10、93.5%[28]。Ediane等分別用卡介苗(BCG)結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原（MPT51）和三聚抗原(Ag)85作為抗原的間接ELISA來測定牛血清中的結(jié)核病抗體，其中敏感度和特異性最好的是以卡介苗作為抗原的間接ELISA[29]。Bernhard等用一種抗體ELISA檢測屠宰場和農(nóng)場的沙門氏菌時，發(fā)現(xiàn)在農(nóng)場的檢測方法并不能在屠宰場使用，但在監(jiān)測畜產(chǎn)品質(zhì)量時起一定的作用，可減少一定的食品污染[30]。ELISA在疾病診斷方面做了不少的貢

11、獻，但是其的敏感度和特異性有待改善。2.3環(huán)境污染的控制Zhu等研發(fā)出一種適用于檢測水樣、土樣和蔬菜樣品中克百威殘留的直接竟?fàn)嶦LISA，其具有簡便、靈敏度高、特異性強、快速等特點，能高通量分析樣品，可推廣其在安全食品與環(huán)境污染監(jiān)測中的應(yīng)用[31]。Yu等建立一種間接競爭ELISA，其可用于檢測水體、土壤以及農(nóng)產(chǎn)品中乙草胺的殘留分析[32]。Cao等研發(fā)出一個檢測水中溴苯腈的ELISA，并證明其檢測水中的溴苯腈的效果很好[33]。Cro

12、ssan等研發(fā)出一種ELISA可用來檢測帶有農(nóng)藥的水灌溉過的顆粒土地的農(nóng)藥殘留[34]。3小結(jié)畜產(chǎn)品和糧食在人類健康中起重要的作用，為了要保證人類食物的安全，農(nóng)藥的檢測方法必須是快速、敏感和可靠的方法?，F(xiàn)在已經(jīng)研究了很多種的ELISA來檢測家畜食物、畜產(chǎn)品、水、土壤和蔬菜等的農(nóng)藥殘留及診斷動物或人的疾病。通常認(rèn)為，ELISA的準(zhǔn)確度會受緩沖液濃度、鹽濃度、本身物質(zhì)性質(zhì)、提取溶劑、有機溶劑、抗體包被、金屬離子和終pH的影響而導(dǎo)致敏感度不高