hplc常見(jiàn)故障排除完美版

1、HPLC常見(jiàn)故障排除完美版（常見(jiàn)故障排除完美版（1）注意：在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。如果簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。色譜柱的維護(hù)色譜柱的維護(hù)1使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）2大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－7.5，盡量不超過(guò)該

2、色譜柱的pH范圍3避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化4流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理5如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存大乙腈中6壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)HPLC六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)六通閥進(jìn)樣器是高效液相色譜系統(tǒng)中最理想的進(jìn)樣器，它是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。美國(guó)Rheodyne公司的六通閥進(jìn)樣器最為通用，各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進(jìn)樣

3、器。工作原理：1、手柄位進(jìn)樣(Load)位置時(shí)，樣品經(jīng)微量進(jìn)樣針從進(jìn)樣孔注射進(jìn)定量環(huán)，定量環(huán)充滿后，多余樣品從放空孔排出；2、將手柄轉(zhuǎn)動(dòng)至進(jìn)樣(Inject)位置時(shí)，閥與液相流路接通，由泵輸送的流動(dòng)相沖洗定量環(huán)，推動(dòng)樣品進(jìn)入液相分析柱進(jìn)行分析。雖然六通閥進(jìn)樣器具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、壽命長(zhǎng)、日常無(wú)需維修等特點(diǎn)，但正確的使用和維護(hù)將能增加使用壽命，保護(hù)接口設(shè)備，同時(shí)增加分析準(zhǔn)確度。如使用得當(dāng)?shù)脑挘ㄩy進(jìn)樣器一般可連續(xù)進(jìn)樣3萬(wàn)次而無(wú)需維修

4、。以下淺談?dòng)嘘P(guān)六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)事宜(僅供參考)：1、手柄處于Load和Inject之間時(shí)，由于暫時(shí)堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過(guò)高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動(dòng)閥，不能停留在中途。在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。2、六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。

5、使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體積的75％，如20gL的定量環(huán)最多進(jìn)樣15pL的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；使用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20gL的定量環(huán)最少進(jìn)樣60至1001aL的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100ul的平頭進(jìn)樣針配合20ul滿環(huán)進(jìn)樣。3、可根據(jù)進(jìn)樣體積的需要自已制作定量環(huán)，一般不要求精確計(jì)算定量環(huán)的體積，譬8壓緊，然

6、后取下2，再用4將濾網(wǎng)的邊緣壓平平衡色譜柱反相色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在乙腈水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈水互溶。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水“過(guò)渡“。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡如何平衡色譜柱？

7、如何平衡色譜柱？平衡過(guò)程中，將流速緩慢地提高用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑度如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡）色譜柱的再生進(jìn)行色譜柱再生時(shí)，應(yīng)使用一個(gè)謙價(jià)的泵，我們建議最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵。表1建議用來(lái)沖洗的溶劑體積色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積12541.6ml30ml25043.2ml60ml2501020ml400ml請(qǐng)根據(jù)下表選擇您的再生方法：極性固定相（如Si，NH2，DIOL基色譜填料

8、）的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水非極性固定相（如反相色譜填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水0.05M稀硫酸可以用來(lái)清洗已污染的色譜柱注意：在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。如果簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。色譜柱的維