重點分子

1、論述題論述題1.試述試述PCR技術的技術的原理、步驟及其應用原理、步驟及其應用(1)PCR技術實際上是在模板DNA，引物和4種脫氧核糖核苷三磷酸存在的條件下依賴于耐熱DNA聚合酶的酶促合成反應。其原理主要有幾個方面1)DNA合成需要引物，兩條互補鏈上都需要引物；2)DNA的復性與變性的原理；3)PCR技術的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。4)耐高溫的DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)和運用。(2)PCR全過程包括三個基本步驟，即1)雙鏈DNA

2、模板加熱變性成單鏈（變性）；2)在低溫下引物與單鏈DNA互補配對（退火）；3)在適宜溫度下TaqDNA聚合酶催化引物3’OH端加入脫氧核苷酸（延伸）。這三個基本步驟構成的循環(huán)重復進行，可以使特異性DNA的擴增率達到數(shù)百萬倍。(3)PCR技術的應用1)分子生物學領域基因克隆；DNA序列測定；突變分析；基因重組；基因定量；鑒定轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列；轉(zhuǎn)座子插入位點的確定；檢測基因的修飾；2)臨床醫(yī)學領域病原體診斷；遺傳病的基因診斷；器官移植；腫瘤診斷

3、；法醫(yī)學；3)動植物學的研究；4)其他領域如組織和群體生物學、古生物學等。2試述基因診斷的特點及基本技術。試述基因診斷的特點及基本技術。(1)基因診斷的特點為特異性高；靈敏度高；穩(wěn)定性高；診斷范圍廣，適用性強；臨床應用前景好。(2)常用技術包括1)核酸分子雜交技術，其方法主要有斑點印跡、Southern印跡、Nthern印跡、原位雜交、等位基因特異寡核苷酸探針雜交；2)限制性內(nèi)切酶酶譜分析法；3)DNA限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分

4、析；4)PCR技術；5)DNA芯片；6)基因測序。3..舉例說明原癌基因和抑癌基因是如何調(diào)控細胞增殖和細胞凋亡的。舉例說明原癌基因和抑癌基因是如何調(diào)控細胞增殖和細胞凋亡的。(1)原癌基因的編碼產(chǎn)物是生長因子、生長因子受體、胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導分子、轉(zhuǎn)錄因子、cyclin及CDK等。(2)正常情況下，原癌基因的編碼產(chǎn)物為細胞生長所必需。如ras編碼Ras蛋白，是一種小G蛋白，參與細胞內(nèi)生長信號的傳導，從而促進細胞的生長。(3)特定條件下，原癌基因

5、通過點突變、DNA重排、基因擴增、染色體易位、病毒啟動子及增強子的插入等機制活化，過度轉(zhuǎn)導生長信號，導致細胞惡性增殖。(4)抑癌基因的編碼產(chǎn)物起著抑制細胞增殖信號轉(zhuǎn)導、負性調(diào)節(jié)細胞周期的作用，從而抑制細胞增殖，促進細胞凋亡。如p53蛋白可以抑制細胞的生長，同時它也可以促進細胞的凋亡。(5)細胞增殖與凋亡是癌基因和抑癌基因的相互作用的結(jié)果。正常細胞向惡性細胞轉(zhuǎn)化涉及原癌基因活化、抑癌基因失活等因素的綜合作用。(6)癌基因和抑癌基因在某些條

6、件下可以相互轉(zhuǎn)變，如野生型的p53基因?qū)儆谝职┗?，而突變的p53基因卻發(fā)揮癌基因的作用。4試述原核生物和真核生物基因表達調(diào)控特點的異同。試述原核生物和真核生物基因表達調(diào)控特點的異同。(1)相同點轉(zhuǎn)錄起始是基因表達調(diào)控的關鍵環(huán)節(jié)。(2)不同點1)原核基因表達調(diào)控主要包括轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；真核基因表達調(diào)控包括染色質(zhì)活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工多個層次。2)原核基因表達調(diào)控主要為負調(diào)節(jié)；真核基因表達調(diào)控主要為正調(diào)節(jié)。3)原核轉(zhuǎn)錄起

7、始不需要轉(zhuǎn)錄因子，RNA聚合酶直接結(jié)合啟動子，由σ因子決定基因表達的特異性；真核轉(zhuǎn)錄起始需要基礎、特異兩類轉(zhuǎn)錄因子，依賴DNA－蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活。4)原核基因表達調(diào)控主要采用操縱子模型，轉(zhuǎn)錄出多順反子RNA，實現(xiàn)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)；真核基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子RNA，功能相關蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)表達機制更為復雜簡答題簡答題1請簡述基因診斷的基本流程。請簡述基因診斷的基本流程?；蛟\斷的基本流程包括(1)樣品的核酸抽提。(2)目的

8、序列的擴增。(3)核酸分子雜交。(4)信號檢測。進細胞凋亡。13.簡述血管生成的主要過程和主要分子簡述血管生成的主要過程和主要分子血管生成的主要過程和主要分子如下所述(1)血管基底膜降解，由VEGF等促血管生成因子上調(diào)血管內(nèi)皮細胞分泌PA系統(tǒng)及MMPs系統(tǒng)的成員完成。(2)血管內(nèi)皮細胞遷移并且分裂增殖，構成原始血管。主要由VEGF和促血管生成素Ang2和Ang1及其受體介導的信號途徑調(diào)節(jié)。血管內(nèi)皮細胞表面粘附分子也參與這一過程。(3)足

9、夠的、有功能的新血管形成后，促血管生成因子表達下調(diào)，血管生成抑制物增加，血管內(nèi)皮細胞恢復到靜息狀態(tài)，新血管穩(wěn)定。14.簡述簡述Rb的作用機制的作用機制(1)Rb基因是發(fā)現(xiàn)的第一個抑癌基因，編碼產(chǎn)物定位于細胞核，含有病毒蛋白和細胞蛋白的結(jié)合位點及磷酸化位點。(2)低磷酸化的pRb結(jié)合并滅活E2F1，細胞不能通過G1S檢驗點。(3)高磷酸化的pRb不結(jié)合E2F1，相關基因表達，細胞進入S期。(4)CyclinD1CDK4復合體使pRb磷酸化

10、程度增加。15.簡述順式作用元件與反式作用因子對基因表達調(diào)控的影響。簡述順式作用元件與反式作用因子對基因表達調(diào)控的影響。(1)真核基因的轉(zhuǎn)錄激活受順式作用元件和反式作用因子相互作用的調(diào)節(jié)。(2)順式作用元件是指起轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的DNA序列，包括啟動子、增強子、沉默子等。(3)反式作用因子是指起轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的蛋白質(zhì)，又稱為轉(zhuǎn)錄因子，包括基礎轉(zhuǎn)錄因子和特異轉(zhuǎn)錄因子。(4)順式作用元件與反式作用因子之間的作用形式包括DNA－蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)－蛋白

11、質(zhì)相互作用。(5)DNA－蛋白質(zhì)相互作用體現(xiàn)在：啟動子核心序列與基礎轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，是RNA聚合酶結(jié)合所必需的；轉(zhuǎn)錄非核心序列與特異轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)控基因的特異性表達。(6)蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用體現(xiàn)在：轉(zhuǎn)錄因子之間排列組合產(chǎn)生協(xié)同、競爭或者拮抗，決定基因轉(zhuǎn)錄的特異性。16說明真核轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控的復雜性。說明真核轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控的復雜性。(1)轉(zhuǎn)錄起始是真核基因表達調(diào)控的關鍵環(huán)節(jié)，多種因素影響轉(zhuǎn)錄起始復合物的形成，如順式作用元件（起轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用

12、的DNA序列）、轉(zhuǎn)錄因子（起轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的蛋白質(zhì)）等。(2)真核基因的轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控具有復雜性，主要體現(xiàn)在順式作用元件與轉(zhuǎn)錄因子相互作用的復雜性，包括DNA－蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)兩種作用形式。(3)DNA－蛋白質(zhì)相互作用的復雜性：順式作用元件的不同排列組合可以產(chǎn)生多種類型的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)方式；多種轉(zhuǎn)錄因子可結(jié)合相同或者不同的順式作用元件。(4)蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用的復雜性：不同細胞內(nèi)存在的轉(zhuǎn)錄因子種類和濃度不同，存在不同的排列組合方式，產(chǎn)生

13、協(xié)同、競爭或者拮抗效應，精確調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄激活。17簡述乳糖操縱子的正負調(diào)控機制。簡述乳糖操縱子的正負調(diào)控機制。(1)乳糖操縱子包含3個結(jié)構基因（編碼β－半乳糖苷酶、β－半乳糖苷通透酶和轉(zhuǎn)乙?；福?、3個調(diào)控元件（啟動子、操縱基因和CAP結(jié)合位點）和1個調(diào)節(jié)基因（編碼阻遏蛋白）。(2)阻遏蛋白的負調(diào)控：無乳糖時，阻遏蛋白結(jié)合操縱基因，妨礙RNA聚合酶結(jié)合啟動子，抑制結(jié)構基因轉(zhuǎn)錄。有乳糖時，生成別位乳糖（誘導劑）結(jié)合阻遏蛋白，不能封閉操縱基因，