醫(yī)學(xué)免疫學(xué)第五版電子書

1、1第二十二章免疫學(xué)檢測技術(shù)的基本原理第一節(jié)體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點及影響因素（一）抗原抗體反應(yīng)特點1高度特異性抗原與抗體的結(jié)合具有高度特異性，這種特異性是由抗原表位與抗體分子中的超變區(qū)互補結(jié)合所決定的?？臻g構(gòu)型互補程度越高，抗原表位與抗體可變（V）區(qū)之間結(jié)合力越強，抗原抗體結(jié)合的特異性越強，親和力也越高。利用這一特點，在體外可以對許多未知的生物學(xué)物質(zhì)進(jìn)行特異性鑒定。如利用抗傷寒桿菌的抗體檢測傷寒桿菌；也可用已知的抗原（如乙型肝炎病毒）

2、來檢測相應(yīng)的抗體（抗乙型肝炎病毒抗體）。2表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合抗原抗體結(jié)合除了空間構(gòu)象互補外，主要以氫鍵、靜電引力、范德華力和疏水鍵等分子表面的化學(xué)基團(tuán)之間的非共價方式結(jié)合。這種非共價鍵不如共價鍵結(jié)合穩(wěn)定，易受溫度、酸堿度和離子強度的影響而解離，解離后抗原和抗體仍具有原有的特性。解離度主要取決于兩個方面：一是抗體與抗原結(jié)合的親和力（affinity）。親和力指抗體分子單一抗原結(jié)合部位與一個相應(yīng)抗原表位之間互補結(jié)合的強度?？贵w親和力

3、越高，解離度越低；反之抗體的親和力越低，解離度越高。二是抗原抗體反應(yīng)的環(huán)境因素如溫度、酸堿度和離子強度。因此在體外進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)時，要求適當(dāng)?shù)臏囟?、酸堿度和離子強度等條件。34抗原抗體反應(yīng)的兩個階段抗原抗體反應(yīng)可分為兩個階段：第一個階段是抗原抗體特異性結(jié)合階段。抗原分子與抗體分子之間是互補的非共價結(jié)合，該反應(yīng)迅速，可在數(shù)秒鐘至幾分鐘內(nèi)完成，一般不出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)。第二階段為可見反應(yīng)階段，是小的抗原抗體復(fù)合物之間靠正、負(fù)電荷吸引形成較

4、大復(fù)合物的過程。此階段所需時間從數(shù)分、數(shù)小時至數(shù)日不等，且易受電解質(zhì)、溫度和酸堿度等條件的影響。（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素1電解質(zhì)抗原、抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點分別為pH3~5和5~6不等，在中性或弱堿性條件下，表面帶有較多的負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會使他們失去一部分的負(fù)電荷而相互結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)塊或沉淀物。實驗中常用0.85%的NaCl或其他離子溶液作稀釋液，以提供適當(dāng)濃度的電解質(zhì)。2溫度適當(dāng)提高反應(yīng)的溫度可增加抗原與

5、抗體分子的碰撞機會，加速抗原抗體復(fù)合物的形成。在一定范圍內(nèi)，溫度越高，形成可見反應(yīng)的速度越快。但溫度過高（56℃以上），可使抗原或抗體變性失活，影響實驗結(jié)果。通常37℃是抗原抗體反應(yīng)的最適溫度。3酸堿度抗原抗體反應(yīng)的最適pH在6~8之間，pH過高或過低，均可直接影響抗原、抗體的理化性質(zhì)。此外，當(dāng)抗原抗體反應(yīng)液的pH接近抗原或抗體的等電點時，抗原抗體所帶正、負(fù)電荷相等，由于自身吸引而出現(xiàn)凝集，導(dǎo)致非特異性反應(yīng)，即假陽性反應(yīng)。第二節(jié)檢測抗原

6、和抗體的體外試驗抗原和其相應(yīng)抗體在體外相遇可發(fā)生特異性結(jié)合，由于該反應(yīng)是高度特異性的，因此可以用已知的抗原（或抗體）來檢測未知的抗體（或抗原）。由于抗原物理性狀的差異或參加反應(yīng)的其他輔助成分的不同，可出現(xiàn)不同類型的反應(yīng)。如凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、中和反應(yīng)及免疫標(biāo)記技術(shù)等。實驗所采用的抗體常存在于血清中（還可存在于關(guān)節(jié)液、腦脊液、腹水及胸水中），因此習(xí)慣上將體外的抗原抗體反應(yīng)稱之為血清學(xué)反應(yīng)（serologicalreaction）或血清學(xué)試